超聲異常胎兒產(chǎn)前診斷及妊娠結(jié)局的研究

韓詠梅 程翠云

產(chǎn)前超聲檢查作為篩查胎兒畸形的常用方法,現(xiàn)已得到臨床廣泛應(yīng)用,經(jīng)超聲檢查能夠有效鑒別診斷異常胎兒,若胎兒為輕度畸形,可嚴重影響家庭生活質(zhì)量,同時也會對家庭經(jīng)濟造成嚴重負擔；若畸形情況嚴重,則會危及胎兒生命安全［1,2］。因此,盡早明確胎兒畸形情況,對指導(dǎo)臨床治療、改善妊娠結(jié)局、提高優(yōu)生優(yōu)育率等具有重要作用。在胎兒超聲軟指標檢查中可見其微小結(jié)構(gòu)變化情況,通常在染色體正?；虍惓Ｌ褐芯砂l(fā)生,但前者發(fā)生率更高。目前,異常胎兒診斷以羊水穿刺結(jié)果作為“金標準”,對選擇性的染色體核型進行有效分析利于降低胎兒出生缺陷率,從而提高新生兒出生質(zhì)量［3,4］。現(xiàn)階段,產(chǎn)前診斷的重要方法為染色體核型分析,但該方法檢測時間較長,同時受到顯微鏡分辨率、實驗室顯帶技術(shù)等因素影響,極易出現(xiàn)未知染色體異常、亞顯微異常等現(xiàn)象,影響判斷結(jié)果,從而導(dǎo)致誤診或漏診［5］。CMA 是近年發(fā)展起來的分子生物學檢測方法,其特點是分辨率高、檢測速度快、檢測通量高,可分辨出100 KB 以上的染色體片段變異。由于該基因芯片檢測不需要進行細胞培養(yǎng),因此其適用于細胞培養(yǎng)較難成功的檢測樣本,或者有明顯癥狀但常規(guī)核型分析未檢出異常的樣本。CMA技術(shù)包括基于微陣列的比較基因組雜交(array-based Comparative Genomic Hibridization,aCGH)技術(shù)和單核苷酸多態(tài)性微陣列技術(shù),能夠在全基因組水平進行檢測染色體不平衡的CNVs,且較染色體核型分析具有更高的分辨率和敏感度,目前廣泛應(yīng)用于胎兒異常的產(chǎn)前診斷［6］。鑒于此,本研究分析超聲異常胎兒產(chǎn)前診斷及妊娠結(jié)局,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019 年11 月～2021 年10 月于本院行產(chǎn)前超聲檢查且發(fā)現(xiàn)異常妊娠的產(chǎn)婦265 例作為研究對象,年齡22～45 歲,平均年齡(31.58±2.37)歲；孕周18～34 周,平均孕周(22.63±1.74)周。本研究獲本院倫理委員會批準。

1.2 納入及排除標準 納入標準：常規(guī)產(chǎn)前超聲異常妊娠產(chǎn)婦；單胎妊娠；產(chǎn)婦及家屬簽署同意書。排除標準：妊娠前或妊娠期間存在其他系統(tǒng)惡性腫瘤；凝血及造血功能障礙；產(chǎn)檢資料缺乏；免疫系統(tǒng)疾??；既往存在不良妊娠史,或存在家族異常妊娠史；精神疾病或意識障礙,無法配合完成本次研究者。

1.3 方法①超聲檢查：使用超聲診斷儀(西門子公司)篩查胎兒發(fā)育系統(tǒng),具體包括頸后皮膚增厚、脈絡(luò)叢囊腫、腸管強回聲、心室強回聲光點、單臍動脈、腎盂擴張、輕度側(cè)腦室增寬、鼻骨短及胎兒結(jié)構(gòu)畸形等,并仔細觀察胎兒發(fā)育異常的超聲檢查結(jié)果。②羊膜腔穿刺術(shù)：在無菌環(huán)境中應(yīng)用超聲做引導(dǎo)采集25～30 ml 羊水進行檢測,其中取20 ml 行染色體核型分析,另5～10 ml 行CMA 檢測。③染色體核型分析：對抽取的羊水樣本行離心處理,以3500 r/min 速度離心10 min,離心半徑為10 cm,獲得上層清液,將離心后的沉淀物質(zhì)制備為細胞懸液,隨后將其接種于羊水培養(yǎng)基上,待培養(yǎng)7 d 后觀察培養(yǎng)基上細胞生長情況,但在此基礎(chǔ)上需及時更換培養(yǎng)基中液體,再經(jīng)低滲、消化、固定等操作制備為細胞懸液,再行制片、G 顯帶染色,明確每個標本顯帶選擇清晰、形態(tài)適中的核型行進一步分析。④CMA：嚴格按照Affymetrix Cyto Scan 750K芯片(55 萬CNV 探針和20 萬SNP 探針)的標準操作流程進行檢測：基因組DNA 酶切、連接、聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增、純化、片段化、標記,芯片雜交、洗滌及掃描。數(shù)據(jù)結(jié)果采用Chromosome Analysis Suite (ChAS 3.1)軟件進行分析,CNV 的報告閾值為200 KB 缺失、500 KB 重復(fù)。對CMA 檢出的CNV 結(jié)果判讀,主要參考常用國際公共數(shù)據(jù)庫,如基因組變異數(shù)據(jù)庫(DGV)、美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)臨床突變數(shù)據(jù)庫(Clinvar)、劑量敏感判斷數(shù)據(jù)庫(ClinGen)、拷貝數(shù)變異數(shù)據(jù)庫(Decipher)等公共數(shù)據(jù)庫及本實驗室內(nèi)部數(shù)據(jù)庫進行數(shù)據(jù)分析,將CNVs 分為致病性、疑似致病性、VOUS、可能良性及良性。

