盛玉章,駱 漢,謝永生, 3,王渭玲,李 鎮(zhèn),陳東凱
(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)水土保持研究所,陜西 楊凌 712100; 2.中國科學(xué)院水利部水土保持研究所,陜西 楊凌 712100;3.陜西漢唐農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化研究院,陜西 西安 710000; 4.西北農(nóng)林科技大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)院,陜西 楊凌 712100;5.中南電力設(shè)計院有限公司,湖北 武漢 430071)
秦艽(G.macrophyllaPall.)是龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬(Gentiana)多年生草本植物,以根入藥,《中國藥典》僅將秦艽、麻花艽、粗莖秦艽和小秦艽規(guī)定為正品秦艽,其主要藥用成分有龍膽苦苷和馬錢苷酸等,具有祛風(fēng)濕、清濕熱、止痹痛、退虛熱等作用[1]。由于之前對野生秦艽資源保護(hù)的缺失以及市場對秦艽需求量的持續(xù)增加,野生秦艽資源數(shù)量嚴(yán)重不足。陜西、甘肅等秦艽道地產(chǎn)區(qū)已經(jīng)開展了將近30年的秦艽人工種植[2],但由于秦艽對海拔和環(huán)境要求較高以及人工栽培技術(shù)的不成熟,品種退化、品質(zhì)不好[3]等問題難以解決,極大制約了秦艽產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[4]。施肥是人工調(diào)控植物營養(yǎng)的重要手段,對于保證中藥材產(chǎn)量和品質(zhì)至關(guān)重要[5],氮、磷、鉀是植物生長過程中所需要的大量元素,合理施用可以很好地保證人工栽培中藥材產(chǎn)量和有效成分含量。調(diào)查表明農(nóng)民在種植秦艽過程中缺乏科學(xué)指導(dǎo),施肥往往僅重視產(chǎn)量而忽視了其有效成分的積累,導(dǎo)致秦艽品質(zhì)參差不齊[6]。
有學(xué)者研究了施肥對秦艽產(chǎn)量及有效成分的影響,如吳春等[7]發(fā)現(xiàn)適當(dāng)施用磷、鉀肥可以促進(jìn)環(huán)烯醚萜的積累,通過“3414”施肥方案篩選出秦艽產(chǎn)量—質(zhì)量的最優(yōu)施肥方案為:氮肥21.49~42.03 kg·667m-2,磷肥49.53~65.75 kg·667m-2,鉀肥26.34~42.97 kg·667m-2[6]。李向陽等[8]研究發(fā)現(xiàn)磷肥和尿素施肥比為4∶1時秦艽葉中龍膽苦苷的含量顯著提高。魏莉霞等[9]的研究表明施用尿素、磷二銨和有機(jī)肥均能夠增加秦艽產(chǎn)量,同時尿素有利于秦艽龍膽苦苷的積累。但目前此類研究仍不夠深入,存在試驗設(shè)計簡單、施肥種類單一等問題,因此有必要進(jìn)一步開展研究。針對秦艽種植中施肥不合理的問題,本試驗通過三因素二次D-飽和最優(yōu)設(shè)計進(jìn)行配方施肥,建立數(shù)學(xué)模型分析研究不同施用量下氮、磷、鉀肥對秦艽產(chǎn)量及其主要藥用成分的影響,以探明秦艽的優(yōu)化施肥模式,為秦艽規(guī)范化種植提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。
