初診彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤患者血清CEA、IL-17、PIC水平變化及意義

劉曉英，羅文豐，劉洋，曾孟蘭，翟紅，謝坤瑩，魏錦

川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液科，四川 南充 637001

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）是最常見的非霍奇金淋巴瘤，全球每年新發(fā)病例15 萬例，占成年人非霍奇金淋巴瘤的30%～40%［1］。雖然免疫化療能夠明顯改善患者預(yù)后，但臨床發(fā)現(xiàn)約10% DLBCL 患者初治耐藥，約30%患者發(fā)生復(fù)發(fā)耐藥［2］。癌胚抗原（CEA）是臨床常用的胃腸道惡性腫瘤標(biāo)志物。近年研究發(fā)現(xiàn)，血清CEA水平有助于輔助診斷DLBCL，是DLBCL 新的血清標(biāo)志物［3］。IL-17 是由活化的Th17細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，參與宿主防御、細(xì)胞運(yùn)輸、免疫調(diào)節(jié)和組織修復(fù)等過程。研究發(fā)現(xiàn)，髓源性間質(zhì)干細(xì)胞能夠分泌IL-17，激活Jacus激酶，促進(jìn)DLBCL細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及耐藥性形成［4］。纖溶酶-α2纖溶酶抑制劑復(fù)合物（PIC）作為α2纖溶酶抑制劑結(jié)合纖溶酶的產(chǎn)物，可滅活纖溶酶。研究表明，PIC 作為纖溶系統(tǒng)激活的早期標(biāo)志物，其表達(dá)升高可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲及遷移，有助于評估惡性腫瘤患者的預(yù)后［5］。本研究觀察初診DLBCL 患者血清CEA、IL-17、PIC水平變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020 年1 月—2022 年1 月本院收治的DLBCL 患者103 例（DLBCL 組），均經(jīng)病理學(xué)檢查明確診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：初治患者、臨床資料完整；接受規(guī)范化R-CHOP（利妥昔單抗+環(huán)磷酰胺，多柔比星、長春新堿和潑尼松）方案化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并自身免疫性疾病、感染性疾病等；合并其他器官惡性腫瘤；合并凝血功能障礙等血液系統(tǒng)疾病。DLBCL 組男59 例，女44 例；年齡31～78 歲（57.46 ± 4.79）歲；結(jié)外侵犯部位≥2個34例、＜2個69例；臨床分期I、Ⅱ期45例，Ⅲ、Ⅳ期58例；國際預(yù)后指數(shù)評分（IPI）0～2 分60 例，3～5 分43 例。同期選擇32 名健康體檢者作為對照組，男20例，女12例；年齡29～79（58.14 ± 5.13）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18歲；入組前半年未接受激素及免疫抑制劑治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠、哺乳期婦女；合并免疫、血液系統(tǒng)、惡性腫瘤等嚴(yán)重疾病。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。本研究經(jīng)川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（2020-014），兩組均簽署知情同意書。

1.2 治療方法 DLBCL組采用R-CHOP方案化療。第1天予利妥昔單抗（美羅華，上海羅氏制藥有限公司，批號SH0051）375 mg/m2靜脈滴注；第2 天予環(huán)磷酰胺（山西泰盛制藥有限公司，批號0901311）750 mg/m2靜脈滴注＋多柔比星（廣東嶺南制藥有限公司，批號H20063155）50 mg/m2靜脈滴注+長春新堿（遼寧衛(wèi)星制藥廠，批號H20068151）1.4 mg/m2靜脈滴注+潑尼松（華中藥業(yè)股份有限公司，批號H42021394）100 mg口服；第3～6天繼續(xù)予潑尼松100 mg口服。間隔2周進(jìn)行下個療程，共化療6～8個療程。

1.3 療效評價 化療結(jié)束后經(jīng)全身影像學(xué)檢查對療效進(jìn)行評估［6］，完全緩解：病灶完全消失，且維持時間≥4 周；部分緩解：病灶縮?。?0%，且維持時間≥4周；疾病穩(wěn)定：病灶縮小＜50%或增大＜25%，且維持時間≥4 周；疾病進(jìn)展：病灶增大＞25%或出現(xiàn)新病灶。將103例患者分為化療有效（完全緩解+部分緩解）組44例，化療無效（疾病穩(wěn)定+疾病進(jìn)展）組59例。

