藏藥甘青青蘭研究進(jìn)展*

康燕

（西藏藏醫(yī)藥大學(xué)，西藏 拉薩 850000）

藏藥甘青青蘭(Dracocephalum tanguticum Maxim)，又名唐古特青蘭，是唇形科多年生草本植物，花和葉子均為蘭色，藏藥常用藥材之一。甘青青蘭味甘、性寒、苦就有香味，藏語叫“知羊格”［1］。藏醫(yī)用甘青青蘭上部分入藥，具有清肝熱、干黃水、愈瘡、止血等作用［2］，還用于治療肝、胃熱、黃水瘡口不愈、出血等癥狀［3］，其幼苗常用來治療腹水和浮腫［2］。近年來，各相關(guān)研究者對(duì)甘青青蘭生物學(xué)特征［4］、理化特征［5］、顯微特征［6］、化學(xué)成分［7-10］、藥用價(jià)值［11］、種子萌發(fā)等做了大量的研究［12-13］。本文結(jié)合文獻(xiàn)近幾年的研究報(bào)告，對(duì)甘青青蘭目前的研究進(jìn)展進(jìn)行簡單綜述。

1 甘青青蘭的資源分布

1.1 甘青青蘭在全國的主要分布

甘青青蘭主要分布于我國的西藏東南部［13］、甘肅西南部、四川西部及青海東部海拔1900m～4000m干燥河谷的河岸、田野、草灘或松林邊緣。

1.2 甘青青蘭在西藏地區(qū)的主要分布

甘青青蘭主要分布于西藏的拉薩、林州、八宿、吉隆、索縣、芒康、察隅、乃東、尼木、當(dāng)雄、定日、波密、江孜、曲松等地。它生長于海拔3000m～5100m的半濕潤至半干旱的高原山地及河谷，較耐旱而喜溫和氣候，主要生長在陽坡上，陰坡生長較少［14］。

2 甘青青蘭的生物學(xué)研究

2.1 甘青青蘭的植物學(xué)特征

甘青青蘭是唇形科多年生草本植物，莖直立、節(jié)多、葉片輪廓橢圓狀卵形或橢圓形，花冠紫藍(lán)色至暗紫色，外被短毛唇形花絲被短毛。甘青青蘭花期為7—8月份［13］。

2.2 甘青青蘭的顯微學(xué)特征

甘青青蘭莖表皮細(xì)胞類方形1列，排列緊密，內(nèi)含棕色物質(zhì)，表皮上可見氣孔和非腺毛殘基。皮層較窄，內(nèi)皮層不明顯。皮層由10 余列薄壁細(xì)胞私包構(gòu)成，在四個(gè)角隅處有大量板狀結(jié)構(gòu)的后組織分布。

葉的表皮細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，密布不定式氣孔，周圍角質(zhì)線紋明顯，非腺毛呈錐形，橫切面上表皮細(xì)胞呈類圓形和類方形，表皮細(xì)胞大，角質(zhì)層明顯，外具短錐形單細(xì)胞非腺毛，柵欄組織二層，海綿組織中有一列有5～6 個(gè)細(xì)胞排成的平行分泌腔。下表皮細(xì)胞密生2～3個(gè)細(xì)胞非腺毛。

2.3 甘青青蘭的理化特征測試

取甘青青蘭粉末5g，加入40mL乙醇，加熱回流1h后冷卻過濾，將濾液調(diào)至含醇量為70%，再用石油醚除去綠葉中的葉綠素，取下層乙醇液為供試液：

2.3.1 化學(xué)法。取供試液2mL，向供試液中加入幾滴鹽酸溶液和少量鎂粉溶液由無色變成紅色。

2.3.2 熒光法。取濾紙一張，在濾紙上滴1～2 滴供試液，晾干后在濾紙噴5%的三氯化鋁乙醇溶液，至于紫外燈下觀察顯綠色熒光。取其粉末至于紫外燈下觀察粉末顯黃色熒光。

