自殺未遂患者外周血NR3C1基因單核苷酸多態(tài)性與壓力性生活事件的交互作用

周艷華，陸奕彬，瞿銘，黃繽慧，張琳娜，褚成靜

1 廣東醫(yī)科大學(xué)人文管理學(xué)院應(yīng)用心理學(xué)系，廣東 東莞 523808；2 東莞市第七人民醫(yī)院精神科；3 伊犁哈薩克自治州奎屯醫(yī)院精神衛(wèi)生科；4 廣東理工職業(yè)學(xué)院文法系；5 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院精神科

自殺行為已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。在15～33歲個(gè)體中，自殺死亡成為死亡原因的第一位［1］。自殺行為有一定的遺傳基礎(chǔ)。糖皮質(zhì)激素受體（NR3C1）基因作為抑郁癥和自殺行為相關(guān)的候選基因引起學(xué)者廣泛關(guān)注。NR3C1基因位于5q23染色體上，編碼的糖皮質(zhì)激素受體（GR）是維持下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸應(yīng)激系統(tǒng)功能穩(wěn)定的關(guān)鍵因素，HPA軸功能紊亂是抑郁癥和自殺行為的重要生化改變之一［2-3］。遺傳和環(huán)境因素之間存在復(fù)雜的交互作用，環(huán)境因素會(huì)增加抑郁癥和自殺行為發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)［4-5］?；蚝铜h(huán)境因素交互作用是目前研究自殺機(jī)制的重點(diǎn)［6］，關(guān)于環(huán)境因素與NR3C1基因的交互作用研究國(guó)內(nèi)少有報(bào)道。本研究擬通過(guò)探討NR3C1潛在的功能性單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)與自殺行為的關(guān)系，以及采用多因子降維法對(duì)NR3C1基因SNP和壓力性生活事件進(jìn)行交互作用分析，探索自殺行為的精神病理學(xué)機(jī)制，為自殺行為的發(fā)病機(jī)制研究且及時(shí)干預(yù)自殺行為提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017 年3 月—2018 年8 月64例就診患者作為病例組，均因自殺未遂來(lái)廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心理科、東莞市精神衛(wèi)生中心及奎屯市伊犁州奎屯醫(yī)院就診。納入標(biāo)準(zhǔn)：至少有1 次自殺未遂行為，排除自殺意念；年齡14～50 歲；文化水平要求小學(xué)以上，能正常書(shū)面表達(dá)和溝通交流；自愿加入研究者。排除標(biāo)準(zhǔn)：有重大軀體疾病和腦器質(zhì)性疾病患者；嚴(yán)重精神疾病如躁狂癥患者；有藥物濫用史者；孕期、哺乳期女性。以同期身體心理健康者49 例作為對(duì)照組，無(wú)家族自殺史、物質(zhì)依賴及重大軀體、精神疾病。兩組均知情同意；本研究獲得廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（PJ2012134）。

1.2 一般資料收集 收集兩組的以下資料：性別、年齡、家庭關(guān)系、文化程度、婚姻狀況等。

1.3 生活壓力評(píng)估［7］采用生活事件量表（LES）評(píng)估實(shí)驗(yàn)對(duì)象1 年內(nèi)環(huán)境的生活事件刺激，包括家庭生活、工作學(xué)習(xí)、社交等。實(shí)驗(yàn)對(duì)象根據(jù)自身實(shí)際感受判斷事件的影響程度，影響持續(xù)時(shí)間（3個(gè)月、6個(gè)月、1 年、1 年以上，分別計(jì)1、2、3、4 分），壓力性生活事件總和=正性生活事件刺激量+負(fù)性生活事件刺激量。分值越高，說(shuō)明個(gè)體所遭受生活環(huán)境壓力越大，以樣本中75%百分位（27 分）用作中度和重度水平分組的臨界值，納入后續(xù)研究。