1.4 血清CEA、IL-17、PIC 檢測 分別于對照組健康體檢時、DLBCL 組化療前抽取空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心10 min，離心半徑8 cm，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清IL-17，試劑盒購自上海紀(jì)寧生物科技公司，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行；采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血清CEA、PIC，用HISCL5000 全自動免疫分析儀及配套試劑（日本Sysmex公司）進(jìn)行檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征（ROC）曲線，用曲線下面積比較血清CEA、IL-17、PIC 水平及聯(lián)合檢測對療效的預(yù)測價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DLBCL 組與對照組血清CEA、IL-17、PIC 水平比較 與對照組比較，DLBCL 組血清CEA、PIC 水平高，血清IL-17水平低（P均＜0.05）。見表1。

表1 DLBCL組與對照組血清CEA、IL-17、PIC水平比較（±s）

表1 DLBCL組與對照組血清CEA、IL-17、PIC水平比較（±s）

組別對照組DLBCL組P n 32 103 CEA（ng/mL）3.32 ± 0.41 25.15 ± 1.27＜0.05 IL-17（pg/mL）10.22 ± 1.63 6.40 ± 1.22＜0.05 PIC（μg/mL）0.51 ± 0.17 0.82 ± 0.23＜0.05

2.2 DLBCL患者臨床病理特征與血清CEA、IL-17、PIC水平的關(guān)系 DLBCL患者血清CEA、IL-17、PIC水平與結(jié)外受累的器官、淋巴結(jié)數(shù)目、國際預(yù)后指數(shù)評分、臨床分期有關(guān)（P均＜0.05），與性別、年齡無關(guān)（P均＞0.05），見表2。

表2 DLBCL患者臨床病理特征與血清CEA、IL-17、PIC水平的關(guān)系

2.3 DLBCL 患者療效與血清CEA、IL-17、PIC 水平的關(guān)系 與化療有效組比較，化療無效組血清CEA、PIC水平高，IL-17水平低（P均＜0.05）。見表3。

表3 化療有效組與化療無效組血清CEA、IL-17、PIC水平比較（±s）

表3 化療有效組與化療無效組血清CEA、IL-17、PIC水平比較（±s）

組別化療有效組化療無效組P n 44 59 CEA（ng/mL）22.17 ± 1.54 27.37 ± 1.20＜0.05 IL-17（pg/mL）6.95 ± 1.32 5.99 ± 1.22＜0.05 PIC（μg/mL）0.58 ± 0.30 1.00 ± 0.21＜0.05

2.4 血清CEA、IL-17、PIC 對療效的預(yù)測價值 血清CEA、IL-17、PIC 及三者聯(lián)合預(yù)測療效的曲線下面積分別為0.676、0.757、0.684、0.830。三者聯(lián)合預(yù)測的曲線下面積高于三者單獨(dú)預(yù)測（P均＜0.05）。 見表4。

表4 血清CEA、IL-17、PIC對DLBCL患者療效的預(yù)測價值

3 討論

CEA 作為一種腫瘤相關(guān)抗原，是臨床常用的血清腫瘤標(biāo)志物。本研究中，DLBCL 患者血清CEA 水平升高，且與結(jié)外受累的器官、淋巴結(jié)數(shù)目、IPI 評分、臨床分期有關(guān)，提示CEA 促進(jìn)DLBCL 的發(fā)生發(fā)展。化療無效組血清CEA 水平明顯較高，提示監(jiān)測血清CEA 水平有助于DLBCL 患者化療療效評價。研究表明，CEA 作為免疫球蛋白超家族成員，其表達(dá)水平升高參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附，不僅促進(jìn)腫瘤的增殖及轉(zhuǎn)移，還增加其對化療藥物的耐藥性［7-8］。