1.4 觀察指標①分析超聲異常胎兒的染色體核型分析結(jié)果；②分析超聲異常胎兒的CMA 結(jié)果；③分析超聲異常胎兒的妊娠結(jié)局。

2 結(jié)果

2.1 超聲異常胎兒的染色體核型分析結(jié)果 265 例超聲異常胎兒中,行染色體核型分析的胎兒205 例,共檢出染色體異常29 例,檢出率為14.15%(29/205)。包括染色體數(shù)目異常21 例,占比為72.41%(21/29)；結(jié)構(gòu)異常8 例,占比為27.59%(8/29)。見表1。

表1 21 例染色體數(shù)目異常胎兒的超聲表現(xiàn)

2.2 超聲異常胎兒的CMA 結(jié)果 265 例超聲異常胎兒中共檢出CMA 異常56 例,檢出率為21.13%(56/265),包括染色體核型分析中檢出的染色體數(shù)目異常21 例,另發(fā)現(xiàn)致病性CNVs 9 例,占16.07%(9/56),VOUS 26 例,占46.43%(26/56)。見表2。

表2 CMA 異常胎兒的超聲表現(xiàn)

2.3 超聲異常胎兒的妊娠結(jié)局分析 所有超聲異常胎兒均接受電話隨訪,明確陽性30 例,占11.32%(30/265),引產(chǎn)36 例,流產(chǎn)或因死胎引產(chǎn)12 例。

3 討論

產(chǎn)前細胞遺傳學檢查的首選為染色體核型分析,通過該分析能夠檢出染色體非整倍體性異常及大片段的染色體結(jié)構(gòu)異常等信息［7］。相關(guān)研究顯示［8,9］,常規(guī)的染色體核型分析與胎兒腦部發(fā)育、語言發(fā)育遲緩、生長發(fā)育遲緩等多種癥狀間聯(lián)系密切。

傳統(tǒng)的染色體核型分析需要經(jīng)過細胞培養(yǎng)、制片、染色等復(fù)雜手段,且其分辨率一般為5～10 MB。但是很多遺傳疾病可能是由＜5 MB 的“亞顯微結(jié)構(gòu)異?！睂?dǎo)致,常規(guī)核型分析技術(shù)難以發(fā)現(xiàn)。并且染色體培養(yǎng)的過程較困難,存在一定的細胞培養(yǎng)失敗幾率,給后期的分析和發(fā)報告帶來困難,且孕周＞26 周,羊水中胎兒脫落細胞老化,則不能行核型分析?；蛐酒瑱z測是近年發(fā)展起來的分子生物學檢測方法,其特點是分辨率高、檢測速度快、檢測通量高,可分辨出＞100 KB的染色體片段變異。由于該基因芯片檢測不需要進行細胞培養(yǎng),因此其適用于細胞培養(yǎng)較難成功的檢測樣本,或者有明顯癥狀但常規(guī)核型分析未檢出異常的樣本。基因芯片技術(shù)除了能檢出非整倍體異常,還可在全基因組范圍內(nèi)檢測核型分析難以發(fā)現(xiàn)的微缺失和微重復(fù)、部分嵌合體、雜合性缺失/ 單親二倍體等,一次性同步檢測多種與出生缺陷相關(guān)的基因組異常［10］。但目前基因芯片無法分析染色體的結(jié)構(gòu)變異。

本研究結(jié)果顯示,265 例超聲異常胎兒中,行染色體核型分析的胎兒205 例,共檢出染色體異常29 例,檢出率為14.15%(29/205)。包括染色體數(shù)目異常21 例,占比為72.41%(21/29)；結(jié)構(gòu)異常8 例,占比為27.59%(8/29)。265 例超聲異常胎兒中共檢出CMA 異常56 例,檢出率為21.13%(56/265),包括染色體核型分析中檢出的染色體數(shù)目異常21 例,另發(fā)現(xiàn)致病性CNVs 9 例,占16.07%(9/56),VOUS 26 例,占46.43%(26/56)。所有超聲異常胎兒均接受電話隨訪,明確陽性30 例,占11.32%(30/265),引產(chǎn)36 例,流產(chǎn)或因死胎引產(chǎn)12 例。分析其原因可知超聲異常通常提示染色體異常,且缺乏特異性,作為產(chǎn)前診斷的有效指征,該項檢查可明顯提升染色體異常檢出率［11］。另在分子生物學技術(shù)與常規(guī)染色體核型分析等共同作用下,可有效提高產(chǎn)前遺傳學異常檢出率,有助于減少缺陷胎兒出生率［12,13］。此外,為了減少宮內(nèi)感染導(dǎo)致的超聲異常現(xiàn)象的發(fā)生,要求產(chǎn)婦于孕前行相關(guān)感染檢測,一旦明確感染情況,則需立刻給予對癥治療［14,15］。

綜上所述,產(chǎn)前超聲檢查能夠有效檢出胎兒異常,且其與染色體異常等因素間存在密切聯(lián)系,在臨床應(yīng)用中需結(jié)合染色體核型分析與基因芯片檢測,以提高胎兒發(fā)育異常檢出率,從而改善妊娠結(jié)局,提高新生兒出生質(zhì)量,并為臨床遺傳咨詢等提供可靠信息。