• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    甘薯PHB基因家族的全基因組鑒定和表達(dá)分析

    2023-04-12 01:38:18梅玉琴朱國(guó)鵬楊新筍
    作物學(xué)報(bào) 2023年6期
    關(guān)鍵詞:甘薯擬南芥元件

    梅玉琴 劉 意 王 崇 雷 劍 朱國(guó)鵬 楊新筍,*

    研究簡(jiǎn)報(bào)

    甘薯PHB基因家族的全基因組鑒定和表達(dá)分析

    梅玉琴1,2,**劉 意1,**王 崇2,3雷 劍2朱國(guó)鵬1,*楊新筍2,*

    1海南大學(xué)園藝學(xué)院 / 海南省熱帶園藝作物品質(zhì)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 海南???570228;2湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所, 湖北武漢 430064;3長(zhǎng)江大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 湖北荊州 434025

    蛋白質(zhì)抑制素(prohibitin, PHB)是在原核生物到真核生物中發(fā)現(xiàn)的含有SPFH結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)。植物PHB基因家族參與多種不同生物過程的重要功能, 包括生長(zhǎng)發(fā)育以及對(duì)生物和非生物脅迫的響應(yīng)。目前PHB蛋白在擬南芥、水稻、玉米、大豆、番茄和陸地棉等多種植物中被鑒定。但對(duì)甘薯中PHB家族的系統(tǒng)分析仍未確定。本研究鑒定出甘薯11個(gè)PHB基因, 且對(duì)這些保守的蛋白質(zhì)基序和基因結(jié)構(gòu)的分析顯示它們?cè)谙到y(tǒng)發(fā)育亞群中具有高度的保守性。此外, 啟動(dòng)子區(qū)域預(yù)測(cè)出與多種激素調(diào)節(jié)及脅迫相關(guān)的順式作用元件, 同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)基因在植物不同部位及受到不同的非生物脅迫時(shí)的表達(dá)模式存在差異。本研究系統(tǒng)分析了甘薯中基因的一般特性, 為甘薯及其他植物中PHB基因的功能特性研究提供了理論基礎(chǔ)。

    甘薯; PHB基因家族; 系統(tǒng)進(jìn)化; 生物信息學(xué); 表達(dá)分析

    抑制素(prohibitin, PHB)是一類從原核生物到真核生物物種中普遍存在的高度保守蛋白, 也被稱為 band_7結(jié)構(gòu)域或SPFH (stomatin/prohibitin/flotillin/HflK/C)結(jié)構(gòu)域蛋白[1-2]。PHB家族是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子家族, 廣泛存在于綠色植物中, 調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及響應(yīng)非生物脅迫等多種生理過程[3]。PHB基因是1995年在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn), 由于其具有抗細(xì)胞增殖的作用, 是一種潛在的腫瘤抑制基因, 因此被命名為抑制素基因[4]。后在人類中, PHB基因被發(fā)現(xiàn)與乳腺癌表型相關(guān)[5-6], 其中PHB定位于一些乳腺癌細(xì)胞系的細(xì)胞核中, 作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子, 與E2F、P53和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Rb)相互作用, 以調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)[7]。因此, PHB基因可以作為一種腫瘤抑制因子, 調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞凋亡。現(xiàn)已有研究發(fā)現(xiàn), PHB基因在植物發(fā)育和衰老中也起著重要作用。和是擬南芥中研究最廣泛的PHB基因, 它們主要在根和莖的增殖組織中表達(dá)[8]。擬南芥突變體表現(xiàn)出嚴(yán)重的生長(zhǎng)表型遲緩, 莖部、根部增殖減少, 根尖和根尖細(xì)胞分裂下降。過表達(dá)擬南芥PHB基因(/)表現(xiàn)出不規(guī)則的葉形和廣泛的分枝表型。值得注意的是,/雙敲除突變體不能存活, 這表明PHBs在植物發(fā)育中發(fā)揮了重要作用。在煙草中也得到了類似的結(jié)果,和在衰老過程中表達(dá)下調(diào)?;虺聊瑢?dǎo)致植株嚴(yán)重的生長(zhǎng)延遲、葉片變黃變和細(xì)胞死亡[9]。一些研究表明, PHB蛋白不僅在植物發(fā)育和衰老中發(fā)揮關(guān)鍵作用, 而且在響應(yīng)鹽度、防御和植物激素中也發(fā)揮關(guān)鍵作用。例如, 擬南芥()突變體在乙烯暴露后表現(xiàn)出黃化的幼苗表型, 各種乙烯誘導(dǎo)基因(擬南芥乙基響應(yīng)元件結(jié)合蛋白(), 植物防御素())的表達(dá)受到抑制, 表明在擬南芥中具有雙重作用[10-11]。目前, PHB基因家族已在擬南芥(17)、水稻(19)[3]、大豆(24)[12]、番茄(16)[13]、陸地棉(28)[14]和玉米(16)[15]中得到了鑒定。

    甘薯((L.) Lam.)屬旋花科番薯屬, 營(yíng)養(yǎng)豐富, 是世界第七大糧食作物, 也可用作飼料、工業(yè)原料和生物質(zhì)能源[16-17]。中國(guó)是世界上最大的甘薯種植及生產(chǎn)國(guó), 年種植面積穩(wěn)定在4×106hm2左右, 占全球總種植面積的57%, 產(chǎn)量高達(dá)22,500 kg hm–2 [18]。隨著全球甘薯產(chǎn)業(yè)的飛速發(fā)展, 甘薯的產(chǎn)量和品質(zhì)也受到低溫、高溫、高鹽及干旱等非生物脅迫和各種病害的嚴(yán)重威脅, 造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[19]。但甘薯中PHB基因家族的研究鮮有報(bào)道, 本試驗(yàn)通過生物信息學(xué)方法系統(tǒng)分析了甘薯PHB基因的理化特性、亞細(xì)胞定位、基因結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域、啟動(dòng)子順式元件、在不同組織中的表達(dá)和在非生物脅迫下的表達(dá)量, 為進(jìn)一步分析甘薯PHB基因提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 甘薯PHB基因家族鑒定

    根據(jù)PHB保守Pfam序列(https://pfam.xfam.org/), 在甘薯((L.) Lam.)基因組數(shù)據(jù)庫(https:// ipomoea-genome.org/)中篩選甘薯PHB家族成員。在甘薯基因組數(shù)據(jù)庫(https://ipomoea-genome.org/)下載甘薯全基因組數(shù)據(jù)及基因結(jié)構(gòu)注釋文件, 用TBtools軟件進(jìn)行BLAST序列比對(duì)、去冗余, 將得到的蛋白序列用NCBI-CDD數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/ bwrpsb/bwrpsb.cgi/)進(jìn)行蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析, 刪除不含共同結(jié)構(gòu)域或含不完整結(jié)構(gòu)域的蛋白序列。從甘薯基因組注釋文件中提取基因家族成員的染色體位置信息, 利用MapChart軟件繪制基因的染色體定位圖[20]。