試驗區(qū)位于陜西省寶雞市隴縣八渡鎮(zhèn)桃園村(34°45′11″N,106°52′43″E),地處關(guān)中平原西部,屬暖溫帶大陸性季風(fēng)氣候,年平均氣溫10.7℃,無霜期200 d,日照時數(shù)2 033.3 h,年平均降雨量為600.1 mm。土壤類型為棕壤,選擇2019年開始種植秦艽的地塊進(jìn)行試驗,播種株行距為0.25 m×0.25 m,施肥和灌溉為當(dāng)?shù)爻R?guī)水平。試驗開始前使用五點采樣法采集0~20、20~40 cm土層土樣,風(fēng)干后過1 mm篩,用電位測定法測定土壤pH,用堿解擴(kuò)散法測定土壤堿解氮含量,用0.5 mol·L-1NaHCO3浸提-鉬銻抗比色法測定土壤有效磷含量,用1 mol·L-1NH4OAC浸提-火焰光度法測定土壤速效鉀含量,土壤有機(jī)質(zhì)含量用重鉻酸鉀容量法測定[10]。土壤基礎(chǔ)農(nóng)化性狀見表1。
表1 土壤農(nóng)化性狀Table 1 Soil agrochemical traits
供試材料由陜西省寶雞市隴縣八渡鎮(zhèn)桃園村藥農(nóng)提供,經(jīng)西北農(nóng)林科技大學(xué)徐福利教授鑒定為秦艽(G.macrophyllaPall.)。試驗于2021年7月13日開始,此時秦艽處于花期,選擇植株長勢相近的地塊共120 m2,采用三因素二次飽和D-最優(yōu)設(shè)計方案設(shè)計,以不施肥為空白對照,設(shè)10個處理,3次重復(fù),共30個小區(qū),小區(qū)面積為4 m2,隨機(jī)區(qū)組排列。試驗施肥設(shè)計編碼值及施肥量見表2。試驗開始后,氮肥(尿素,N 46.4%)、磷肥(過磷酸鈣,P2O512%)、鉀肥(硫酸鉀,K2O 51%)一次性施入各小區(qū)。生育期全程不灌溉,田間管理同當(dāng)?shù)亍?021年10月31日進(jìn)行秦艽根的收獲及取樣。
表2 秦艽施肥設(shè)計方案Table 2 Fertilization design scheme of G. macrophylla Pall.
于2021年10月31日將各小區(qū)秦艽根全部采挖收獲,清水洗凈后,用烘箱在55℃下烘干48 h至恒重,各處理分別稱重并折算出公頃產(chǎn)量。將烘干后的秦艽根研磨至粉末,過3號篩。取粉末0.2 g置于具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇100 ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250 W,頻率40 kHz)30 min,放冷,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過濾,取續(xù)濾液,即得待測液,通過高效液相色譜法[3]測定龍膽苦苷、馬錢苷酸含量。
使用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理分類,運用SPSS 21進(jìn)行單因素ANOVA方差分析,DPSv 7.05軟件進(jìn)行線性回歸分析,Excel、Matlab進(jìn)行作圖。
以表2中氮(X1)、磷(X2)、鉀(X3)編碼值為自變量,以表3中秦艽產(chǎn)量(Y1)為因變量進(jìn)行二次多項式回歸,得到肥效方程:
Y1=2115.851+79.005X1+81.069X2-
0.214X3-50.68X12-204.627X22+
78.067X32-0.492X1X2-0.351X1X3+
4.572X2X3
(1)
該方程F檢驗結(jié)果為F=19.602>F0.01(9,20)=3.46,表明回歸關(guān)系極顯著,說明該方程能夠很好地反映各施肥量與秦艽產(chǎn)量之間的關(guān)系。
以表2中氮(X1)、磷(X2)、鉀(X3)編碼值為自變量,以表3中龍膽苦苷含量(Y2)為因變量進(jìn)行二次多項式回歸,得到肥效方程:
表3 氮、磷、鉀肥對秦艽產(chǎn)量以及品質(zhì)的影響Table 3 The effects of N, P and K fertilizationon the yield quality indicators of G. macrophylla Pall.
