當(dāng)歸飲子及其拆方對慢性濕疹豚鼠皮毛疏泄與潤澤功能狀態(tài)的影響

高 志，馬靜怡，武亦閣，范麗娜，賀 乙，周 光

(新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011)

濕疹是由素體在多種因素誘發(fā)下的臨床難治性皮膚病，病理組織形態(tài)表明可累及皮膚表皮及真皮淺層[1]，引起表皮屏障功能障礙。中醫(yī)皮毛“疏泄肌表”和“潤澤肌膚”的功能和狀態(tài)與西醫(yī)“表皮屏障功能”趨同，其功能障礙是臨床皮膚病的共性機(jī)制[2-3]。皮毛“疏泄肌表”和“潤澤肌膚”的功能和狀態(tài)是課題組對皮毛“衛(wèi)外作用”理論的研究詮釋，皮毛“開闔”功能和生理狀態(tài)反映了皮毛的“疏泄”作用，皮毛“潤澤肌膚”是指皮毛的正常生理和功能表現(xiàn)需要氣血津液的正常敷布與潤養(yǎng)。歷代醫(yī)家對苔蘚化皮損為特征的濕疹患者多從血虛風(fēng)燥證論治[4]，多以當(dāng)歸飲子加減治療。當(dāng)歸飲子(出自《重訂嚴(yán)氏濟(jì)生方》)具有祛風(fēng)止癢、養(yǎng)血潤燥之功效，課題組前期研究表明當(dāng)歸飲子能夠降低豚鼠血清IgE水平，減輕瘙癢癥狀，平衡血清白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)水平，調(diào)節(jié)皮膚水通道蛋白AQP3及皮膚角質(zhì)層含水量和經(jīng)皮水分散失量[5]?；谡n題組前期研究，本實驗以方測證，觀察了當(dāng)歸飲子“疏泄”與“潤澤”組方用藥對皮膚角質(zhì)層含水量和經(jīng)皮水分散失量的影響，研究當(dāng)歸飲子調(diào)節(jié)皮膚屏障功能的關(guān)鍵用藥和配伍意義。

1 實驗材料與方法

1.1動物 雄性豚鼠40只，體重(350±20)g，購自陜西君行生物科技有限公司，合格證號：SCXK(陜)2017-001。實驗動物飼養(yǎng)環(huán)境為普通級環(huán)境實驗室，光照12 h，自由攝食飲水，豚鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實驗。本實驗得到新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院動物倫理委員會批準(zhǔn)(IACUC-20160218-076)。

1.2藥物、試劑及儀器 當(dāng)歸飲子：當(dāng)歸10 g、白芍藥10 g、川芎10 g、生地黃10 g、白蒺藜10 g、防風(fēng)10 g、荊芥10 g、何首烏5 g、黃芪5 g、炙甘草5 g、生姜3 g。當(dāng)歸飲子去疏泄藥組：當(dāng)歸10 g、白芍藥10 g、川芎10 g、生地黃10 g、何首烏5 g、黃芪5 g、炙甘草5 g。當(dāng)歸飲子去潤澤藥組：白蒺藜10 g、荊芥10 g、防風(fēng)10 g、黃芪5 g、炙甘草5 g。飲片購自新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院中藥房。將中藥采用傳統(tǒng)煎煮方法常規(guī)煎煮2次，合并濾液后通過95 ℃水浴鍋濃縮后保存?zhèn)溆谩．?dāng)歸飲子藥液生藥濃度為1.36 g/mL，當(dāng)歸飲子去疏泄藥的生藥濃度為0.85 g/mL，當(dāng)歸飲子去潤澤藥的生藥濃度為0.62 g/mL。2，4-二硝基氯苯(DNCB)購自上海古朵生物科技有限公司(批號：20191210)，丙酮購自天津富宇精細(xì)化工有限公司(批號：20190608)。德國CK公司MPA6/10型多功能皮膚測試儀；德國Sartorius公司BL310/BL21S型分析天平；上海菁海儀器有限公司DY15K型電子天平。