2.3.3 薄層層析法TCL。取供試液4mL 于試管中并加熱蒸干，蒸干后向試管中加入4mL 5%的鹽酸溶液，過濾，用氨水將濾液調(diào)至堿性，再用氯仿提出三次并合并濃縮至5mL，取適量點(diǎn)樣，吸附劑為硅膠G，展開劑為4:1:1的正丁醇、乙醇、水的混合溶液，展開曬干后噴以改良后的碘化秘鉀試劑，置于紫外燈下觀察有3個(gè)紅色斑點(diǎn)顯現(xiàn)。

3 甘青青蘭的化學(xué)成分

甘青青蘭化學(xué)成分復(fù)雜，主要含有無機(jī)元素、揮發(fā)油、黃酮類、萜類、甾醇類、多糖類等。

3.1 無機(jī)元素

甘青青蘭中含有多種微量元素，李文娟等［10］采用火焰原子吸收光譜法測定了藏藥甘青青蘭原藥及水煎液等化學(xué)形態(tài)中Zn、Cu、Fe、Mn、Pb、Cd 等微量元素的含量，其含量順序依次為：Fe＞Mn＞Zn＞Cu＞Pb＞Cd。

孫躍寧等［16］研究了產(chǎn)自青海大通、互助和貴德三縣甘青青蘭中重金屬的含量，發(fā)現(xiàn)這三縣甘青青蘭藥材中重金屬Pb、As、Hg含量均低于國家標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 揮發(fā)油

揮發(fā)油是植物藥中非常重要的一類化學(xué)成分，利毛才讓等［17］利用氣相-質(zhì)譜(GC-MS)技術(shù)和峰面積歸一法鑒定出了23 種化合物，并給出了23 種化合物的相對(duì)含量，其分別為甲苯(0.417%)、3-側(cè)柏烯(0.544%)，tR(min)=7.560、4(10)-側(cè)柏烯(0.983%)、5-異丙烯-1-甲基-環(huán)己烯(0.793%)、桉油精(9.306%)、3-側(cè)柏烯（0.068%,tR(min)=11.04）、3-丁基-吡啶(0.001%)、N，N′-雙(2-甲基-2-亞硝基戊醛-4 酮)(0.030%)、芳樟醇(0.539%)、1-乙酰-3-(4-氮苯基)-二氫吡唑(0.027%)、苯 甲基硅烷(0.080%)、松香酮(0.347%)、對(duì)孟-1-烯-8-醇(0.080%)、側(cè)柏醛(0.115%)、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-3 醇、2-氨基苯甲酸酯(0.451%)、2,6,6-三甲基-二環(huán)［3.1.0］庚基-2-烯-4-乙酯(1.066%)、(-)-反-反-松香乙酯(60.300%)、4-(苯甲氧基亞甲基)乙酰苯(1.119%)、香葉醇-甲酯(0.058%)、Bron,diethyl［2,4-penanedionate］(0.032%)、表 二環(huán)倍 半水 芹烯(0.081%)、2-羥基-2-(2-氧代-2-對(duì)-甲苯基-乙基)-5-甲苯基-呋喃-3-酮(0.056%)、2-(2-甲基-1-苯并噻吩-3-基)乙酰胺(0.388%）?？梢钥闯龈是嗲嗵m的主要揮發(fā)油成分是(-)-反-反-松香芹乙酯、桉油精。黃小平等18］采用水蒸氣蒸餾法和GC-MS 法鑒定出了36個(gè)化合物，化合物占總揮發(fā)油的(85.24%)，揮發(fā)油的主要化學(xué)成分為石竹烯氧化物、石竹烯、桉葉油素、杜松醇、大根香葉酮、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇、(-)-反-松香芹乙酸酯、4-甲基-1-(1-甲基乙基)-3-環(huán)己烯-1-醇、(-)-匙葉桉油烯醇等。王鋼力［19］等利用GC-MS 技術(shù)鑒定了42 種化合物，并用面積歸一法確定了個(gè)化合物的相對(duì)含量，其主要化學(xué)成分和含量分別為桉油精(20.99%)、2,6,6-三甲基-(1α，2α，5α)-二環(huán)［3,1,1］庚烷-3-酮(2.25%)、N-乙基-對(duì)-甲苯胺(47.22%)、(-)-桃金娘烯乙酸酯(3.59%)等。同時(shí)周雪杉等［20］利用柱層析法首次從該屬植物中分離得到了(-)-反-松香芹乙酸酯。