Y2=7.407+0.393X1+0.57X2-0.025X3-
0.225X12-0.354X22+0.034X32+
0.279X1X2-0.156X1X3-0.105X2X3
(2)
F=53.198>F0.01(9,20)=3.46,表明回歸關(guān)系極顯著,說明該方程能夠很好地反映各施肥量與龍膽苦苷含量之間的關(guān)系。
同理,馬錢苷酸的肥效方程為:
Y3=2.074+0.053X1+0.084X2+0.027X3-
0.036X12-0.132X22-0.119X32+
0.007X1X2-0.001X1X3-0.023X2X3
(3)
F=19.172>F0.01(9,20)=3.46,表明回歸關(guān)系極顯著,說明該方程能夠很好地反映各施肥量與馬錢苷酸含量之間的關(guān)系。
由于氮、磷、鉀肥和秦艽產(chǎn)量及龍膽苦苷、馬錢苷酸回歸方程中實際施肥量與編碼值之間存在線性代換關(guān)系,因此各偏回歸系數(shù)絕對值大小可以直接反映各因子的重要程度。式(1)中氮、磷、鉀肥的一次項絕對值系數(shù)分別為79.005、81.069、0.214,式(2)中氮、磷、鉀肥的一次項絕對值系數(shù)分別為0.393、0.570、0.025,式(3)中氮、磷、鉀肥的一次項絕對值系數(shù)分別為0.053、0.084、0.027。各式中絕對值系數(shù)大小規(guī)律均表現(xiàn)為:磷肥>氮肥>鉀肥,說明磷肥對秦艽產(chǎn)量以及龍膽苦苷、馬錢苷酸含量影響最大,氮肥次之,鉀肥最小。
2.3.1 氮、磷、鉀肥單因素效應(yīng)分析 使用降維法[11],將式(1)、式(2)、式(3)中任意2個自變量固定為0,即可分別得到氮、磷、鉀肥與秦艽產(chǎn)量、龍膽苦苷含量、馬錢苷酸含量的單因子效應(yīng)方程,根據(jù)方程分別作圖。
從圖1A可以看出,氮、磷的產(chǎn)量單因子效應(yīng)方程開口向下,而鉀的開口向上,氮肥曲線拐點編碼值為0.5左右,磷肥和鉀肥的曲線拐點編碼值均為0左右;本試驗范圍內(nèi)秦艽產(chǎn)量隨氮、磷肥施用量的增加先增加后降低,隨鉀肥施用量的增加先降低后增加。氮、磷的龍膽苦苷含量單因子效應(yīng)方程開口向下,鉀的單因子效應(yīng)方程開口向上,氮、磷肥曲線的拐點編碼值在0.75左右,鉀肥的曲線拐點編碼值在0.5左右;在本試驗范圍內(nèi),龍膽苦苷含量隨氮肥和磷肥施用量增加先上升后降低,隨鉀肥施用量的增加先降低后增加,但變化幅度很小(圖1B)。氮、磷、鉀的馬錢苷酸含量單因子效應(yīng)方程開口均向下,其中,氮肥曲線拐點在1.0左右,磷肥曲線拐點在0.25左右,鉀肥曲線拐點在0左右;試驗范圍內(nèi)秦艽馬錢苷酸含量均隨氮肥施用量的增加而增加,隨磷肥和鉀肥施用量的增加呈先增加后減少的趨勢(圖1C)。
圖1 氮、磷、鉀與秦艽產(chǎn)量(A)、龍膽苦苷含量(B)以及馬錢苷酸含量(C)的單因子效應(yīng)分析Fig.1 Single factor analysis of N, P and K fertilizationon the yield(A), gentiopicroside content(B) and />loganinic acid content (C)of G. macrophylla Pall.