1.3造模溶液的制備 致敏溶液的制備：稱取DNCB 3.50 g，溶解于50 mL丙酮中制成7% DNCB丙酮溶液作為實驗的致敏溶液；激發(fā)溶液的制備：稱取DNCB 0.10 g，溶解于100 mL丙酮中制成0.1% DNCB丙酮溶液作為實驗的激發(fā)溶液。

1.4實驗方法 實驗豚鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常組、模型組、當(dāng)歸飲子全方組、當(dāng)歸飲子去潤澤藥組、當(dāng)歸飲子去疏泄藥組，每組8只。參照文獻(xiàn)[5-6]方法造模：實驗第1天將豚鼠背部脫毛,范圍約3 cm×3 cm，除正常組外，其余各組豚鼠背部脫毛區(qū)以7% DNCB丙酮溶液100 μL外涂致敏,實驗第5天除正常組外所有豚鼠右耳內(nèi)側(cè)以0.1% DNCB丙酮溶液25 μL外涂激發(fā)，每周涂藥1次,連續(xù)涂藥4周。豚鼠背部致敏區(qū)皮損呈現(xiàn)紅斑、丘疹、苔蘚樣變,并且伴有明顯搔抓跡象，豚鼠右耳局部滲出減少且伴有少量皮屑，提示血虛風(fēng)燥型慢性濕疹模型造模成功。于造模結(jié)束后第2天，按人與豚鼠體表面積比例換算豚鼠給藥劑量，當(dāng)歸飲子全方組給予1.36 mg/mL當(dāng)歸飲子全方水煎液6.82 g/kg灌胃，當(dāng)歸飲子去潤澤藥組給予0.62 g/mL當(dāng)歸飲子去潤澤藥水煎液4.26 g/kg灌胃,當(dāng)歸飲子去疏泄藥組給予0.85 g/mL當(dāng)歸飲子去疏泄藥水煎液3.10 g/kg灌胃，正常組和模型組給予等體積純凈水灌胃，均1次/d，連續(xù)灌胃2周。

1.5觀察指標(biāo)與方法

1.5.1皮損評分 分別于造模結(jié)束當(dāng)日和末次灌胃結(jié)束當(dāng)日對各組豚鼠背部皮損(紅斑、水腫、抓痕)進(jìn)行評分。紅斑：按無、輕微、明顯、中度紅斑伴輕中度痂皮、重度紅斑伴重度痂皮分別賦予0，1，2，3，4分；水腫按無、輕度、中度、重度分別賦予0，1，2，3分；抓痕按無、有賦予0，1分；將各指標(biāo)得分相加得到總積分，最高分為8分[7]。

1.5.2皮膚角質(zhì)層含水量和經(jīng)皮水分散失量 采用德國CK公司MPA6/10型儀器檢測，將儀器測試探測頭垂直放在測試皮膚上面，儀器電腦系統(tǒng)顯示數(shù)據(jù)。

2 結(jié) 果

2.1各組豚鼠皮損評分 末次灌胃結(jié)束后，模型組皮損評分明顯高于正常組(P<0.05)，當(dāng)歸飲子全方組、當(dāng)歸飲子去疏泄藥組、當(dāng)歸飲子去潤澤藥組均明顯低于模型組(P均<0.05)，各藥物組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 正常組和慢性濕疹各組豚鼠皮損評分比較分)

2.2各組豚鼠皮膚角質(zhì)層含水量比較 造模結(jié)束當(dāng)日，各造模組豚鼠皮膚角質(zhì)層含水量均明顯低于正常組(P均<0.05)，各造模組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。末次灌胃結(jié)束后，模型組皮膚角質(zhì)層含水量明顯低于正常組(P<0.05)，當(dāng)歸飲子全方組、當(dāng)歸飲子去疏泄藥組、當(dāng)歸飲子去潤澤藥組皮膚角質(zhì)層含水量均明顯高于模型組(P均<0.05)，但當(dāng)歸飲子去疏泄藥組和當(dāng)歸飲子去潤澤藥組皮膚角質(zhì)層含水量均明顯低于當(dāng)歸飲子全方組(P均<0.05)。見表2。

