血清25-(OH)D與結直腸癌患者臨床特征的關系

常 鑫，吳 婧，張浩鵬，紀 琴，陳 盼，李 海

結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，是全球第三大常見癌癥，病死率僅次于肺癌，發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。維生素D作為一種營養(yǎng)性維生素，其受體廣泛分布于人體腸道中，血清25-(OH)D水平是反映機體維生素D含量的最佳指標[2]。大量流行病學和臨床觀察性研究發(fā)現(xiàn)維生素D在癌癥預防和治療中的有益作用，國外相關研究發(fā)現(xiàn)結直腸癌的發(fā)病風險及生存期與維生素D攝入量及血清25(OH)D水平呈負相關關系[3]，但也有相關研究顯示，接受維生素D補充劑的人群和對照組在總生存率方面差異無統(tǒng)計學意義[4]。關于維生素D與結直腸癌之間的相關性一直存在很多爭議，本研究擬通過研究血清25-(OH)D與結直腸癌患者臨床病理特征、腫瘤標志物癌胚抗原(CEA)和糖類抗原199(CA199)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及表皮生長因子受體(EGFR)之間的關系，進而為結直腸癌的化學預防提供線索及數(shù)據(jù)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2020年12月至2021年10月期間，就診于寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院的結直腸癌患者256例，經(jīng)篩選最終納入234例，所有患者的臨床病例資料完整。該研究已通過寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院醫(yī)學科研倫理審查委員會批準(KYLL20220437)。

1.1.1 納入標準：符合WHO制定的結直腸癌的診斷標準；經(jīng)手術或腸鏡病理組織活檢確診；研究對象無外源性維生素D(藥物等)補充；臨床資料完整無缺失；未實施術前化、放療；參照第8版AJCC指南診斷結直腸癌并進行臨床分期[5]。

1.1.2 排除標準：炎性反應感染者、心血管病變、糖尿病、肝腎功能不全、家族性腺瘤性息肉、多發(fā)性結直腸息肉、肛管癌患者；甲狀旁腺機能亢進或接受過甲狀旁腺切除術者；患有影響維生素D吸收的一些疾病者，如腹瀉、慢性胰腺炎、膽道梗阻、結腸炎、小腸部分切除等；合并其他惡性腫瘤者；臨床資料不完整者。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床資料收集：收集性別、年齡、腫瘤大體類型、腫瘤最大直徑、原發(fā)部位、分化程度、浸潤深度、淋巴結有無轉移等臨床病理資料。采集結直腸癌患者術前的清晨空腹靜脈血，離心后取上清液，置于-80 ℃冰箱凍存，用于檢測25-(OH)D、CEA及CA199；收集結直腸癌患者病理標本置于標本固定液中，通過免疫組織化學法檢測癌組織中VEGF、EGFR的表達情況。

1.2.2 血清25-(OH)D水平測定：采用酶聯(lián)免疫吸附法定量檢測血清25-(OH)D水平。

1.2.3 血清CEA、CA199檢測：采用全自動電化學發(fā)光分析儀及配套試劑盒檢測血清CEA、CA199濃度。

1.2.4 VEGF、EGFR的測定：采用免疫組織化學法對VEGF、EGFR在癌組織中的表達進行測定。

2 結果

2.1 結直腸癌患者臨床資料：本研究共納入234例結直腸癌患者，其中男性患者146例(62.39%)，女性患者88例(37.61%)，與中國結直腸癌患者性別男女之比=1∶0.6基本一致[6]，年齡>60歲患者136例(58.12%)，2組年齡段、性別構成差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；左半結腸癌與直腸癌患者病例數(shù)達204例(87.18%)；腫瘤類型以潰瘍型為主，有215例(91.88%)；腫瘤浸潤深度突破肌層病例數(shù)較多，有183例(78.21%)；大多數(shù)腫瘤直徑≤5 cm，有179例(76.49%)；T4期和N0期患者數(shù)最多，分別為107例(45.73%)，130例(55.56%)；臨床分期中Ⅲ期患者最多，有96例(41.02%)；病理以中分化程度占最多，有193例(82.48%)，見表1。

表1 結直腸癌患者臨床資料基本特征

續(xù)表

2.2 結直腸癌患者血清25-(OH)D水平與結直腸癌患者基本特征及腫瘤病理特征之間的關系：本研究中測得血清25-(OH)D水平最低為3 ng/mL，最高為27.86 ng/mL，平均值為(11.69±5.03)ng/mL。不同性別、腫瘤位置、分化程度、臨床分期、浸潤深度及淋巴結有無轉移的結直腸癌患者的血清25-(OH)D水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2與表3。腫瘤分化程度、TNM分期及臨床分期組間比較見圖1至圖3(封二)。