    1.2 甘薯PHB家族成員基因序列分析

    使用ExPASy Proteomics Server (http://www.expasy. org/proteomics)分析氨基酸長(zhǎng)度、分子量、理論等電點(diǎn)、不穩(wěn)定系數(shù)、脂肪系數(shù)和平均疏水指數(shù)[21-22]; 利用Cell-PLoc 2.0 (http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/plant-multi/)進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)[23-24]; 使用MEME網(wǎng)站(http://meme-suite.org/)分析保守基序Motif[25]。

    1.3 甘薯PHB基因家族系統(tǒng)發(fā)育及順式作用元件分析

    從甘薯基因組網(wǎng)站獲得IbPHB基因家族成員啟動(dòng)子序列(轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1.5 kb), 并利用 PlantCARE網(wǎng)站(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/)預(yù)測(cè)IbPHB基因家族基因啟動(dòng)子順式作用元件[26]; 利用MEGA7軟件鄰近法對(duì)氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹, Bootstrap值設(shè)定為500。

    1.4 試驗(yàn)材料與處理

    本研究所用的甘薯品種為‘鄂11’, 選取若干生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)一致的‘鄂11’植株, 用清水培養(yǎng)2周后, 分別進(jìn)行非生物脅迫處理, 鹽脅迫處理采用200 mmol L–1的NaCl溶液[27]替代清水繼續(xù)培養(yǎng); 干旱脅迫處理采用200 g L–1的PEG-6000[28]替代清水模擬干旱繼續(xù)培養(yǎng), 每組處理3次重復(fù), 每個(gè)重復(fù)3個(gè)植株。脅迫處理后, 采集0、1、3、6、12、24 h甘薯的葉片[29-30], 經(jīng)液氮速凍后于–80℃保存。

    采集同一時(shí)期(發(fā)根緩苗期)甘薯的須根、莖和葉, 經(jīng)液氮速凍后于–80℃保存, 用作后續(xù)IbPHB基因家族成員的組織特異性表達(dá)分析。

    1.5 總RNA提取與cDNA合成

    使用Up試劑盒(北京全式金生物技術(shù)有限公司)提取植物總RNA, 使用NanoDrop-2000 (Thermo Fisher, 美國(guó))測(cè)定RNA濃度和質(zhì)量。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京全式金生物技術(shù)有限公司)反轉(zhuǎn)錄成cDNA, –20℃保存?zhèn)溆肹31]。

    1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

    利用NCBI primer blast 網(wǎng)站和Primer 5軟件設(shè)計(jì)IbPHB基因家族的熒光定量特異性引物(表1), 采用作為qRT-PCR的內(nèi)參基因。參照TransStart Tip Green qPCR SuperMix試劑盒說明書(北京全式金生物技術(shù)有限公司), 在熒光定量PCR儀(Bio-Rad CFX96)上進(jìn)行擴(kuò)增, 每個(gè)反應(yīng)3次重復(fù)。熒光定量PCR 擴(kuò)增條件為94℃預(yù)變性30 s; 94℃變性5 s, 56℃退火30 s, 40個(gè)循環(huán); 溶解曲線設(shè)置為65℃ 5 s到95℃, 增量為0.5℃。檢測(cè)~基因在不同組織間的表達(dá)模式, 利用2–ΔΔCt法[32]計(jì)算出基因的相對(duì)表達(dá)量。

    1.7 數(shù)據(jù)處理

    利用Microsoft Excel和DPS軟件分析數(shù)據(jù), 進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA), 多重比較采用Duncan’s法分析[33-34]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 甘薯PHB基因家族成員鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化分析

    經(jīng)blast序列比對(duì)、去冗余和蛋白結(jié)構(gòu)域篩選后, 在甘薯中共挖掘出11個(gè)IbPHB家族成員。由表2可知, IbPHB基因家族編碼氨基酸276~474個(gè), 分子量在30,402.86~52,238.60 kD之間, 等電點(diǎn)為5.30~9.23, 在1號(hào)、5號(hào)、6號(hào)、7號(hào)、8號(hào)、12號(hào)、13號(hào)、15號(hào)染色體均有基因分布。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)顯示, 甘薯、、、、、、位于線粒體膜上,、位于細(xì)胞核上,在細(xì)胞質(zhì)、線粒體、細(xì)胞核上均有分布,在線粒體和細(xì)胞核上均有分布。

    將甘薯11個(gè)IbPHB家族基因與擬南芥PHB基因家族的蛋白質(zhì)序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹, 如圖1所示, 進(jìn)化樹中聚類關(guān)系可以反映基因功能的相似程度, 基因功能相似則聚類關(guān)系近。根據(jù)進(jìn)化樹聚類關(guān)系以及基因在染色體上的位置(圖2), 將甘薯IbPHB家族的11個(gè)基因分別命名為~。

    2.2 甘薯PHB家族結(jié)構(gòu)和保守基序分析

    通過MEME在線工具對(duì)基因進(jìn)行保守基序Motif分析發(fā)現(xiàn), 11個(gè)IbPHB基因家族成員所包含的保守基序數(shù)量和分布存在差異, 范圍為0~5個(gè)(圖3-B)。和的保守基序數(shù)量為0, 可能是因?yàn)檫@2個(gè)成員的蛋白序列所含氨基酸數(shù)較少;和含有的motif最多, 且均含有motif 6、motif 7、motif 8、motif 9和motif 10;、和含有相似的motif, 均含有motif 3和motif 4;、、和含有相似的motif, 均含有motif 1、motif 2、motif 5和motif 8。利用NCBI-CDD數(shù)據(jù)庫對(duì)基因進(jìn)行蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析(圖3-C)發(fā)現(xiàn), IbPHB基因家族成員有0~8個(gè)內(nèi)含子, 3~11個(gè)外顯子。

    表1 試驗(yàn)所用引物

    表2 甘薯PHB基因家族

    (續(xù)表2)

    圖1 甘薯和擬南芥的PHB基因家族蛋白系統(tǒng)發(fā)育樹

    圖2 甘薯PHB基因家族在染色體上的分布

    2.3 甘薯PHB基因家族啟動(dòng)子順式作用元件分析

    利用PlantCARE網(wǎng)站對(duì)IbPHB基因家族基因啟動(dòng)子進(jìn)行順式作用元件預(yù)測(cè)分析(圖4)發(fā)現(xiàn), 11個(gè)IbPHB基因家族成員的啟動(dòng)子序列中, 除真核生物基因轉(zhuǎn)錄最基本的元件TATA-box、CAAT-box外, 還含有光響應(yīng)元件(AE-box、CAG-motif、G-box、GA-motif、GATA-motif、GT1-motif、Gap-box、I-box、TCT-motif等)、逆境響應(yīng)元件(干旱誘導(dǎo)元件MBS、厭氧誘導(dǎo)元件ARE、低溫響應(yīng)元件LTR、防御和應(yīng)激反應(yīng)元件TC-rich repeats等)、激素響應(yīng)元件(脫落酸響應(yīng)元件ABRE、生長(zhǎng)素響應(yīng)元件AuxRR-core和TGA-element、赤霉素響應(yīng)元件GARE- motif、水楊酸響應(yīng)元件TCA-element、茉莉酸甲酯響應(yīng)元件CGTCA-motif和TGACG-motif等)和生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)節(jié)元件(AACA_motif、GCN4_motif、AACA-motif、HD-Zip1、O2-site)。表明,基因與甘薯的生長(zhǎng)發(fā)育和生物及非生物脅迫等生物過程密切相關(guān), 它的轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控與多種因素有關(guān), 這些順式作用元件能夠響應(yīng)外界環(huán)境的變化, 從而調(diào)控基因的表達(dá)。

    圖3 甘薯PHB基因家族進(jìn)化樹與基因結(jié)構(gòu)

    A: 甘薯PHB家族基因系統(tǒng)進(jìn)化樹; B:保守基序; C: 保守結(jié)構(gòu)域分布。

    A: the phylogenetic tree of PHB family genes in sweet potato; B:conservative motif; C: the distribution of conservative domains.

