山西省姑射山野生毛木耳菌株菌絲生長(zhǎng)條件優(yōu)化

徐全飛 牛 宇 聶建軍 蒙秋霞 馮婉君 李彩萍 潘保華

（1 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)管理學(xué)院，山西太原 030006；2山西農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，山西太原 030031）

毛木耳Auricularia polytricha，屬木耳科Auriculariaceac，木耳屬Auricularia[1-2]，俗稱(chēng)構(gòu)耳、黃背木耳、白背木耳。毛木耳質(zhì)地脆滑，清新爽口，具有很高的食用及藥用價(jià)值[3-5]，也是我國(guó)栽培的主要食用菌品種之一[6-8]。

野生毛木耳在夏、秋季生長(zhǎng)在櫟、柳、槐等多種闊葉樹(shù)倒木或樹(shù)樁上，單生、群生或叢生[2，9-10]。筆者于2020 年6 月中旬在山西省汾西縣姑射山櫟樹(shù)的倒木上采集到一株野生毛木耳菌株，該菌株子實(shí)體較大，初期呈碗狀，后耳片伸展為耳狀，腹面紅褐色，背面灰白色，絨毛較長(zhǎng)且密集，干后棕褐色至黑色，強(qiáng)烈收縮呈硬而脆的角質(zhì)至近革質(zhì)（圖1）。筆者通過(guò)考察該菌株菌絲生長(zhǎng)速度、菌絲長(zhǎng)勢(shì)，篩選母種培養(yǎng)基最佳碳源、氮源、pH 及菌絲最適宜生長(zhǎng)溫度，旨在為該菌株馴化栽培提供數(shù)據(jù)支撐。

圖1 野生毛木耳子實(shí)體

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）供試菌株

供試毛木耳菌株采自山西省汾西縣姑射山，采用耳（菇）木分離法[2，11-12]，取生長(zhǎng)健壯，無(wú)病蟲(chóng)害、腐朽程度較輕的子實(shí)體，鋸成1～3 cm 厚的木塊，在超凈工作臺(tái)上，將耳木在酒精燈外焰灼燒幾次，殺滅耳木表面部分雜菌，再用手術(shù)刀將木塊劃開(kāi)，取中間長(zhǎng)有菌絲長(zhǎng)0.3～0.5 cm 的木芯，移接至PDA 試管培養(yǎng)基上，接種后將試管放入25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，暗光培養(yǎng)5～7 d 后，挑取色澤潔白、長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)的菌絲轉(zhuǎn)接到PDA 培養(yǎng)基上純化培養(yǎng)[13-15]，將純化菌種作為供試菌株。

（2）供試培養(yǎng)基

耳木分離培養(yǎng)基采用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，瓊脂粉2%，pH自然。

菌種活化培養(yǎng)基采用馬鈴薯綜合培養(yǎng)基（CPDA）：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.15%，瓊脂2%。

碳源試驗(yàn)培養(yǎng)基：供試碳源分別為葡萄糖、可溶性淀粉、麥芽糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、空白（對(duì)照），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為2%，培養(yǎng)基其他成分均為蛋白胨0.5%，KH2PO40.3%，MgSO4·7 H2O 0.15%，瓊脂2%。

氮源試驗(yàn)培養(yǎng)基：供試氮源分別為蛋白胨、麩皮、硝酸銨、酵母粉、尿素、空白（對(duì)照），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為0.5%，培養(yǎng)基其他成分均為葡萄糖2%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.15%，瓊脂2%。

最佳pH 篩選試驗(yàn)培養(yǎng)基：以PDA 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用1.0 mol/L NaOH 溶液或1.0 mol/L HCl 溶液調(diào)整培養(yǎng)基pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種活化

將試驗(yàn)毛木耳菌株試管種從菌種保藏箱中取出，25 ℃恒溫放置24 h，將活化后的菌種接于CPDA平皿培養(yǎng)基上，25 ℃恒溫暗光培養(yǎng)至平皿表面接近長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲[6，16]備用。

1.2.2 最佳碳源、氮源及pH篩選試驗(yàn)

無(wú)菌操作，用直徑為5 mm 已滅菌打孔器，從菌種培養(yǎng)皿中截取菌絲長(zhǎng)勢(shì)一致活化的毛木耳菌種，分別接種于不同碳源、氮源及pH 供試培養(yǎng)基平皿中心。置25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)暗光培養(yǎng)，3 d 后菌絲已經(jīng)萌發(fā)生長(zhǎng)，采用十字劃線(xiàn)法測(cè)量菌落直徑[17]，記錄菌絲形態(tài)和長(zhǎng)勢(shì)，連續(xù)觀察記錄，測(cè)定8 d。每個(gè)處理重復(fù)3次，取平均值。

菌絲日均生長(zhǎng)速度（mm/d）=[（菌落直徑-5）/2]/培養(yǎng)天數(shù)

1.2.3 最適生長(zhǎng)溫度試驗(yàn)

將活化毛木耳菌種接于PDA 培養(yǎng)基內(nèi)，分別置5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃暗光培養(yǎng)。菌絲觀察測(cè)定方法同1.2.2，每個(gè)處理重復(fù)3次，取平均值。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析采用WPS 和SPSS，采用Duncan 新復(fù)極差法多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基最適碳源篩選結(jié)果