圖1 不同分化程度組間之間的差異

圖2 T分期中各組間之間的差異

圖3 臨床分期中各組之間的差異

表2 血清25-(OH)D水平與患者一般資料情況分析

表3 血清25-(OH)D水平與患者臨床特征分析

2.3 結直腸癌患者血清25-(OH)D與腫瘤標志物之間的關系：以CEA≥4.7 ng/mL、CA199≥27 U/mL為異常作為標準，將234例患者分別分為CEA、CA199正常組與異常組，CEA異常組的血清25-(OH)-D水平顯著低于正常組(P<0.05)，CA199組差異無統(tǒng)計學意義，見表4。

表4 血清25-(OH)D水平與腫瘤標志物分析

2.4 結直腸癌患者血清25-(OH)D與病理組織中VEGF、EGFR相關蛋白表達情況：VEGF、EGFR陽性表達者血清25-(OH)D水平顯著低于陰性表達者(P<0.05)，見表5，且VEGF、EGFR陽性表達組患者臨床分期更傾向于中晚期(P<0.05)，見表5至表6。

表5 血清25-(OH)D與VEGF、EGFR表達情況分析

表6 VEGF、EGFR與患者臨床分期分析[n(%)]

3 討論

維生素D狀態(tài)與結直腸癌發(fā)病風險及預后密切相關[7]。本研究中結直腸癌患者的血清25-(OH)D水平(11.69 ng/mL)較正常健康人群(18.80 ng/mL)低[8]，提示低水平血清25-(OH)D人群患結直腸癌的風險較高。女性患者血清25-(OH)D水平顯著低于男性，研究發(fā)現(xiàn)雌二醇水平與維生素D水平呈負相關關系，睪酮與維生素D水平呈正相關關系，因此性激素水平可能是造成男女之間維生素D水平差異的原因之一[9]。雷凱[10]等研究發(fā)現(xiàn)結腸癌患者的血清25-(OH)D水平低于直腸癌患者，本研究進一步發(fā)現(xiàn)右半結腸癌患者的血清25-(OH)D水平顯著低于左半結腸及直腸癌患者，25-(OH)D是骨化三醇的前體，維生素D分解代謝酶CYP24A1被認為是一種癌基因，其通過進一步羥化骨化三醇減弱其抗腫瘤作用，同時CYP24A1在近端結腸癌中的表達量顯著高于遠端結腸癌及直腸癌[11]，其導致血清25-(OH)D在近端結腸癌中的去路增加，因此考慮2組25-(OH)D水平不同可能與此有關。本研究中，血清25-(OH)D水平與病理類型無明顯關聯(lián)，可能與診斷疾患的時間節(jié)點和非潰瘍型病例數(shù)太少有關。低分化腫瘤患者、中晚期患者以及T4期患者的血清25-(OH)D水平較其他組更低，提示其與結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展呈負相關關系，血清25-(OH)D水平越低，結直腸癌患者預后越差。

腫瘤標志物單獨診斷結直腸癌的靈敏度和特異性較差，依靠腫瘤標志物診斷結直腸癌往往不準確，故腫瘤標志物聯(lián)合25-(OH)D檢測對于結直腸癌診斷具有重要意義[12]。本研究中CEA異常組的血清25-(OH)D水平顯著低于正常組，而CA199組無明顯統(tǒng)計學差異。血清CEA在健康人群中含量極低，而CA199廣泛存在于具有分泌作用的正常腺上皮細胞中，并且易受到非癌癥疾病如痛風、肝硬化等相關疾病的影響[13]，故其診斷特異性可能存在一定誤差。二者分別與血清25-(OH)D水平進行Pearson檢驗，相關性較差，可能需擴大樣本量進一步研究。

VEGF具有促進結直腸癌細胞血管內(nèi)皮細胞遷移、增殖和血管形成等作用，EGFR在腫瘤的增殖、分化和轉移中發(fā)揮重要作用。相關研究發(fā)現(xiàn)，維生素D能夠上調(diào)人結腸癌細胞中有效的抗血管生成因子血小板反應蛋白1(THBS1)的mRNA水平，進而降低VEGF的表達，抑制腫瘤細胞增殖所必需的血管生成[14]；腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)能夠通過激活EGFR信號通路促進結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展，而維生素D能夠抑制RAS系統(tǒng)[15]，進而抑制EGFR的表達，因此，本研究中血清25-(OH)D水平較高的患者中VEGF、EGFR陰性表達的相關機制可能與上述原因有關，仍需進一步研究。其次VEGF、EGFR的陽性表達組中晚期結直腸癌較陰性組高，說明腫瘤組織中VEGF、EGFR表達陽性往往提示分期較晚，也進一步說明血清中低25-(OH)D水平與結直腸癌的進展及預后存在一定關聯(lián)，但免疫組織化學檢測為半定量研究，存在一定的誤差，需開展體外實驗進一步研究。