    圖4 甘薯PHB基因家族啟動(dòng)子預(yù)測(cè)

    2.4 甘薯PHB家族基因的表達(dá)分析

    2.4.1基因不同組織部位表達(dá)分析 由圖5可知,基因的表達(dá)具有組織特異性, 除、、、外, 其他基因在甘薯葉片中的表達(dá)量最高。和在莖中的表達(dá)量高于根, 其他基因則是在根中的表達(dá)量高于莖。、、、的表達(dá)量均為根>莖>葉,在莖和根中的表達(dá)量約為葉片中的1/15,在莖和根中的表達(dá)量約為葉片中的1/4,在莖和根中的表達(dá)量約為葉片中的1/8,在莖和根中的表達(dá)量約為葉片中的1/6,在莖和根中的表達(dá)量約為葉片中的1/12,在莖和根中的表達(dá)量約為葉片中的1/10,在莖和根中的表達(dá)量約為葉片中的1/7。

    2.4.2基因在高鹽脅迫下的表達(dá)分析 qRT- PCR分析基因?qū)Ω啕}脅迫處理的響應(yīng)(圖6)發(fā)現(xiàn),在12 h達(dá)到高峰, 呈現(xiàn)先下降后上升再下降的趨勢(shì);和在3 h達(dá)到高峰;在3 h達(dá)到高峰, 呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì);和呈現(xiàn)先下降再上升再下降的趨勢(shì);在6 h達(dá)到高峰, 呈現(xiàn)先下降再上升再下降的趨勢(shì);在3 h達(dá)到高峰,呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì);在3 h達(dá)到高峰, 呈現(xiàn)先下降后上升再下降的趨勢(shì);在3 h達(dá)到高峰, 呈現(xiàn)先下降后上升再下降再上升的趨勢(shì);在1 h達(dá)到高峰, 呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢(shì)。

    圖中標(biāo)以不同字母表示數(shù)據(jù)間在0.05概率水平差異顯著。

    Different lowercase letters in the figure indicate significant differences between the data at the 0.05 probability level.

    (圖6)

    圖中標(biāo)以不同字母表示數(shù)據(jù)間在0.05概率水平差異顯著。

    Different lowercase letters in the figure indicate significant differences between the data at the 0.05 probability level.

    2.4.3基因在干旱脅迫下的表達(dá)分析 由圖7可知,、和在1 h表達(dá)量最高, 經(jīng)處理后均呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢(shì);和在0 h表達(dá)量最高, 在干旱處理后均出現(xiàn)下降的趨勢(shì);、、、和在6 h表達(dá)量最高,在干旱處理后出現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢(shì),和經(jīng)處理后呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),和經(jīng)處理后呈現(xiàn)先下降后上升再下降再上升的趨勢(shì);經(jīng)處理后呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)。

    (圖7)

    圖中標(biāo)以不同字母表示數(shù)據(jù)間在0.05概率水平差異顯著。

    Different lowercase letters in the figure indicate significant differences between the data at the 0.05 probability level.

    3 討論

    PHB是一個(gè)高度保守的基因家族, 已在人類和各種植物物種的許多生物體中被發(fā)現(xiàn), 在生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)方面發(fā)揮著重要作用[35-37]。在植物中, PHB基因家族已在擬南芥(17)、水稻(19)[3]、大豆(24)[12]、番茄(16)[13]、陸地棉(28)[14]和玉米(16)[15]中報(bào)道。然而, 在甘薯基因組中尚未發(fā)現(xiàn)PHB基因家族的全基因組鑒定。本研究在甘薯基因組中共鑒定出11個(gè)PHB基因, 并全面分析了它們的理化性質(zhì)、保守基序、基因結(jié)構(gòu)、順式作用元件以及有關(guān)組織特異性和在非生物脅迫下的表達(dá)量。

    全基因組鑒定結(jié)果顯示, 甘薯PHB基因分布在甘薯90條染色體中的8條上。基因復(fù)制或片段或串聯(lián)在基因組的擴(kuò)展中起著重要的作用[33,38]。PHB基因家族在擬南芥、水稻和大豆中的擴(kuò)增是由片段重復(fù)引起的[38-40], 而串聯(lián)重復(fù)是導(dǎo)致擬南芥中PHB基因數(shù)量增加的另一個(gè)原因[13], 但在甘薯中缺失, 且基因間不存在共線性, 這說明在甘薯中PHB基因家族的基因復(fù)制是與擬南芥不同的。

    PHB基因參與了植物生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)方面。本研究對(duì)順調(diào)控序列進(jìn)行了預(yù)測(cè)。結(jié)果表明,基因的啟動(dòng)子區(qū)域包含各種生長(zhǎng)發(fā)育、非生物脅迫和植物激素響應(yīng)元件。11個(gè)IbPHB基因家族成員的啟動(dòng)子序列中, 除真核生物基因轉(zhuǎn)錄最基本的元件TATA-box、CAAT-box外, 還含有光響應(yīng)元件(AE-box、CAG-motif、G-box、GA-motif、GATA-motif、GT1-motif、Gap-box、I-box、TCT-motif等)、逆境響應(yīng)元件(干旱誘導(dǎo)元件MBS、厭氧誘導(dǎo)元件ARE、低溫響應(yīng)元件LTR、防御和應(yīng)激反應(yīng)元件TC-richrepeats等)、激素響應(yīng)元件(脫落酸響應(yīng)元件ABRE、生長(zhǎng)素響應(yīng)元件AuxRR-core和TGA-element、赤霉素響應(yīng)元件GARE-motif、水楊酸響應(yīng)元件TCA-element、茉莉酸甲酯響應(yīng)元件CGTCA-motif和TGACG-motif等)和生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)節(jié)元件 (AACA_motif、GCN4_motif、AACA-motif、HD-Zip1、O2-site)。這證實(shí)了PHB基因參與了植物生長(zhǎng)發(fā)育、激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和非生物脅迫反應(yīng)。已有研究也證明了該點(diǎn), 如擬南芥可引起根和莖部組織的增殖[11]。同樣, 煙草能夠促進(jìn)葉片衰老[39]。