3.3 黃酮類

甘青青蘭還有多種黃酮類物質(zhì)，張曉峰等［21］從甘青青蘭分離出了5種黃酮類化合物，其中胡麻苷-6′′-乙酸酯是一種新發(fā)現(xiàn)的天然產(chǎn)物。Liu、沈杰等［22、7］采用硅膠色譜和凝膠柱LH-20 色譜從甘青青蘭中分離出了9 種黃酮類化合物，分別為5,4′-二羥基-6,7-二甲氧基黃酮-4′-O-D 葡糖糖苷、5,3′,4′-三羥基-6,7-二甲氧基黃酮、胡麻苷-6′′-醋酸酯、胡麻黃素、cirsliliol-4′-葡糖糖苷、胡麻苷、5,6,4′-三羥基-7-甲氧基黃酮、芹菜素-7-O-D-葡糖糖苷、5,7,4′-三羥基-3′,5′-二甲氧基黃酮。其中化合物胡麻苷、芹菜素-7-O-D-葡糖糖苷、5,4′-二羥基-6,7-二甲氧基黃酮-4′-O-D葡糖糖苷為首次從該植物中分離得到的。

3.4 萜類

甘青青蘭含有大量的二萜、三萜類化合物。周雪杉等［22］通過多種柱層析和重結(jié)晶方法從甘青青蘭石油醚部位分離得到了2種三萜類化合物，分別為α-香樹酯醇和羽扇豆醇，兩種化合物為首次從該化合物中分離得到的。李霽昕等［23］利用柱層析、薄層層析、重結(jié)晶等從采自甘肅漳縣的甘青青蘭植物中分離得到了6 種萜類化合物，其中化合物羽扇豆烷-20(29)-烯-28-酸-3-醇和齊墩果酸為首次從該植物中分離得到。鄭洪婷等［8］采用硅膠柱色譜法和波譜技術(shù)，從甘青青蘭的超臨界提取物中鑒定出了5 種萜類化合物，分別為熊果酸、齊墩果酸、3β，20α-二羥基烏蘇烷-21(22)-烯-28-酸、白樺酯醇、正三十三烷烴，其中化合物3β，20α-二羥基烏蘇烷-21(22)-烯-28-酸是首次從該屬植物中分離得到。牛迎鳳等［24］運(yùn)用反相高效液相色譜法，在λ 為215nm 條件下檢測到產(chǎn)自青海甘青青蘭植物中齊墩果酸的含量為0.32%.

3.5 甾醇類

甾醇類化合物按來源分類可以分為植物甾醇、動(dòng)物甾醇、菌類甾醇三類。李霽昕等［23］利用柱層析、薄層層析、重結(jié)晶等從采自甘肅漳縣的甘青青蘭植物中分離得到了4種甾醇類化合物，分別為豆甾-4-酮、β-胡蘿卜苷、β-谷甾醇-3-O-葡糖糖(6-1)-十六烷酸苷、β-谷甾醇，4 種化合物均為首次從該屬植物中分離得到。周雪杉等［20］從甘青青蘭石油醚部位分離得到了β-谷甾醇。

3.6 糖類

多糖類物質(zhì)可直接參與人體代謝過程，可促進(jìn)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力。目前對(duì)甘青青蘭多糖類成分的研究較少，主要集中在提取工藝方面，高生英等［25］采用水提醇沉淀法提取多糖，正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)化多糖提取工藝。硫酸-苯酚法測定多糖，提出多糖的最佳提出條件為料液比1:40，提取時(shí)間為30min，提取溫度為80℃，對(duì)多糖提取率的三個(gè)影響因素做了比較，分別為：料液比＞提取時(shí)間＞提出溫度。