2.3.2 雙因素間交互作用分析 本試驗建立的秦艽產(chǎn)量以及龍膽苦苷、馬錢苷酸含量回歸模型中,存在氮磷、氮鉀、磷鉀交互項,其偏回歸系數(shù)均達(dá)到顯著水平,說明氮、磷、鉀肥之間存在互作效應(yīng),共同對秦艽產(chǎn)量和龍膽苦苷以及馬錢苷酸的積累產(chǎn)生了影響。使用降維法將式(1)、式(2)和式(3)中任意一個編碼值變?yōu)?,研究其余兩因素之間的交互作用,并作曲面圖(圖2)。
由圖2A、2D、2G可知,氮磷互作效應(yīng)中,氮、磷對秦艽產(chǎn)量、龍膽苦苷含量和馬錢苷酸含量的交互作用曲面均開口向下。秦艽產(chǎn)量、馬錢苷酸含量最小時氮、磷的編碼值均為-1,最大時氮的編碼值為1,磷的編碼值為0,秦艽產(chǎn)量和馬錢苷酸含量在氮肥施用量不變的情況下隨磷肥施用量的增加先增加后降低,在磷肥施用量不變的情況下隨氮肥施用量的增加而略增加。氮、磷對秦艽龍膽苦苷含量的積累具有明顯的交互促進(jìn)作用,龍膽苦苷含量最高時氮、磷的編碼值均為1。
由圖2B、2E、2H可知,氮鉀互作效應(yīng)中,氮、鉀對秦艽產(chǎn)量的交互作用曲面開口向上,對龍膽苦苷和馬錢苷酸含量的交互作用曲面開口向下。當(dāng)?shù)?、鉀編碼值均為1時秦艽產(chǎn)量達(dá)到最大,氮、鉀編碼值為-1、0時產(chǎn)量最小;高水平鉀肥施用量下氮、鉀對秦艽產(chǎn)量的增加具有交互促進(jìn)作用。龍膽苦苷含量最大時氮、鉀的編碼值為1、-1;低水平鉀肥施用量下龍膽苦苷含量隨鉀肥施用量增加而降低,高水平下隨鉀肥施用量增加而增加。馬錢苷酸含量最小時氮、鉀的編碼值均為-1,最大時氮的編碼值為1,鉀的編碼值為0;馬錢苷酸含量在氮肥施用量不變的情況下隨鉀肥施用量的增加先增加后降低,在鉀肥施用量不變的情況下隨氮肥施用量的增加而增加。
由圖2C、2F、2I可知,磷鉀互作效應(yīng)中,磷、鉀對秦艽產(chǎn)量、龍膽苦苷、馬錢苷酸含量的交互作用曲面開口均向下。秦艽產(chǎn)量最大時磷、鉀的編碼值為0、-1;當(dāng)磷肥施用量較低,鉀肥施用量較高時,磷、鉀對秦艽產(chǎn)量的增加具有明顯的交互促進(jìn)作用,當(dāng)磷肥、鉀肥施用量較高時,磷、鉀對秦艽產(chǎn)量的增加表現(xiàn)出交互抑制作用。鉀肥的施用對龍膽苦苷含量影響很小,龍膽苦苷含量隨磷肥施用量的增加而增加。馬錢苷酸含量最大值出現(xiàn)時磷、鉀的編碼值均為0;磷、鉀肥施用量較低時對馬錢苷酸的積累具有交互促進(jìn)作用,施用量較高時則表現(xiàn)為交互抑制。
秦艽產(chǎn)量效應(yīng)函數(shù)(式1)的Hessian矩陣各階順序主子行列式分別為︱A1︱=-101.36、︱A2︱=4.15×104、︱A3︱=6.48×106,判定矩陣A為不定矩陣,函數(shù)為非典型函數(shù),因此采用頻率分析法尋優(yōu)[12]。根據(jù)試驗結(jié)果,選擇目標(biāo)產(chǎn)量大于2 100.0 kg·hm-2的范圍為產(chǎn)量優(yōu)域。當(dāng)X1取0.213~0.764、X2取-0.086~0.318、X3取-0.385~0.431時,即施氮(N)136.4~198.4 kg·hm-2、磷(P2O5)68.6~98.9 kg·hm-2、鉀(K2O)69.2~160.9 kg·hm-2時,秦艽目標(biāo)產(chǎn)量大于2 100.0 kg·hm-2(表4)。
表4 秦艽產(chǎn)量超過2 100.0 kg·hm-2時的因素取值頻率分布Table 4 Frequency distribution of factor values when the yield output of G. macrophylla Pall.exceeds 2 100.0 kg·hm-2