    本研究還對(duì)甘薯組織和非生物脅迫進(jìn)行表達(dá)分析, 結(jié)果表明, 本試驗(yàn)中的基因在各個(gè)組織中的表達(dá)量不同?;虻谋磉_(dá)具有組織特異性, 且均在甘薯葉片中的表達(dá)量最高。qRT-PCR分析基因?qū)Ω啕}和干旱脅迫處理的響應(yīng)發(fā)現(xiàn),基因在不同時(shí)間及不同脅迫處理下的表達(dá)量不同。這表明IbPHB基因家族成員參與了甘薯應(yīng)激反應(yīng)過程。且本研究中的基因存在逆境響應(yīng)元件(干旱誘導(dǎo)元件MBS、厭氧誘導(dǎo)元件ARE、低溫響應(yīng)元件LTR、防御和應(yīng)激反應(yīng)元件TC-rich repeats等), 以及多個(gè)MYB、MRE轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn), 這些轉(zhuǎn)錄因子會(huì)誘導(dǎo)的表達(dá), 從而提高甘薯對(duì)非生物脅迫的抗性。綜上可知, PHB基因家族參與了植物脅迫響應(yīng)調(diào)控, 這為全面系統(tǒng)地研究PHB 基因?qū)Ψ巧锩{迫的反應(yīng)機(jī)制提供了一定的理論支撐。

    [1] Duncan T B, Maja B H, Stephen M R. The SPFH domain- containing proteins: more than lipid raft markers., 2007, 17: 394–402.

    [2] Morrow I C, Parton R G. Flotillins and the PHB domain protein family: rafts, worms and anaesthetics., 2005, 6: 725–740.

    [3] Di C, Xu W Y, Su Z, Yuan J. Comparative genome analysis of PHB gene family reveals deep evolutionary origins and diverse gene function., 2010, 11: S22.

    [4] McClung J K, Danner D B, Stewart D A, Smith J R, Schneider E L, Lumpkin C K, Dell’Orco R T, Nuell M J. Isolation of a cDNA that hybrid selects antiproliferative mRNA from rat liver., 1989, 164: 1316–1322.

    [5] Sato T, Sakamoto T, Takita K, Saito H, Okui K, Nakamura Y. The human prohibitin (PHB) gene family and its somatic mutations in human tumors., 1993, 17: 762–764.

    [6] 黃浩浩. PHB基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞的調(diào)控研究. 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文, 北京, 2017. Huang H H. The Roles of PHB on the Regulation of Glioma Stem Cell. MS Thesis of PLA Academy of Military Medical Sciences, Beijing, China, 2017 (in Chinese with English abstract).

    [7] Wu Y W, Yang S H, Hwangbo M, Chu K H. Analysis ofZD1 draft genome: genes and gene clusters responsible for high polyhydroxybutyrate (PHB) production from glycerol under saline conditions and its CRISPR-Cas system., 2019, 14: e0222143.

    [8] Van Aken O, Pecenková T, Van De Cotte B, De Rycke R, Eeckhout D, Fromm H, De Jaeger G, Witters E, Beemster G T S, Inzé D, Van Breusegem F. Mitochondrial type-I prohibitins ofare required for supporting proficient meristem development., 2007, 52: 850–864.

    [9] Ahn C S, Lee J H, Reum H A, Kim W T, Pai H S. Prohibitin is involved in mitochondrial biogenesis in plants., 2006, 46: 658–667.

    [10] Christians M J, Larsen P B. Mutational loss of the prohibitinresults in an extreme constitutive ethylene response phenotype coupled with partial loss of ethylene-inducible gene expression inseedlings., 2007, 58: 2237–2248.

    [11] 王曉萍, Amber R, Kati W, Albert Y, Nigel M C, 王勇. 擬南芥抑制蛋白基因PHB3在NO介導(dǎo)反應(yīng)和H2O2誘導(dǎo)NO積累過程中的功能研究. 見: 諸葛健, 李華鐘主編. 山東植物生理學(xué)會(huì)第七次代表大會(huì)暨植物生物學(xué)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研討會(huì)論文集. 山東泰安: 山東省科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì), 2012. pp 51–61. Wang X P, Amber R, Kati W, Albert Y, Nigel M C, Wang Y. The function ofinhibitor protein gene PHB3 in NO mediated reaction and H2O2induced NO accumulation. In: Zhu G J, Li H Z, eds. Shandong Plant Physiology Association Seventh Congress and Workshop on Plant Biology and Modern Agriculture. Tai’an, Shandong, China: Shandong Science and Technology Association, 2012. pp 51–61 (in Chinese).

    [12] Song M, Peng X Y, Du C F, Lei L, Zhang T, Xiang Y. Genome-wide analysis of the PHB gene family in(L.) Merr., 2017, 39: 1095–1106.

    [13] Huang F Y, Ye X W, Wang Z J, Ding Y, Cai X J, Yu L, Waseem M, Abbas F, Ashraf U, Chen X L, Ke Y G. The prohibitins (PHB) gene family in tomato: Bioinformatic identification and expression analysis under abiotic and phytohormone stresses., 2021, 12: 535–550.

    [14] 章妮, 陳克龍. 陸地棉PHB基因家族鑒定與表達(dá)分析. 分子植物育種, 2021. https://kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S.20211216.1051.007.html. Zhang N, Chen K L. Identification and expression analysis of PHB gene family in upland cotton., 2021, https://kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S.20211216.1051.007.html (in Chinese with English abstract).

    [15] Wen X J, Niu T T, Kong X P. In silico analysis of PHB gene family in maize., 2014, 73: 181–191.

    [16] 王欣, 李強(qiáng), 曹清河, 馬代夫. 中國(guó)甘薯產(chǎn)業(yè)和種業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀與未來展望. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2021, 54: 483–492. Wang X, Li Q, Cao Q H, Ma D F. Current status and future prospective of sweetpotato production and seed industry in China., 2021, 54: 483–492 (in Chinese with English abstract).

    [17] Yang J, Moeinzadeh M H, Kuhl H, Helmuth J, Xiao P, Haas S, Liu G L, Zheng J L, Sun Z, Fan W J, Deng G F, Wang H X, Hu F H, Zhao S S, Fernie A R, Boerno S, Timmermann B, Zhang P, Vingron M. Haplotype-resolved sweet potato genome traces back its hexaploidization history., 2017, 3: 696–703.

    [18] 劉振雷, 潘家荃, 周樺楠, 劉冠求, 于濤. 甘薯耐冷組學(xué)及分子生物學(xué)研究進(jìn)展. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2021, 49(24): 45–48. Liu Z L, Pan J Q, Zhou H N, Liu G Q, Yu T. Research progress on cold tolerance omics and molecular biology of sweet potato., 2021, 49(24): 45–48 (in Chinese with English abstract).