4 甘青青蘭的藥理作用

4.1 抗氧化作用

靳涵［26］通過對(duì)大鼠組織/血漿中丙二醛、大鼠肝臟組織超氧化歧化酶(SOD)及大鼠血液中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Ps)活力的檢測試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)甘青青蘭提取物具有抗細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的作用，同時(shí)肝臟組織超氧化歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Ps)活力均顯著提高。

4.2 抗缺氧作用

葉于聰?shù)龋?7］給大小鼠胃部灌藥或腹腔注射甘青青蘭水提物，通過密閉缺氧、減壓缺氧、紅細(xì)胞超氧化歧化酶(SOD)活性測定，以及模擬6000m 減壓條件下肝臟脂質(zhì)過氧產(chǎn)物丙二醛(MDA)、血紅蛋白(Hb)、血球壓積(Hct)測定實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)甘青青蘭水提取物可以顯著提高小鼠對(duì)密閉、減壓缺氧的耐受力、大小鼠紅細(xì)胞SOD 的活性以及降低小鼠MDA、Hb 和Hct。海平等［28-29］研究表明，藏藥甘青青蘭水提液具有降低動(dòng)物整體耗氧量、抗密閉缺氧、減壓缺氧作用，可延長靜脈空氣栓塞小鼠、雙側(cè)靜脈結(jié)扎小鼠、夾閉器官小鼠和異丙腎上腺所致小鼠心肌損傷致死的存活時(shí)間以及斷頭小鼠張口動(dòng)作的持續(xù)時(shí)間，對(duì)KSN、NaNO2所致的組織缺氧有明顯保護(hù)作用，提高缺氧動(dòng)物紅細(xì)胞超氧化歧化酶(SOD)活性，組織脂質(zhì)過氧化物大量續(xù)積，清除氧自由基，減輕缺氧所造成的心、腦、肺、肝及腎組織病理學(xué)損傷,但給小鼠ip 和ig 給藥均未發(fā)現(xiàn)耐高溫和抗疲勞作為。周生祥等［30］在于葉聰?shù)妊芯康幕A(chǔ)上進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)給大、小白鼠給藥3.3/kg.d 可顯著提高白鼠紅細(xì)胞過氧化物歧化酶的活性，當(dāng)給藥6.6/kg.d 時(shí)活性無明顯變化。許金秀［31］研究發(fā)現(xiàn)，唐古特青蘭提取物(DME，總黃酮含量為52%)可能通過對(duì)腦缺氧的抗氧化作用及刺激神經(jīng)營養(yǎng)因子的合成，對(duì)腦缺血誘導(dǎo)的腦損傷產(chǎn)生治療作用。

4.3 抑菌作用

甘青青蘭提取物具有很好的抑菌作用。胡君茹等［11］研究表明，甘青青蘭(炒制)水提取物、生藥材水提取物、生藥材乙醇提取物在一定濃度(0.15g/mL，0.2g/mL)對(duì)金黃色葡糖球菌有抑制或殺菌作用，高濃度的甘青青蘭(炒制)的水提取物和乙醇提取物對(duì)銅綠假單胞菌有抑制作用，而對(duì)大腸桿菌和糞腸桿菌無抑制作用。靳涵等［26］研究表明甘青青蘭的提取物在低中敏度范圍內(nèi)對(duì)金黃色葡萄球菌、革蘭氏陰性細(xì)菌、耐藥性表皮葡萄球菌、大腸埃希氏菌、糞腸球菌、銅綠假單胞菌、臘狀芽孢桿菌、枯草桿菌及白色念珠球菌均有不同程度的抑菌作用，最小抑菌質(zhì)量濃度為5mg/mL～25mg/mL。

