基于快速檢測的煙草番茄斑萎病防控技術(shù)

閆 鼎，蔡憲杰，宋明健，李德文，倪 霞，未啟立，尚海麗，夏文凱，盤文政，肖家繁，李文陸，桂龍鳳，趙學(xué)通，張志紅

（1.上海煙草集團(tuán)有限公司，上海 200082；2.云南省煙草公司昭通市公司，云南昭通 657000；3.云南省微生物發(fā)酵工程研究中心有限公司，昆明 650217；4.華環(huán)國際煙草有限公司，安徽滁州 233121）

番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）隸屬于布尼亞病毒目（Bunyavirales）番茄斑萎病毒科（Tospoviridae）正番茄斑萎病毒屬（Orthotopoviruses），是危害煙草的主要病毒［1，2］。自20 世紀(jì)90 年代傳入中國以來，該病毒迅速擴(kuò)張，侵染超過1 090 種植物，嚴(yán)重影響中國經(jīng)濟(jì)、糧食作物的生長和產(chǎn)量，甚至導(dǎo)致絕收，給農(nóng)戶造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失［3，4］。煙草是云南省昭通市昭陽區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)支柱產(chǎn)業(yè)，番茄斑萎病連年發(fā)生，導(dǎo)致煙草大量減產(chǎn)，迫切需要建立一套病毒病早發(fā)現(xiàn)、早上報(bào)、早防治的綜合方法。

煙草番茄斑萎病的防控大多通過化學(xué)、物理、生物等手段控制傳毒介體薊馬的數(shù)量。云南省煙草公司昭通市公司利用薊馬對紫外光的忌避及對藍(lán)色的趨性，在煙田上鋪銀色地膜，煙田內(nèi)懸掛信息素藍(lán)板，將煙株番茄斑萎病的發(fā)病率控制在5%以內(nèi)［5］。穆青等［6］通過釋放捕食類螨，發(fā)現(xiàn)煙草番茄斑萎病防治效果可達(dá)66.97%。游堂貴等［2］通過小區(qū)試驗(yàn)，施用1%香菇多糖水劑、3%超敏蛋白微粒劑、5%氨基寡糖素水劑和2%嘧肽霉素水劑4 種病毒抑制劑，發(fā)現(xiàn)3%超敏蛋白微粒劑對煙草番茄斑萎病的防效好，其防治效果高達(dá)59.91%。

番茄斑萎病毒病為云南省煙區(qū)煙草主要病毒?。?］。于海芹等［7］調(diào)查云南省主要煙區(qū)TSWV 陽性數(shù)情況，其中昭通市昭陽區(qū)煙草及周邊雜草的TSWV 陽性數(shù)達(dá)100%，嚴(yán)重影響了煙株的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，成為制約昭陽區(qū)煙草生產(chǎn)發(fā)展的瓶頸。有關(guān)控制該病毒傳播者薊馬的藥劑防治效果不太理想。膠體金免疫層析技術(shù)（Gold immuno-chromatography assay，GICA）具有操作簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確、無需特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)［8］，在醫(yī)學(xué)、動(dòng)植物檢疫、食品安全監(jiān)督等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用［9-12］。本研究采用膠體金免疫層析快速檢測技術(shù)檢測煙株攜帶番茄斑萎病毒（TSWV）的情況，通過設(shè)計(jì)3 組田間小區(qū)試驗(yàn)，對昭通市煙區(qū)常見的番茄斑萎病快速檢測技術(shù)進(jìn)行探索性研究，在此基礎(chǔ)上研究低毒化學(xué)農(nóng)藥施用時(shí)期、施用量和施用次數(shù)，以期建立一套病毒病綜合防治方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)

試驗(yàn)時(shí)間：2020 年3—10 月。

試驗(yàn)地點(diǎn)：昭通市昭陽區(qū)蘇家院鄉(xiāng)迤那村。該地塊烤煙2016—2019 年長年連作，導(dǎo)致番茄斑萎病、馬鈴薯Y 病毒病等病害發(fā)生越來越嚴(yán)重。

1.2 試驗(yàn)材料

供試品種：云煙121。

供試藥劑：嘧肽·嗎啉胍、氨基寡糖素、超敏蛋白、膠體金免疫層析快速檢測試紙（購自鄭州左安檢測科技有限公司）。

1.3 病毒病的快速檢測

試驗(yàn)地在移栽前檢測煙苗帶毒情況，移栽后每隔7 d 利用膠體金免疫層析快速檢測試紙對煙株番茄斑萎病和馬鈴薯Y病毒病帶毒情況進(jìn)行快速檢測。

1.4 病毒病田間防治小區(qū)試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)“1.3”的檢測結(jié)果，以清水為對照，設(shè)置小區(qū)試驗(yàn)研究不同藥劑及用量對病毒病的防治效果，試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1 所示。