    [19] 陳璐, 周淑倩, 李永新, 陳剛, 陸國(guó)權(quán), 楊虎清. 甘薯解偶聯(lián)蛋白基因家族鑒定與表達(dá)分析. 作物學(xué)報(bào), 2022, 48: 1683–1696. Chen L, Zhou S Q, Li Y X, Chen G, Lu G Q, Yang H Q. Identification and expression analysis of uncoupling protein gene family in sweet potato., 2022, 48: 1683–1696 (in Chinese with English abstract).

    [20] 饒莉萍. 甘薯基因的克隆與功能鑒定. 長(zhǎng)江大學(xué)碩士學(xué)位論文, 湖北荊州, 2021. Rao L P. Cloning and Functional Identification ofGene from(L.) Lam. MS Thesis of Yangtze University, Jingzhou, Hubei, China, 2021 (in Chinese with English abstract).

    [21] 梁璇, 李鵬, 楊哲, 賈小云, 王文斌. 甘薯近緣二倍體野生種TPS家族全基因組鑒定及表達(dá)分析. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué), 2022, 50: 605–612. Liang X, Li P, Yang Z, Jia X Y, Wang W B. Identification and expression analysis of genome of TPS family of wild relative diploid species of sweet potato., 2022, 50: 605–612 (in Chinese with English abstract).

    [22] 張文杰, 辛曙麗, 黃哲瑞, 祝志欣, 司成成, 陳艷麗, 朱國(guó)鵬, 劉永華. 甘薯塊根發(fā)育過程中關(guān)鍵蔗糖分解酶及其基因家族成員的鑒定. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2022, 43: 1535–1544. Zhang W J, Xin S L, Huang Z R, Zhu Z X, Si C C, Chen Y L, Zhu G P, Liu Y H. Identification of key sucrose-degrading enzymes and the relevant gene family members in the development of sweetpotato storage roots., 2022, 43: 1535–1544 (in Chinese with English abstract).

    [23] 黃小芳, 畢楚韻, 陳其俊, 劉江洪, 胡韻卓, 黃碧芳, 陳選陽, 林世強(qiáng). 甘薯α-淀粉酶基因的全基因組鑒定和分析. 分子植物育種, 2022, 20: 8035–8042. Huang X F, Bi C Y, Chen Q J, Liu J H, Hu Y Z, Huang B F, Chen X Y, Lin S Q. Genome-wide identification and analysis of α- amylase gene family of., 2022, 20: 8035–8042 (in Chinese with English abstract).

    [24] 黃小芳, 畢楚韻, 黃偉群, 劉江洪, 胡韻卓, 黃碧芳, 林世強(qiáng), 陳選陽. 甘薯β-淀粉酶家族基因的全基因組鑒定和表達(dá)分析. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2021, 42(5): 50–59. Huang X F, Bi C Y, Huang W Q, Liu J H, Hu Y Z, Huang B F, Lin S Q, Chen X Y. Genome-wide identification and expression analysis of the β-amylase gene family in., 2021, 42(5): 50–59 (in Chinese with English abstract).

    [25] 黃小芳, 畢楚韻, 石媛媛, 胡韻卓, 周麗香, 梁才曉, 黃碧芳, 許明, 林世強(qiáng), 陳選陽. 甘薯基因組NBS-LRR類抗病家族基因挖掘與分析. 作物學(xué)報(bào), 2020, 46: 1195–1207. Huang X F, Bi C Y, Shi Y Y, Hu Y Z, Zhou L X, Liang C X, Huang B F, Xu M, Lin S Q, Chen X Y. Discovery and analysis of NBS-LRR gene family in sweet potato genome., 2020, 46: 1195–1207 (in Chinese with English abstract).

    [26] 許光齡, 王建偉, 陳玥, 陳艷麗, 祝志欣, 朱國(guó)鵬. 甘薯NRT基因家族成員鑒定及其在不同氮素條件下的表達(dá)模式分析. 分子植物育種, 2022, 20: 7316–7331. Xu G L, Wang J W, Chen Y, Chen Y L, Zhu Z X, Zhu G P. Identification of sweetpotato NRT gene family members and expression patterns analysis under different nitrogen conditions., 2022, 20: 7316–7331 (in Chinese with English abstract).

    [27] 畢楚韻, 黃小芳, 王和壽, 陳其俊, 胡韻卓, 黃碧芳, 許明, 楊志堅(jiān), 林世強(qiáng), 陳選陽. 甘薯全基因組WRKY轉(zhuǎn)錄因子的基因鑒定與逆境脅迫表達(dá)分析. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2021, 49(9): 30–44. Bi C Y, Huang X F, Wang H S, Chen Q J, Hu Y Z, Huang B F, Xu M, Yang Z J, Lin S Q, Chen X Y. Identification of WRKY transcription factor genes ingenome and expression analysis under stresses.(Nat Sci Edn), 2021, 49(9): 30–44 (in Chinese with English abstract).

    [28] 黃小芳, 畢楚韻, 王和壽, 陳其俊, 胡韻卓, 陳選陽, 林世強(qiáng). 甘薯NAC轉(zhuǎn)錄因子家族的全基因組鑒定與分析. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2021, 42: 1831–1840. Huang X F, Bi C Y, Wang H S, Chen Q J, Hu Y Z, Chen X Y, Lin S Q. Genome-wide identification and analysis of NAC transcription factor family of., 2021, 42: 1831–1840 (in Chinese with English abstract).

    [29] Zhang H, Gao X R, Zhi Y H, Li X, Zhang Q, Niu J B, Wang J, Zhai H, Zhao N, Li J G, Liu Q C, He S Z. A non-tandem CCCH-type zinc-finger protein,, functions as a nuclear transcriptional activator and enhances abiotic stress tolerance in sweet potato., 2019, 223: 1918–1936.

    [30] 宋小鋒, 原增艷. 甘薯水通道蛋白基因家族的全基因組鑒定和表達(dá)分析. 分子植物育種, 2022, 20: 1452–1461. Song X F, Yuan Z Y. Genome-wide identification and expression pattern profiling of aquaporin gene family in., 2022, 20: 1452–1461 (in Chinese with English abstract).

    [31] 宋天曉, 劉意, 饒莉萍, Soviguidi D R J, 朱國(guó)鵬, 楊新筍. 甘薯細(xì)胞壁蔗糖轉(zhuǎn)化酶基因家族成員鑒定及表達(dá)分析. 作物學(xué)報(bào), 2021, 47: 1297–1308. Song T X, Liu Y, Rao L P, Soviguidi D R J, Zhu G P, Yang X S. Identification and expression analysis of cell wall invertasegene family members in sweet potato., 2021, 47: 1297–1308 (in Chinese with English abstract).

    [32] 周淑倩, 陳璐, 陳惠云, 李永新, 陳剛, 陸國(guó)權(quán), 楊虎清. 甘薯交替氧化酶基因家族生物信息學(xué)與表達(dá)分析. 核農(nóng)學(xué)報(bào), 2022, 36: 270–281. Zhou S Q, Chen L, Chen H Y, Li Y X, Chen G, Lu G Q, Yang H Q. Bioinformatics and expression analysis of alternative oxidase genes in sweetpotato., 2022, 36: 270–281 (in Chinese with English abstract).