4.4 保肝、抗乙肝病毒作用

沈杰等［7］研究表明，給昆明種小鼠胃部給150mg/kg的甘青青蘭正丁醇萃取物可明顯降低四氯化碳肝損傷小鼠的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，其乙酸乙酯萃取物(R,S)-迭香酸正丁酯具有抗HBV 作用，化合物迷迭香酸具有一定的抗HBV作用。

4.5 抗肝癌作用

從藥用植物中提取的生物堿、黃酮及二萜類化合物具有良好的抗肝癌活性。鄭思建等［32］研究發(fā)現(xiàn)甘青青蘭的乙酸乙酯提取物對(duì)SMMC-7721 和HepG2 細(xì)胞顯示出了良好的抗癌活性，其IC50值分別為33.1 μg/mL 和39.9 μg/mL，且對(duì)L-02細(xì)胞的毒性較小。

5 甘青青蘭的繁育技術(shù)研究

種子繁育技術(shù)是植物的一種有性繁殖方式，是實(shí)現(xiàn)植物人工繁育栽培方面運(yùn)用最廣泛、最重要的技術(shù)。研究野生藏藥材馴化繁育對(duì)于保護(hù)瀕危野生藏藥材資源、發(fā)展藏藥材產(chǎn)業(yè)以及藏藥種子種苗繁育基地建設(shè)具有很好的推動(dòng)作用［33］。祿亞洲等［34］分別用濃度為0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L水楊酸(SA)和蒸餾水處理(CK)浸種甘青青蘭24h，結(jié)果表明，用SA浸種可以促進(jìn)種子萌發(fā)，并通過增強(qiáng)植物抗?jié)B透脅迫能力，降低細(xì)胞膜脂過氧化損傷，提高甘青青蘭幼苗的抗旱能力，且0.6mmol/L 水楊酸浸種24h 后，甘青青蘭種子萌發(fā)效果最好，種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)較CK 分別提高了34.82%、34.42%、34.87%和54.86%.郭尚磊等［3］用濃度分別為50mg/kg、100mg/kg、400mg/kg 的赤霉素溶液、常溫蒸餾水浸種2h，結(jié)果表明，不同濃度赤霉素浸種甘青青蘭種時(shí)對(duì)種子的發(fā)芽勢有促進(jìn)作用，赤霉素濃度為400mg/kg時(shí)其促進(jìn)作用最大，平均發(fā)芽勢和發(fā)芽率均達(dá)到最高，分別為36.67%和51.00%，較不浸種處理分別提高了9.33%和20.67%，但對(duì)種子發(fā)芽時(shí)間無影響。尹秀等［12］研究表明，鹽脅迫和干旱脅迫能抑制甘青青蘭種子的萌發(fā)，隨著鹽濃度和PEG-6000 溶液濃度的升高種子的發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)、萌發(fā)后胚根胚軸的長度均呈下降趨勢，且甘青青蘭種子對(duì)鹽的耐受性強(qiáng)弱為：NaCI＞NaSO4＞NaCO3。

6 展望

藏藥是我國民族醫(yī)學(xué)寶庫中的瑰寶。由于野生藥材資源數(shù)量有限，因此，建設(shè)藏藥材種子種苗繁育基地是發(fā)展藏醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)、保護(hù)野生藏藥資源的必由之路。種子種苗是藏藥材生產(chǎn)的物質(zhì)基礎(chǔ)，建設(shè)藏藥材種子種苗繁育技術(shù)有利于保障優(yōu)質(zhì)藏藥材的生產(chǎn)，而優(yōu)良品種及優(yōu)質(zhì)的種子種苗是實(shí)現(xiàn)藏藥材規(guī)范化生產(chǎn)的基礎(chǔ)和首要條件，是從源頭把握好藏藥材、藏藥材飲片及藏藥產(chǎn)品質(zhì)量的重要保障。運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段，發(fā)展壯大藏醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)，保護(hù)野生藏藥資源，合理開發(fā)利用藏藥資源，實(shí)現(xiàn)大面積的人工栽培，是目前藏藥研究中最有意義的工作。