1.4 NR3C1基因SNP分析 位點(diǎn)的選擇：根據(jù)公共數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www. ncbi. nlm. gov/sites/enrrez）和HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.hapmap.org），對(duì)中國(guó)北京漢族人進(jìn)行標(biāo)簽SNP的選擇；參數(shù)設(shè)置：最小等位基因頻率＞0.05，決定系數(shù)（r2）＞0.8，對(duì)NR3C1基因進(jìn)行標(biāo)簽SNP 篩選，得出潛在功能性SNP 位點(diǎn)。并且結(jié)合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)得出5個(gè)潛在的功能性SNP位點(diǎn)，即rs10052957、rs9324924、rs41423247、rs6191、rs6196。基因分型：取外周靜脈血1 mL，置于-80 ℃冷藏備用，用TIANamp Blood DNA Kit 試劑盒（天根生化科技有限公司）提取DNA。用Snapshot 技術(shù)對(duì)SNP 進(jìn)行基因型分型，基于熒光標(biāo)記單堿基延伸鏈終止反應(yīng)原理對(duì)基因進(jìn)行分型。PCR 引物用設(shè)計(jì)軟件Primer 3 online version 0.4.0設(shè)計(jì)，由中國(guó)北京東勝創(chuàng)新生物科技有限公司合成。PCR 反應(yīng)體系：模板DNA 1～2 μL、10倍緩沖液0.5 μL，Taq酶1.25 U，上下游引物各1 μL。擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性2 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火90 s，65 ℃延伸30 s，65 ℃延伸10 min，共循環(huán)40次。4 ℃保存。用美國(guó)ABI公司3730XL基因測(cè)序儀，用熒光標(biāo)記單堿基延伸鏈終止法進(jìn)行PCR 產(chǎn)物測(cè)序。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；非正態(tài)分布計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，兩組比較采用Mann Whitney 檢驗(yàn)?；蛭稽c(diǎn)SNP 的Hardy-Weinberg 平衡吻合度用在線統(tǒng)計(jì)軟件SNP Stats（https：//www.SNPtats.net/）進(jìn)行檢驗(yàn)；基因-環(huán)境之間的交互作用用GMDR0.7軟件進(jìn)行分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組性別、年齡、婚姻狀況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），家庭關(guān)系、文化程度、壓力性生活事件評(píng)分比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 病例組與對(duì)照組人口學(xué)資料和生活事件得分比較

2.2 兩組NR3C1基因型與等位基因分布比較 兩組NR3C1 基 因5 個(gè)SNP 位 點(diǎn)rs9324924、rs10052957、rs41423247、rs6191、rs6196 的基因型均符合Hardy-Weinberg 平衡定律（P均＞0.05）。兩組NR3C1 基因SNP位點(diǎn)rs10052957、rs41423247、rs6191、rs6196的基因型頻率、等位基因型頻率分布比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；兩組rs9324924的基因型頻率、等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），Bonferroni法校正后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見(jiàn)表2、3。

表2 兩組基因型頻率分布比較［例（%）］

2.3 兩組SNP 位點(diǎn)基因型與自殺未遂行為的關(guān)聯(lián) 使用SNP stats在線軟件對(duì)NR3C1基因的5個(gè)SNP等位基因在不同遺傳模型［共顯性模型（MM vs mm vs Mm）、顯性模型（MM vs Mm+Nm）、隱性模型（mm vs Mm+Mm）、超顯性模型（MM+mm vs Mm）以及累加模型（MM vs Mm+mm vs mm），M為主要等位基因，m為次要等位基因］下與自殺未遂行為的關(guān)系。rs9324924位點(diǎn)SNP與自殺未遂存在關(guān)聯(lián)，在隱性模型下，rs9324924位點(diǎn)的T/T基因型可以降低自殺行為易感性（OR=0.19，95%CI：0.04～0.87，P＜0.05），見(jiàn)表4。

表3 兩組等位基因頻率分布比較［例（%）］

表4 兩組校正了文化程度與家庭情況后SNP位點(diǎn)基因型與自殺未遂行為的關(guān)聯(lián)［例（%）］

2.4 NR3C1基因SNP與壓力性生活事件的交互作用分析 GMDR 分析結(jié)果顯示二階模型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。NR3C1 基因rs9324924 位點(diǎn)與壓力性生活事件的二階模型是預(yù)測(cè)自殺風(fēng)險(xiǎn)的最佳模型（P＜0.05），交叉驗(yàn)證一致性為10/10，檢驗(yàn)樣本準(zhǔn)確率最高0.646 0，見(jiàn)表5。在高生活壓力下，攜帶GG 和GT基因型的個(gè)體發(fā)生自殺行為的風(fēng)險(xiǎn)高于TT基因型攜帶者，提示NR3C1基因rs9324924位點(diǎn)的G基因型與高生活壓力的交互作用會(huì)增加自殺風(fēng)險(xiǎn)，見(jiàn)圖1。