    [33] 畢楚韻, 黃小芳, 黃偉群, 劉江洪, 胡韻卓, 黃碧芳, 林世強(qiáng), 陳選陽. 甘薯基因組BBX轉(zhuǎn)錄因子基因鑒定與逆境脅迫表達(dá)分析. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2021, 39(2): 157–165. Bi C Y, Huang X F, Huang W Q, Liu J H, Hu Y Z, Huang B F, Lin S Q, Chen X Y. Identification of BBX transcription factor genes ingenome and expression analysis under stresses., 2021, 39(2): 157–165 (in Chinese with English abstract).

    [34] 邵正偉, 曾志鵬, 陳彥竹, 何敏紅, 張毅, 陳善蘭, 朱宏波. 甘薯全基因組SBP-box基因家族鑒定及表達(dá)分析. 分子植物育種, 2021. https://kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S.20210722.1407. 014.html. Shao Z W, Zeng Z P, Chen Y Z, He M H, Zhang Y, Chen S L, Zhu H B. Genome-wide identification and expression analysis of the SBP-box gene family in sweet potato ()., 2021. https://kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S. 20210722.1407.014.html (in Chinese with English abstract).

    [35] 夏夢(mèng), 徐暢, 王吉, 王玲, 孫丹. 植物Prohibitins基因(PHBs)的研究進(jìn)展. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào), 2016, 32(35): 24–29. Xia M, Xu C, Wang J, Wang L, Sun D. Research progress of plant Prohibitins gene (PHBs)., 2016, 32(35): 24–29 (in Chinese with English abstract).

    [36] 熊炤成, 屈春鳳, 沈開元, 劉慶友, 王英群, 石德順, 李湘萍. 水牛PHB基因克隆與表達(dá)模式. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2016, 36: 1422–1428.Xiong Z C, Qu C F, Shen K Y, Liu Q Y, Wang Y Q, Shi D Y, Li X P. Cloning and expression pattern of buffalo PHB gene., 2016, 36: 1422–1428 (in Chinese with English abstract).

    [37] 王晗, 閆敏, 許曄, 王仁雷, 劉少華. 蕓薹屬物種(.,.,.) PHB基因的生物信息學(xué)分析. 分子植物育種, 2021, 19: 4232–4241. Wang H, Yan M, Xu Y, Wang R L, Liu S H. Bioinformatics analysis of PHB gene inspecies (.,.,.)., 2021, 19: 4232–4241 (in Chinese with English abstract).

    [38] 張佳宇. 黃瓜CsPHB基因功能的初步分析. 西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文, 陜西楊凌, 2020. Zhang J Y. A Preliminary Analysis of the Function of the CsPHB Gene in Cucumber (L.). MS Thesis of Northwest A&F University, Yangling, Shaanxi, China, 2020 (in Chinese with English abstract).

    [39] 徐麗. 利用基因工程進(jìn)行PHB相關(guān)基因的克隆和煙草轉(zhuǎn)化. 山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文, 山東濟(jì)南, 2000. Xu L. Cloning and Transformation of PHB Related Genes in Tobacco by Genetic Engineering. MS Thesis of Shandong Normal University, Jinan, Shandong, China, 2000 (in Chinese with English abstract).

    [40] 張瑜. 條斑紫菜PHB基因克隆及生物信息學(xué)分析. 遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文, 遼寧大連, 2014. Zhang Y. Molecular Cloning and Bioinformatics Analysis of Prohibitin from. MS Thesis of Liaoning Normal University, Dalian, Liaoning, China, 2014 (in Chinese with English abstract).

    Genome-wide identification and expression analysis of PHB gene family in sweet potato

    MEI Yu-Qin1,2,**, LIU Yi1,**, WANG Chong2,3, LEI Jian2, ZHU Guo-Peng1,*, and YANG Xin-Sun2,*

    1Horticulture College, Hainan University / Key Laboratory for Quality Regulation of Tropical Horticultural Plants of Hainan Province, Haikou 570228, Hainan, China;2Food Crops Institute, Hubei Academy of Agricultural Sciences, Wuhan 430064, Hubei, China;3College of Agriculture, Yangtze University, Jingzhou 434025, Hubei, China

    The prohibitins (PHB) are SPFH domain-containing proteins found in the prokaryotes to eukaryotes. Plant PHB gene family is involved in many important functions in a variety of different biological processes, including growth and development and responses to biotic and abiotic stresses. At present, PHB proteins have been identified in, rice, maize, soybean, tomato, upland cotton, and other plants. However, the systematic analysis of PHB family in sweet potato is still uncertain. In this study, 11 PHB genes in sweet potato were identified, and the analysis of these conserved protein motifs and gene structures showed that they were highly conserved in phylogenetic subgroups. In addition, the cis-acting elements related to various hormone regulation and stress were predicted in the promoter region and the relative expression patterns ofgenes were different in different parts of plants and under different abiotic stresses. This study systematically analyzed the general characteristics ofgene in sweet potato, and provided a theoretical basis for the study of functional characteristics ofgene in sweet potato and other plants.

    sweet potato; PHB gene family; phylogenetic evolution; bioinformatics; the relative expression level

    10.3724/SP.J.1006.2023.24142

    本研究由財(cái)政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-10-C13-2021), 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“雙子葉雜糧抗性種質(zhì)創(chuàng)制”(2019YFD1001303-4), 湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心湖北省農(nóng)科院領(lǐng)軍人才培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(L2018005)和湖北省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“中貝鄂薯系列新品種與新技術(shù)示范”(2020BHB024)資助。

    This study was supported by the China Agriculture Research System of MOF and MARA (CARS-10-C13-2021), the National Key Research and Development Program of China “Creation of Resistant Germplasm for Dicotyledonous Grains” (2019YFD1001303-4), the Leading Talent Training Plan of Hubei Academy of Agricultural Sciences (L2018005), and the Hubei Province Key Research and Development Program Project “China and Benin Eshu Series New Varieties and New Technology Demonstration” (2020BHB024).

    朱國(guó)鵬, E-mail: guopengzhu@163.com; 楊新筍, E-mail: yangxins013@163.com

    **同等貢獻(xiàn)(Contributed equally to this work)

    梅玉琴, E-mail: 20095131210148@hainanu.edu.cn; 劉意, E-mail: 15549421602@163.com

    2022-06-16;

    2022-10-11

    2022-10-21.