同理,龍膽苦苷含量效應(yīng)函數(shù)(式2)以及馬錢苷酸含量效應(yīng)函數(shù)(式3)均為非典型函數(shù),采用頻率分析法尋優(yōu)。龍膽苦苷含量超過7.5%時的施肥量為氮(N)147.2~200.1 kg·hm-2、磷(P2O5)92.6~137.1 kg·hm-2、鉀(K2O)58.9~147.5 kg·hm-2(表5)。馬錢苷酸含量大于2.0%時的施肥量為氮(N)134.5~185.1 kg·hm-2、磷(P2O5)74.8~113.6 kg·hm-2、鉀(K2O)95.8~134.2 kg·hm-2(表6)。
表5 龍膽苦苷含量超過7.5%時的因素取值頻率分布Table 5 Frequency distribution of factor values when the gentiopicroside content exceeds 7.5%
表6 馬錢苷酸含量超過2.0%時的因素取值分布Table 6 Value distribution of factors when the loganinic acid content exceeds 2.0%
中國藥典[1]規(guī)定秦艽中龍膽苦苷和馬錢苷酸的總含量不低于2.5%,因此在秦艽的種植中應(yīng)同時保證產(chǎn)量與藥用成分含量。結(jié)合秦艽產(chǎn)量、龍膽苦苷含量、馬錢苷酸含量三者的尋優(yōu)結(jié)果,可以得到秦艽產(chǎn)量、龍膽苦苷含量、馬錢苷酸含量的最優(yōu)施肥區(qū)間,結(jié)果表明秦艽產(chǎn)量超過2 100.0 kg·hm-2、龍膽苦苷含量超過7.5%、馬錢苷酸含量超過2.0%時的施肥區(qū)間為氮(N)147.2~185.1 kg·hm-2、磷(P2O5)92.6~98.9 kg·hm-2、鉀(K2O)95.8~134.2 kg·hm-2。
氮、磷、鉀是植物生長發(fā)育所必需的大量營養(yǎng)元素。氮、磷兩種元素是植物體內(nèi)蛋白質(zhì)和酶的重要組成部分[13],在中藥材有效成分的積累過程中發(fā)揮巨大作用,磷、鉀會促進(jìn)中藥材根系的生長[14]。龍膽苦苷和馬錢苷酸均為環(huán)烯醚萜類物質(zhì),屬于萜類化合物,研究表明異戊二烯為萜類化合物的結(jié)構(gòu)單元,其合成的前體物質(zhì)異戊烯焦磷酸(IPP)及其異構(gòu)體二甲基烯丙基焦磷酸酯(DMAPP)通過MVA途徑和MEP途徑合成[15]。合成途徑中的底物包括諸如乙酰輔酶A、丙酮酸和磷酸甘油醛以及參與合成的各種酶,氮、磷兩種元素作為其原料參與了萜類化合物的合成[16],鉀元素則主要通過滲透調(diào)節(jié)作用影響秦艽次生代謝過程[17]。因此,在中藥材生產(chǎn)過程中合理施用氮、磷、鉀肥既可以增加產(chǎn)量又能保證中藥材的品質(zhì)。張青云等[18]、李明等[19]對甘草的研究表明,肥料對甘草產(chǎn)量影響大小分別為:磷>鉀>氮,對甘草總黃酮含量影響大小為:磷>氮>鉀;施田田等[20]的研究表明肥料對丹參產(chǎn)量影響的強(qiáng)弱順序分別為:氮>鉀>磷;胡佳棟等[21]的研究發(fā)現(xiàn)肥料對黨參產(chǎn)量及黨參炔苷影響程度分別為:氮>鉀>磷,磷>氮>鉀;王占紅等[22]對黃精的研究表明肥料對黃精產(chǎn)量及多糖含量影響強(qiáng)弱分別為:磷>鉀>氮,鉀>氮>磷。在本研究中氮、磷、鉀3種元素對秦艽產(chǎn)量及龍膽苦苷、馬錢苷酸含量的影響大小均表現(xiàn)為:磷>氮>鉀。與前人結(jié)果有所不同,可能與不同植物營養(yǎng)特性差異以及各試驗區(qū)土壤肥力情況不同有關(guān)[8]。