表2 正常組和慢性濕疹各組豚鼠皮膚角質(zhì)層含水量比較

2.3各組豚鼠經(jīng)皮水分散失量比較 造模結(jié)束當(dāng)日，各造模組豚鼠經(jīng)皮水分散失量均明顯高于正常組(P均<0.05)，各造模組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。末次灌胃結(jié)束后，模型組經(jīng)皮水分散失量明顯高于正常組(P<0.05)，當(dāng)歸飲子全方組、當(dāng)歸飲子去疏泄藥組、當(dāng)歸飲子去潤澤藥組經(jīng)皮水分散失量均明顯低于模型組(P均<0.05)，各藥物組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，但趨勢全方組優(yōu)于各拆方組。見表3。

表3 正常組和慢性濕疹各組豚鼠經(jīng)皮水分散失量比較

3 討 論

濕疹纏綿反復(fù)，遷延不愈，其病因復(fù)雜而不明確?，F(xiàn)代研究表明皮膚屏障功能障礙是臨床常見皮膚病的主要發(fā)病機(jī)制[8]，慢性濕疹皮膚干燥伴隨著表皮屏障功能障礙，多表現(xiàn)為皮膚水分過度散失，從而引起皮膚干燥脫屑，同時促進(jìn)皮膚炎癥因子的釋放[9]。中醫(yī)認(rèn)為濕疹患者多為稟賦不耐，素體脾虛，或為飲食不節(jié)，或為外邪誘發(fā)，病情反復(fù)，邪熱蘊膚，化熱耗傷津血，肌膚失養(yǎng)，皮膚脫屑、干燥、苔蘚化。究其根本為濕熱蘊膚，玄府、腠理阻塞，皮毛“疏泄”失調(diào)，濕熱蘊久，耗傷陰血，皮毛津血不足，“潤澤”失司。皮毛“疏泄”與“潤澤”的功能與狀態(tài)與表皮屏障功能密切相關(guān)，二者之間具有趨同性[10-11]。

皮膚角質(zhì)層含水量和經(jīng)皮水分散失量在一定程度反映了表皮通透屏障功能狀態(tài)，其中皮膚角質(zhì)層含水量可直觀反映皮膚潤澤狀態(tài)，經(jīng)皮水分散失量和表面皮脂在一定程度上反映肌表疏泄的功能狀態(tài)[12-13]。表皮水分散失過多反映皮毛衛(wèi)外不固，疏泄水濕過度，有損津血，皮毛失于濡養(yǎng);水分散失過低反映邪蘊皮毛，玄府、腠理疏泄不暢;皮膚皮脂含量過高反映濕熱邪毒蘊結(jié)皮毛，疏泄不足，濡養(yǎng)障礙;皮膚皮脂含量過低反映氣血濡養(yǎng)，潤澤不足。由此可見，中醫(yī)皮毛“疏泄”與“潤澤”功能理論及調(diào)控經(jīng)驗為西醫(yī)“表皮通透屏障功能”研究提供了思路。