    URL: https://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1809.S.20221021.0821.002.html

    This is an open access article under the CC BY-NC-ND license (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

    猜你喜歡
    甘薯擬南芥元件
    擬南芥:活得粗糙,才讓我有了上太空的資格
    多管齊下 防好甘薯黑斑病
    尿黑酸對(duì)擬南芥酪氨酸降解缺陷突變體sscd1的影響
    兩種LED光源作為擬南芥生長(zhǎng)光源的應(yīng)用探究
    擬南芥干旱敏感突變體篩選及其干旱脅迫響應(yīng)機(jī)制探究
    甘薯抗旱鑒定及旱脅迫對(duì)甘薯葉片生理特性的影響
    QFN元件的返工指南
    在新興產(chǎn)業(yè)看小元件如何發(fā)揮大作用
    寶馬i3高電壓元件介紹(上)
    Cu4簇合物“元件組裝”合成及其結(jié)構(gòu)與電催化作用
    毛片女人毛片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 丰满少妇做爰视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲精品一二三| 国产精品99久久久久久久久| 久久人人爽人人片av| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产淫语在线视频| 亚洲在线观看片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 在线播放无遮挡| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产成人freesex在线| 国产高清不卡午夜福利| 白带黄色成豆腐渣| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 男的添女的下面高潮视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产亚洲精品久久久com| 下体分泌物呈黄色| 美女高潮的动态| 国产精品伦人一区二区| 成年人午夜在线观看视频| 日韩欧美精品v在线| 在线观看三级黄色| av在线播放精品| 两个人的视频大全免费| av专区在线播放| 精品酒店卫生间| av在线天堂中文字幕| 亚洲最大成人中文| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 色综合色国产| 亚洲色图av天堂| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 男女下面进入的视频免费午夜| 各种免费的搞黄视频| 激情 狠狠 欧美| 一个人观看的视频www高清免费观看| 美女内射精品一级片tv| 免费观看的影片在线观看| 在线观看免费高清a一片| 亚洲高清免费不卡视频| 久久99热这里只频精品6学生| 中国三级夫妇交换| 国产精品人妻久久久影院| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 欧美日韩在线观看h| 一级毛片 在线播放| 身体一侧抽搐| 成人欧美大片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产永久视频网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 免费观看av网站的网址| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲国产精品国产精品| 婷婷色av中文字幕| 亚洲av不卡在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 五月天丁香电影| 精品国产乱码久久久久久小说| av.在线天堂| 两个人的视频大全免费| 99视频精品全部免费 在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产伦在线观看视频一区| 在线精品无人区一区二区三 | 女人被狂操c到高潮| 成年av动漫网址| 国产高清三级在线| 精品久久久噜噜| 日韩欧美一区视频在线观看 | 综合色av麻豆| 国产黄片视频在线免费观看| 国产黄片美女视频| 亚洲精品视频女| 最近最新中文字幕免费大全7| 中国国产av一级| av国产久精品久网站免费入址| 性色av一级| 中文字幕久久专区| 亚洲成色77777| 久久久亚洲精品成人影院| 边亲边吃奶的免费视频| 久久热精品热| 日韩在线高清观看一区二区三区| 99久久精品一区二区三区| 免费av观看视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲无线观看免费| 啦啦啦啦在线视频资源| 日本黄色片子视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲国产精品成人综合色| 色播亚洲综合网| 能在线免费看毛片的网站| 久久久成人免费电影| 日日撸夜夜添| 久久久a久久爽久久v久久| 精华霜和精华液先用哪个| 免费观看av网站的网址| 久热久热在线精品观看| 亚洲成人久久爱视频| 久久久久久久久大av| 大话2 男鬼变身卡| 国产69精品久久久久777片| 午夜老司机福利剧场| 免费看a级黄色片| 伊人久久精品亚洲午夜| 在线观看av片永久免费下载| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲国产日韩一区二区| 九草在线视频观看| 久久人人爽人人片av| 亚洲国产欧美人成| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 精品久久久久久久末码| 好男人视频免费观看在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 51国产日韩欧美| 乱码一卡2卡4卡精品| 精品一区二区三卡| 在线精品无人区一区二区三 | 国产淫语在线视频| 黄色一级大片看看| 亚洲欧美精品自产自拍| 波野结衣二区三区在线| 国产 一区精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 午夜老司机福利剧场| 国模一区二区三区四区视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 天天躁日日操中文字幕| 精品久久久久久久久av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人免费观看mmmm| 国产综合精华液| 51国产日韩欧美| 乱码一卡2卡4卡精品| 伦精品一区二区三区| 日韩电影二区| av福利片在线观看| 少妇高潮的动态图| 只有这里有精品99| 中文天堂在线官网| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美bdsm另类| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲人成网站在线播| 免费少妇av软件| 91精品一卡2卡3卡4卡| 欧美潮喷喷水| 欧美人与善性xxx| 免费黄频网站在线观看国产| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美最新免费一区二区三区| 国内精品美女久久久久久| 国产精品av视频在线免费观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 麻豆国产97在线/欧美| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲综合精品二区| 亚洲人成网站在线播| 人人妻人人看人人澡| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 免费观看在线日韩| 午夜日本视频在线| 国产精品三级大全| 在线 av 中文字幕| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品.久久久| 美女主播在线视频| 一边亲一边摸免费视频| 日韩免费高清中文字幕av| 伊人久久国产一区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产免费福利视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 丝袜脚勾引网站| 丝袜美腿在线中文| 少妇人妻精品综合一区二区| 中文字幕久久专区| 国产日韩欧美在线精品| 在线天堂最新版资源| 亚洲成人中文字幕在线播放| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美成人午夜免费资源| 中文在线观看免费www的网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 伦精品一区二区三区| 九九在线视频观看精品| 九九在线视频观看精品| 永久网站在线| 网址你懂的国产日韩在线| 黄色日韩在线| 国产成人一区二区在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产亚洲91精品色在线| 超碰av人人做人人爽久久| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲精品中文字幕在线视频 | www.av在线官网国产| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲真实伦在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 69人妻影院| 啦啦啦啦在线视频资源| 中文资源天堂在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久99精品国语久久久| 深爱激情五月婷婷| 亚洲人与动物交配视频| 在线 av 中文字幕| 中文字幕久久专区| 国产精品不卡视频一区二区| freevideosex欧美| 亚州av有码| 成人国产麻豆网| 免费观看性生交大片5| 免费观看无遮挡的男女| 精品人妻熟女av久视频| 久久久久精品性色| 青春草国产在线视频| 精品视频人人做人人爽| 国产精品国产av在线观看| 天堂中文最新版在线下载 | 一区二区av电影网| 国产永久视频网站| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久久久久久午夜电影| 人妻少妇偷人精品九色| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成人二区视频| 黄色配什么色好看| 国产av码专区亚洲av| 深夜a级毛片| av网站免费在线观看视频| av国产免费在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 夫妻午夜视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产欧美亚洲国产| 精品久久久久久电影网| 亚洲国产精品成人综合色| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产久久久一区二区三区| 国产色婷婷99| 日本黄大片高清| 五月玫瑰六月丁香| 日本与韩国留学比较| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 成人黄色视频免费在线看| 青青草视频在线视频观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 日本黄色片子视频| 91狼人影院| 免费av不卡在线播放| 日日撸夜夜添| 亚洲精品影视一区二区三区av| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲人成网站在线播| 男女无遮挡免费网站观看| 2022亚洲国产成人精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 白带黄色成豆腐渣| 各种免费的搞黄视频| 日日撸夜夜添| 高清欧美精品videossex| 高清毛片免费看| 黄色配什么色好看| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲内射少妇av| 日韩三级伦理在线观看| 国产成人aa在线观看| 成年免费大片在线观看| 日韩视频在线欧美| 