本研究結(jié)果表明,施肥處理下秦艽產(chǎn)量、龍膽苦苷、馬錢苷酸含量均大于對照(表3),通過合理配施肥料能夠有效提升中藥材產(chǎn)量和有效成分含量,王婧等[23]、金冬雪等[24]、趙亞蘭等[25]對黃芩、桔梗、黨參的研究中也出現(xiàn)相同的結(jié)果。對氮、磷、鉀的單因素效應(yīng)分析表明,氮、磷肥對秦艽產(chǎn)量及其有效成分積累的影響大于鉀肥,適宜的氮、磷、鉀肥施用量對秦艽產(chǎn)量的增長以及藥用成分積累具有促進(jìn)作用。本研究發(fā)現(xiàn)氮、磷、鉀肥在秦艽生長和有效成分積累過程中具有交互作用,對氮、磷、鉀的雙因素效應(yīng)分析表明高水平鉀肥施用量下氮、鉀,低水平磷肥施用量、高水平鉀肥施用量下磷、鉀,對秦艽產(chǎn)量的增加具有交互促進(jìn)作用;高水平磷、鉀肥施用量下,磷、鉀對秦艽產(chǎn)量的增加表現(xiàn)出交互抑制作用。氮、磷對龍膽苦苷的積累具有交互促進(jìn)作用;磷、鉀肥施用量較低時二者對馬錢苷酸的積累具有交互促進(jìn)作用,施用量較高時則表現(xiàn)為交互抑制。李福安等[26]的研究發(fā)現(xiàn)在秦艽種植過程中施用適量草木灰、麻渣、尿素、復(fù)合肥對其產(chǎn)量以及龍膽苦苷含量的增長具有促進(jìn)作用,但并未進(jìn)行深入研究。吳春等[6]通過“3414”試驗方案研究了粗莖秦艽質(zhì)量與產(chǎn)量對施肥的響應(yīng),得出最佳N、P2O5、K2O比例為1∶0.33~0.85∶0.50~1.60。曾羽等[27]研究了農(nóng)家肥、草木灰、過磷酸鈣3種底肥對秦艽產(chǎn)量及品質(zhì)的影響,結(jié)果表明農(nóng)家肥2 000 kg·667m-2,過磷酸鈣20 kg·667m-2,草木灰100 kg·667m-2作為底肥時秦艽產(chǎn)量和品質(zhì)最好。本試驗條件下秦艽產(chǎn)量超過2 100.0 kg·hm-2、龍膽苦苷含量超過7.5%、馬錢苷酸含量超過2.0%時的施肥區(qū)間為氮(N)147.2~185.1 kg·hm-2、磷(P2O5)92.6~98.9 kg·hm-2、鉀(K2O)95.8~134.2 kg·hm-2,N、P2O5、K2O的最佳配施比例為1∶1.49~2.00∶1.10~1.93。道地藥材是指生長在特定自然條件、生態(tài)環(huán)境的地域,通過特定生產(chǎn)過程所產(chǎn)的藥材較其他地區(qū)所產(chǎn)的同種藥材品質(zhì)更佳,療效更好[28],氣候、土壤因素對于中藥材的產(chǎn)量和品質(zhì)影響很大,因此本試驗通過尋優(yōu)得到的最佳施肥方案在實際應(yīng)用過程中應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)刈匀画h(huán)境條件進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
1)氮、磷、鉀3種元素對秦艽產(chǎn)量以及龍膽苦苷、馬錢苷酸含量的影響表現(xiàn)為:磷>氮>鉀。
2)適宜的氮肥、磷肥施用量可以增加秦艽產(chǎn)量以及龍膽苦苷和馬錢苷酸含量,而施用量過高則會產(chǎn)生抑制作用;鉀肥對馬錢苷酸的影響和氮、磷肥相同,但鉀肥的施用不利于秦艽龍膽苦苷的積累。
3)在關(guān)中平原地區(qū),本試驗條件下秦艽產(chǎn)量超過2 100.0 kg·hm-2、龍膽苦苷含量超過7.5%、馬錢苷酸含量超過2.0%時的施肥區(qū)間為氮(N)147.2~185.1 kg·hm-2、磷(P2O5)92.6~98.9 kg·hm-2、鉀(K2O)95.82~134.2 kg·hm-2,N、P2O5、K2O的最佳比例為1∶1.49~2.00∶1.10~1.93。