IL-17主要由Th17細(xì)胞分泌，參與自身免疫性疾病、感染及惡性腫瘤等過程［9］。本研究中DLBCL患者血清IL-17 降低。DLBCL 中IL-17 表達(dá)下調(diào)與微小RNA 的表達(dá)調(diào)控有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL 中miR-130b 表達(dá)上調(diào)通過抑制轉(zhuǎn)錄活化蛋白1 的磷酸化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞OX40 配體的表達(dá)，OX40 配體與Th17細(xì)胞表面的OX40 結(jié)合并抑制Th17功能，導(dǎo)致IL-17表達(dá)降低［10］。本研究中，DLBCL患者血清IL-17 水平與結(jié)外受累的器官、淋巴結(jié)數(shù)目、IPI評分、臨床分期有關(guān)，表明IL-17 參與DLBCL 的發(fā)生發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL 小鼠接種Th17 細(xì)胞后，隨著腫瘤的進(jìn)展，Th17 細(xì)胞分泌的IL-17 水平逐漸降低，血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)逐漸升高，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤血管新生及腫瘤細(xì)胞的惡性增殖［11］。因此，IL-17可能作為一種腫瘤抑制性細(xì)胞因子，在DLBCL 腫瘤免疫中發(fā)揮保護(hù)性作用。本研究中，化療無效組血清IL-17 水平低，提示IL-17 可反映化療療效。研究表明，干擾素γ 能夠促進(jìn)Th17 細(xì)胞中干擾素調(diào)節(jié)因子8（IRF8）的表達(dá)，IRF8 直接抑制IL-17 的表達(dá)［12］，導(dǎo)致p53 蛋白功能障礙，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)對利妥昔單抗耐藥性的形成［13］。

α2 纖溶酶抑制劑是體內(nèi)主要的纖溶酶抑制物，占纖溶酶抑制作用的90%，其與纖溶酶以1∶1 比例結(jié)合形成PIC。PIC 主要在內(nèi)皮系統(tǒng)清除，是評價體內(nèi)纖溶狀況的重要指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL 等惡性腫瘤患者存在凝血和纖溶系統(tǒng)平衡失調(diào)，表現(xiàn)為高凝和纖溶亢進(jìn)狀態(tài)，PIC 是潛在的預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)志［14］。本研究中，DLBCL 患者血清PIC 水平升高與結(jié)外受累的器官、淋巴結(jié)數(shù)目、IPI評分、臨床分期有關(guān)，提示PIC促進(jìn)DLBCL的發(fā)生發(fā)展。分析其原因，腫瘤細(xì)胞通過分泌大量血管內(nèi)皮生長因子，增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，內(nèi)皮系統(tǒng)對PIC 的清除能力降低，導(dǎo)致血清PIC水平升高［15］。此外，DLBCL 患者機(jī)體凝血系統(tǒng)激活也可激活纖溶系統(tǒng)，引起血清PIC 水平升高，纖溶系統(tǒng)激活后能夠通過降解腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤、遷移，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展［16］。本研究中，化療無效組血清PIC水平明顯高于化療有效組，表明血清PIC水平有助于反映DLBCL化療療效。其原因可能與PIC能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞干性及耐藥性有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，PIC水平升高作為纖維溶解系統(tǒng)激活的標(biāo)志，能夠促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中髓源性抑制細(xì)胞及腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的招募、聚集及活化，通過分泌大量IL-4、轉(zhuǎn)化生長因子-β 等細(xì)胞因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及干性形成，導(dǎo)致腫瘤耐藥［17-18］。因此，血清CEA、IL-17、PIC可能是反映DLBCL患者化療療效的血清標(biāo)志物。ROC 曲線分析結(jié)果亦證實(shí)，血清CEA、IL-17、PIC聯(lián)合檢測對DLBCL的化療療效具有較高的預(yù)測價值。

綜上所述，DLBCL 患者血清CEA、PIC 水平升高，IL-17水平降低，三者水平與結(jié)外受累的器官、淋巴結(jié)數(shù)目、IPI 評分、臨床分期有關(guān)，聯(lián)合檢測血清CEA、PIC、IL-17有助于DLBCL患者的預(yù)后預(yù)測。但本研究樣本量有限，并且不同檢測方法的臨界值尚不一致，有待今后擴(kuò)大樣本量，制定標(biāo)準(zhǔn)的臨界值，進(jìn)一步深入研究。