表1 病毒病防治試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.5 煙株番茄斑萎病發(fā)病情況調(diào)查

用藥前調(diào)查一次病害，以后每次用藥后10 d 或15 d 分別進(jìn)行調(diào)查，最后一次用藥后5 d 調(diào)查。按照《GB/T 23222—2008 煙草病蟲害分級及調(diào)查方法》［13］，以株為單位，對各處理煙株病毒病發(fā)病情況進(jìn)行調(diào)查記錄，并計(jì)算病株率和病情指數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

記錄各級發(fā)病株數(shù)，根據(jù)公式計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)及防控效果。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2010 軟件進(jìn)行分析，計(jì)算公式如下。

2 結(jié)果與分析

2.1 病毒病快速檢測結(jié)果

為了檢測煙苗以及移栽后每隔7 d 煙株帶毒情況，利用膠體金快速檢測試紙對煙株番茄斑萎病和馬鈴薯Y 病毒病進(jìn)行快速檢測，結(jié)果如表2 所示。從表2 中可以看出，試驗(yàn)地的煙苗不帶毒，在5 月18日，接近團(tuán)棵期時(shí)，番茄斑萎病的檢測結(jié)果為陽性，馬鈴薯Y 病毒病的檢測結(jié)果仍為陰性。

表2 試驗(yàn)地番茄斑萎病和馬鈴薯Y 病毒病快速檢測結(jié)果

2.2 病毒病田間病情和防控效果

如表2 所示，5 月18 日在試驗(yàn)地檢測出煙株帶番茄斑萎病的病原菌，因此從5 月18 日開始施用藥劑對番茄斑萎病進(jìn)行防治。各處理煙株番茄斑萎病株率、病情指數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。從表3 中可以看出，隨著時(shí)間的推移，各處理煙株番茄斑萎病的病株率和病情指數(shù)均呈上升趨勢，以清水對照的上升趨勢最明顯；藥劑處理之間，以T3 處理和T5 處理的上升趨勢較明顯，T6 處理的次之，T2 處理和T4 處理的相對平緩。

表3 煙株番茄斑萎病病株率及病情指數(shù)調(diào)查結(jié)果

不同處理對煙株番茄斑萎病的防效統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表4。從表4 中可以看出，T4 處理的防效最好，T2 和T3 的次之，T6 的稍差，T5 的最差。說明氨基寡糖素連續(xù)噴霧3次對番茄斑萎病的防效最好，達(dá)60.24%。

表4 不同處理對煙株番茄斑萎病的防效統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

利用快速檢測試紙對煙葉進(jìn)行檢測，可以提前預(yù)測煙草病毒病的發(fā)生，從而提前預(yù)防。隨著時(shí)間的推移，各處理煙株番茄斑萎病的病株率和病情指數(shù)均呈上升趨勢，以清水對照的上升趨勢最明顯，氨基寡糖素連續(xù)噴霧3 次的上升趨勢較緩。不同處理對煙株番茄斑萎病的防效統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，氨基寡糖素連續(xù)噴霧3 次對番茄斑萎病的防治效果最好，達(dá)60.24%；波爾多液連續(xù)噴霧3 次的防效次之，為51.89%；氨基寡糖素連續(xù)噴霧2 次的防效接近波爾多液的防效，為47.32%；超敏蛋白連續(xù)噴霧3 次和2次的防效均較差，分別為43.94%和31.81%。游堂貴等［2］研究表明，5%氨基寡糖素水劑1 000 倍液處理的煙草TSWV 的防治效果為38.21%±9.65%。龍光泉等［14］通過試驗(yàn)證明，在煙草病毒病發(fā)病前或發(fā)病初期連續(xù)施用5%氨基寡糖素AS 3 次，每次間隔7 d，每公頃施用750 g，其防治效果達(dá)73.95%，與本研究結(jié)果接近，與游堂貴等［2］的研究結(jié)果不同，究其原因可能是所施用的氨基寡糖素濃度遠(yuǎn)低于本研究。

綜上所述，通過在昭通市昭陽區(qū)蘇家院鄉(xiāng)迤那村的田間試驗(yàn)初步建立了一套基于快速檢測的病毒病綜合防治技術(shù)，即利用膠體金快速檢測試紙?jiān)谝圃郧皺z測煙苗帶毒情況，移栽后每隔7 d 對煙株主要病毒病的帶毒情況進(jìn)行快速檢測，當(dāng)病毒病檢測結(jié)果呈陽性時(shí)使用氨基寡糖素噴霧防治，連續(xù)用藥3次，間隔10 d，每次用量1 500 mL/hm2，對病毒病的防效在60%左右。