圖1 NR3C1基因rs9324924位點(diǎn)與生活事件最佳模型單元格

表5 基因環(huán)境交互模型

3 討論

NR3C1 基因SNP 與情緒障礙、自殺行為等精神疾病相關(guān)［8］，研究認(rèn)為GR 表達(dá)異常是抑郁癥以及自殺行為的病理基礎(chǔ)［9］。NR3C1基因有助于個(gè)體在面對(duì)急性壓力時(shí)，提高GR 對(duì)皮質(zhì)醇的敏感性，維持HPA 軸的負(fù)反饋功能穩(wěn)定。因此，NR3C1 基因表達(dá)上調(diào)對(duì)個(gè)體急性應(yīng)激條件下維持HPA 軸功能至關(guān)重要。

本研究在簡(jiǎn)單基因關(guān)聯(lián)分析中發(fā)現(xiàn)，rs9324924位點(diǎn)SNP 與自殺行為相關(guān)，這與相關(guān)研究［10］結(jié)果一致。值得注意的是，經(jīng)過(guò)Bonferroni法校正后這種關(guān)聯(lián)均不顯著。隨后從多種基因模式角度下進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)NR3C1 基因rs9324924 位點(diǎn)G 等位基因攜帶者與自殺行為有關(guān)。隱性模型下，NR3C1 基因的TT基因型顯示為自殺行為的保護(hù)因素，間接反映rs9324924 位點(diǎn)G 等位基因攜帶者增加了自殺風(fēng)險(xiǎn)。這與既往研究［11］發(fā)現(xiàn)rs9324924 的G 等位基因比T等位基因的個(gè)體更易發(fā)生糖皮質(zhì)激素抵抗一致。但尹紅蕾［12］研究發(fā)現(xiàn)，rs9324924位點(diǎn)SNP 與抑郁癥無(wú)關(guān)；也有研究認(rèn)為rs9324924位點(diǎn)SNP與自殺行為相關(guān)。結(jié)果不一致可能與疾病發(fā)生的年齡、地區(qū)、環(huán)境等不同有關(guān)。

大多觀點(diǎn)認(rèn)為自殺未遂行為的發(fā)生是遺傳、環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。本研究將NR3C1 基因與自殺行為的主要危險(xiǎn)因素做了交互作用分析。GMDR 模型顯示，NR3C1 基因rs9324924 位點(diǎn)與壓力性生活事件的二階模型是預(yù)測(cè)自殺風(fēng)險(xiǎn)的最佳模型，NR3C1 基因rs9324924 的G 等位基因與高生活壓力相互作用，增加了自殺風(fēng)險(xiǎn)。由此提示rs9324924與壓力性生活事件之間的交互作用可能與自殺未遂風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。經(jīng)歷早期壓力性事件后，NR3C1 基因變異個(gè)體更易發(fā)生抑郁癥等情緒障礙相關(guān)精神疾?。?3］，與復(fù)雜疾病的基因-環(huán)境交互作用理論是一致的。

由于國(guó)內(nèi)外對(duì)于NR3C1 基因rs9324924 位點(diǎn)SNP 與自殺發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)研究報(bào)道較少，且結(jié)果不一致，本研究有關(guān)NR3C1 基因rs9324924 位點(diǎn)與環(huán)境因素交互分析結(jié)果雖然顯著，但受樣本量的限制，其與自殺未遂的關(guān)系未來(lái)還需進(jìn)一步研究加以證實(shí)。自殺未遂行為受環(huán)境、遺傳、心理等因素的多重影響，加強(qiáng)青少年心理健康教育，學(xué)會(huì)正確應(yīng)對(duì)環(huán)境中的壓力，倡導(dǎo)正確的生活觀，對(duì)自殺行為的預(yù)防和發(fā)現(xiàn)有重要意義。