以碳源空白為對(duì)照，供試碳源對(duì)野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表1。由表1可知，野生毛木耳菌株在供試碳源培養(yǎng)基上，菌絲形態(tài)、色澤、生長(zhǎng)勢(shì)、菌落邊緣形態(tài)及生長(zhǎng)速度都有所不同，以葡萄糖為碳源時(shí)野生毛木耳菌絲潔白、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，菌落邊緣整齊，平均生長(zhǎng)速度最快，為5.53 mm/d，與其他供試碳源差異極顯著；以乳糖或甘露醇為碳源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度較快，同時(shí)乳糖為碳源時(shí)菌絲生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，有氣生菌絲；以可溶性淀粉、麥芽糖、蔗糖為碳源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度一般，以可溶性淀粉為碳源時(shí)，菌絲致密、潔白、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)。綜合比較，葡萄糖為野生毛木耳母種培養(yǎng)基的最佳碳源。

表1 供試碳源培養(yǎng)基中野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)比較

2.2 培養(yǎng)基最適氮源篩選結(jié)果

以氮源空白為對(duì)照，供試氮源對(duì)野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表2。由表2可知，野生毛木耳菌株在供試氮源培養(yǎng)基上，菌絲形態(tài)、色澤、生長(zhǎng)勢(shì)、菌落邊緣形態(tài)及生長(zhǎng)速度都有所不同。以蛋白胨、酵母粉為氮源時(shí)，菌絲潔白、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，菌落邊緣整齊，平均生長(zhǎng)速度最快，分別為4.97 mm/d、5.03 mm/d，且兩者差異不顯著，但與其他氮源差異極顯著；以硝酸銨、尿素為氮源或氮源空白時(shí)，菌絲灰白、稀疏、生長(zhǎng)勢(shì)弱，其中以尿素為氮源時(shí)，只有少量菌絲萌發(fā)。綜合比較，蛋白胨或酵母粉為野生毛木耳母種培養(yǎng)基的最佳氮源。

表2 供試氮源培養(yǎng)基中野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)比較

圖2 6種碳源、碳源空白（對(duì)照）培養(yǎng)基上野生毛木耳菌株菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)

圖3 5種氮源、氮源空白（對(duì)照）培養(yǎng)基上野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)

2.3 培養(yǎng)基最適pH篩選結(jié)果

由圖4 可知，培養(yǎng)基pH 為4、6、8 時(shí)，野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)速度較快，pH≤3 或pH≥9 不適宜該菌株生長(zhǎng)，pH 為5、6、7 時(shí)，該菌株菌絲生長(zhǎng)速度最快，且三者間差異不顯著，但與其他pH 差異顯著，因此培養(yǎng)基pH 5～7最適宜該菌株生長(zhǎng)。

圖4 試驗(yàn)（培養(yǎng)基）pH野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)速度比較

2.4 最適培養(yǎng)溫度篩選結(jié)果

由圖5可知，培養(yǎng)溫度對(duì)野生毛木耳菌株的菌絲生長(zhǎng)速度影響較大，當(dāng)培養(yǎng)溫度為5 ℃時(shí)，菌絲幾乎不生長(zhǎng)；溫度15 ℃以下，菌絲生長(zhǎng)緩慢；溫度25 ℃，菌絲潔白、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，生長(zhǎng)速度較快；溫度30 ℃菌絲生長(zhǎng)速度最快，但菌絲較稀疏；溫度35 ℃，菌絲生長(zhǎng)速度變慢，且菌絲生長(zhǎng)勢(shì)弱，稀疏。綜合比較，該野生毛木耳菌株菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度為25～30 ℃。

圖5 試驗(yàn)培養(yǎng)溫度下野生毛木耳菌絲生長(zhǎng)速度比較

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)野生毛木耳菌株在供試碳源培養(yǎng)基中均能較快生長(zhǎng)，綜合評(píng)價(jià)最佳碳源是葡萄糖，與王慶武等[18]研究結(jié)果不同，這可能與所用毛木耳菌株有關(guān)。培養(yǎng)基氮源試驗(yàn)表明，最佳氮源為蛋白胨或酵母粉，尿素明顯地抑制該菌株菌絲生長(zhǎng)勢(shì)和生長(zhǎng)速度，原因可能是尿素在高溫滅菌的過(guò)程中，產(chǎn)生了氨氣，影響了菌絲的生長(zhǎng)。

供試毛木耳菌株的最適生長(zhǎng)溫度為25～30 ℃，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，生長(zhǎng)速度快，屬于偏高溫型菌株；供試毛木耳菌株生長(zhǎng)的培養(yǎng)基最適宜pH為5～7，pH為4～8時(shí)，菌絲都能夠較快的生長(zhǎng)，pH為9時(shí)，該菌株的菌絲也能生長(zhǎng)，說(shuō)明該菌株耐酸和耐堿的能力較強(qiáng)。

綜合得出，適宜該野生毛木耳菌株菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為蛋白胨或酵母粉，培養(yǎng)基最適宜pH 為5～7，最適宜培養(yǎng)溫度為25～30 ℃。