久久女婷五月综合色啪小说 | 亚洲国产精品成人综合色| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 男女无遮挡免费网站观看| 国产精品国产三级专区第一集| 国产黄色免费在线视频| 亚洲欧洲日产国产| 日韩欧美精品免费久久| 午夜免费观看性视频| 另类亚洲欧美激情| 午夜日本视频在线| 激情五月婷婷亚洲| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品偷伦视频观看了| 91久久精品国产一区二区成人| 最近2019中文字幕mv第一页| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 2021天堂中文幕一二区在线观| 丝袜美腿在线中文| 秋霞在线观看毛片| 久久久久久久久久久免费av| 97超视频在线观看视频| 美女内射精品一级片tv| 国产综合懂色| 久久精品人妻少妇| 国产亚洲最大av| 中文字幕亚洲精品专区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品国产三级普通话版| 六月丁香七月| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 伊人久久精品亚洲午夜| 1000部很黄的大片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩成人伦理影院| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美性感艳星| 亚洲天堂国产精品一区在线| 九草在线视频观看| 国产成年人精品一区二区| 久久影院123| 国产一级毛片在线| 熟女电影av网| 九色成人免费人妻av| 国产精品久久久久久久久免| 免费黄频网站在线观看国产| 在线天堂最新版资源| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲人成网站高清观看| 直男gayav资源| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 久久久国产一区二区| 三级国产精品片| 国产男女超爽视频在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 一级毛片久久久久久久久女| 超碰97精品在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲精品久久午夜乱码| 美女视频免费永久观看网站| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲国产精品999| 亚洲av二区三区四区| 久久人人爽人人爽人人片va| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 色5月婷婷丁香| 国产精品成人在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 精品久久久精品久久久| 日本三级黄在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 日韩欧美 国产精品| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩亚洲欧美综合| kizo精华| 最近中文字幕2019免费版| 中国国产av一级| 亚洲成人久久爱视频| 最近中文字幕2019免费版| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 亚洲最大成人中文| 国产免费福利视频在线观看| 视频中文字幕在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 黄色配什么色好看| 男人添女人高潮全过程视频| 又大又黄又爽视频免费| 久久综合国产亚洲精品| 高清在线视频一区二区三区| 人体艺术视频欧美日本| 男的添女的下面高潮视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 中文资源天堂在线| 成人毛片60女人毛片免费| 综合色丁香网| 国产亚洲av嫩草精品影院| 免费av观看视频| 久久精品人妻少妇| 久久97久久精品| 国产乱人偷精品视频| 2022亚洲国产成人精品| 激情 狠狠 欧美| 亚洲不卡免费看| 只有这里有精品99| 色吧在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 免费观看在线日韩| 2021天堂中文幕一二区在线观| av女优亚洲男人天堂| 国产男女超爽视频在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 精品久久久精品久久久| 日韩电影二区| 免费电影在线观看免费观看| 18禁动态无遮挡网站| 岛国毛片在线播放| 在线观看国产h片| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费观看在线日韩| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲国产色片| av.在线天堂| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 秋霞伦理黄片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲色图av天堂| 欧美一区二区亚洲| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产免费一级a男人的天堂| 嫩草影院入口| 伦精品一区二区三区| 全区人妻精品视频| videossex国产| 国产又色又爽无遮挡免| 久久99蜜桃精品久久| 国产亚洲精品久久久com| 黄色配什么色好看| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 99久久精品国产国产毛片| 久久久久国产网址| 最近中文字幕2019免费版| 毛片一级片免费看久久久久| 久久精品国产亚洲av涩爱| 少妇丰满av| 亚洲人与动物交配视频| 国产午夜福利久久久久久| 各种免费的搞黄视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日韩不卡一区二区三区视频在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 2021天堂中文幕一二区在线观| 99热6这里只有精品| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品一区二区性色av| 久久97久久精品| 久久精品久久久久久久性| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲四区av| 亚洲国产精品999| av一本久久久久| 秋霞伦理黄片| 午夜福利高清视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 在线观看国产h片| 国产日韩欧美亚洲二区| 男人舔奶头视频| 99热全是精品| 国产黄色免费在线视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 97精品久久久久久久久久精品| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久这里有精品视频免费| 日韩伦理黄色片| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人综合一区亚洲| 亚洲第一区二区三区不卡| 热99国产精品久久久久久7| h日本视频在线播放| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 最近手机中文字幕大全| 精品熟女少妇av免费看| 国产精品人妻久久久影院| 黄色欧美视频在线观看| 日韩中字成人| 熟妇人妻不卡中文字幕| 免费大片黄手机在线观看| 69av精品久久久久久| 国产成人freesex在线| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品伦人一区二区| 亚洲精品成人久久久久久| 成年人午夜在线观看视频| 99视频精品全部免费 在线| 精品一区在线观看国产| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日本午夜av视频| 成年av动漫网址| 亚洲成人中文字幕在线播放| 中文字幕亚洲精品专区| h日本视频在线播放| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 亚洲av成人精品一区久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久久网色| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 天天躁日日操中文字幕| 在线a可以看的网站| 精品国产三级普通话版| 国产在线一区二区三区精| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 嫩草影院新地址| 熟女av电影| 在线观看美女被高潮喷水网站| 少妇熟女欧美另类| 日本与韩国留学比较| 国产成人aa在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 大码成人一级视频| 国产探花在线观看一区二区| 精品午夜福利在线看| 国产精品蜜桃在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 内地一区二区视频在线| 色综合色国产| 久久6这里有精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美xxⅹ黑人| 精品一区二区三区视频在线| 久久久午夜欧美精品| 极品教师在线视频| 两个人的视频大全免费| 最近的中文字幕免费完整| 中文欧美无线码| 男人狂女人下面高潮的视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产老妇女一区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 永久网站在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 精品一区二区免费观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品一二三区在线看| 日韩伦理黄色片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 少妇的逼好多水| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美性感艳星| 国产黄片美女视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 91精品一卡2卡3卡4卡| 青青草视频在线视频观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 插阴视频在线观看视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产成人免费无遮挡视频| 人体艺术视频欧美日本| 精品久久久精品久久久| 久久久精品免费免费高清| 青青草视频在线视频观看| 国产黄片美女视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 一级毛片 在线播放| 成人欧美大片| 亚洲最大成人av| 国产一区二区三区综合在线观看 | 伦理电影大哥的女人| 日韩免费高清中文字幕av| 22中文网久久字幕| av在线播放精品| 欧美最新免费一区二区三区| 日韩欧美精品免费久久| 在线a可以看的网站| 乱系列少妇在线播放| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲色图综合在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 午夜激情福利司机影院| av播播在线观看一区| 高清毛片免费看| 国产成人福利小说| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一级毛片久久久久久久久女| 精品人妻一区二区三区麻豆| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久99热6这里只有精品| 亚洲最大成人中文| 天美传媒精品一区二区| 精品酒店卫生间|