當(dāng)歸飲子組成藥物主要為“養(yǎng)血潤澤”藥組(當(dāng)歸、川芎、生地黃、白芍藥、何首烏、炙甘草)和“疏泄敷布津血”藥組(黃芪、白蒺藜、防風(fēng)、荊芥、生姜)，許多前世醫(yī)家將其應(yīng)用于陰血虧損合并風(fēng)邪的多種皮膚病如瘙癢癥、濕疹、蕁麻疹等[14-16]，能有效緩解瘙癢，減少鱗屑，改善皮膚肥厚癥狀。課題組前期實驗研究顯示，該方對濕疹等免疫相關(guān)變態(tài)反應(yīng)性疾病皮膚屏障具有調(diào)節(jié)作用[5]，并認(rèn)為血虛風(fēng)燥證慢性濕疹之風(fēng)為“風(fēng)象”，而非風(fēng)邪。當(dāng)歸飲子組方中當(dāng)歸辛潤甘緩，通絡(luò)養(yǎng)血潤燥；白芍苦、酸入肝脾經(jīng)，養(yǎng)血和營衛(wèi)；生地黃性味甘寒，涼血養(yǎng)血，且能養(yǎng)陰生津；何首烏性甘溫，補肝腎，益精血；川芎性溫，行氣活血，通絡(luò)行營衛(wèi)；黃芪益氣托毒，斂瘡生??；方中辛潤甘緩之當(dāng)歸、白芍、生地黃、何首烏乃養(yǎng)血滋陰藥，配甘溫流氣之川芎、黃芪，可敷布津血于皮毛，養(yǎng)血潤燥，改善皮毛之干燥癥狀?！秲?nèi)經(jīng)》提出辛味藥治“腎燥”。腎精虧而津血不足，膚失潤養(yǎng)是臨床干燥性皮膚病的主要內(nèi)因。故當(dāng)歸飲子方中辛潤甘緩之當(dāng)歸、白芍、生地黃、何首烏又配以辛散透表之防風(fēng)、荊芥、白蒺藜、生姜，一則疏泄蘊結(jié)皮毛之邪，二則助津血之藥敷布于皮毛。縱觀全方，雖為養(yǎng)血潤燥之方，但養(yǎng)血之中孕育著“疏泄”與“潤澤”皮毛之玄機(jī)。

拆方研究是研究中醫(yī)組方用藥規(guī)律，探索名家用藥配伍經(jīng)驗的有效方法，能夠優(yōu)化中藥復(fù)方，為尋找最佳組方和關(guān)鍵藥物提供科學(xué)依據(jù)。通過當(dāng)歸飲子拆方實驗，課題組認(rèn)為當(dāng)歸飲子治療慢性濕疹主要以養(yǎng)血潤燥、辛散透表的配伍組合改善皮毛“疏泄?fàn)顟B(tài)”與“潤澤狀態(tài)”，以修復(fù)表皮通透屏障功能，因此將當(dāng)歸飲子拆分成“去疏泄”藥組和“去潤澤”藥組進(jìn)行驗證實驗。本次實驗研究顯示，當(dāng)歸飲子組豚鼠皮膚角質(zhì)層含水量明顯高于模型組，經(jīng)皮水分散失量明顯低于模型組，說明當(dāng)歸飲子能夠提高皮膚角質(zhì)層含水量，維護(hù)皮毛“疏泄”與“潤澤”狀態(tài)，提高皮膚屏障功能，解決皮毛干燥問題；而當(dāng)歸飲子去潤澤藥組和當(dāng)歸飲子去疏泄藥組豚鼠皮膚角質(zhì)層含水量較當(dāng)歸飲子組低，經(jīng)皮水分散失量有所提高，說明“疏泄”藥組和“潤澤”藥組的配伍結(jié)構(gòu)在治療中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。

綜上所述，當(dāng)歸飲子能夠改善慢性濕疹豚鼠皮膚角質(zhì)層含水量和經(jīng)皮水分散失量，即能夠改善皮毛“疏泄”與“潤澤”功能狀態(tài)，修復(fù)表皮通透屏障功能，從而緩解皮膚干燥狀態(tài)，其效果優(yōu)于拆方組，作用機(jī)制與當(dāng)歸飲子“疏泄”藥組和“潤澤”藥組的配伍結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，體現(xiàn)出中醫(yī)經(jīng)典方劑當(dāng)歸飲子的組方特點和配伍的科學(xué)性。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。