M5和S2株布魯氏菌活疫苗對(duì)羔羊的免疫效果及對(duì)其生長(zhǎng)性能的影響

董 偉，張金學(xué)，王建軍，方玉鵬，許開云，王新興

（武威市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，甘肅武威 733000）

布魯氏菌?。╞rucellosis，以下簡(jiǎn)稱“布病”）是由布魯氏菌（Brucella）引起的在全世界范圍內(nèi)流行的一種人獸共患病[1]。羊種布魯氏菌能夠引起母羊流產(chǎn)、不孕、產(chǎn)奶量減少等，引發(fā)公畜睪丸炎，同時(shí)嚴(yán)重危害人類健康。近年來，布病疫情在全國(guó)多地呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)健康發(fā)展和公共衛(wèi)生安全[2]。2012年我國(guó)將布病列為優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病[3]，其中甘肅省被劃為布病流行一類區(qū)。

當(dāng)前我國(guó)控制動(dòng)物布病的技術(shù)措施主要有疫苗免疫、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、撲殺染疫動(dòng)物及無(wú)害化處理、消毒、凈化等，其中疫苗免疫是布病防控的重要措施之一。2021年甘肅省武威市出臺(tái)了《武威市“十四五”動(dòng)物布魯氏菌病防控方案》，明確了工作指標(biāo)，要求三縣一區(qū)應(yīng)免盡免，免疫密度達(dá)到90%。當(dāng)前我國(guó)常用的羊布病疫苗有2種，即豬種布魯氏菌S2株弱毒疫苗和羊種布魯氏菌M5或M5-90株弱毒疫苗，這兩種疫苗在20世紀(jì)60—90年代對(duì)我國(guó)布病防控起到了重要作用[4]。但是在實(shí)際生產(chǎn)中，這兩種疫苗在免疫程序、免疫保護(hù)力以及對(duì)羔羊早期生長(zhǎng)性能影響等方面尚未見相關(guān)研究報(bào)道。因此，為進(jìn)一步探究不同布病疫苗的免疫效果及對(duì)羔羊生長(zhǎng)性能的影響，本研究就M5和S2株疫苗對(duì)羔羊的免疫效果及對(duì)其生長(zhǎng)性能的影響進(jìn)行了試驗(yàn)研究，以期為制定科學(xué)合理的羔羊布病免疫方案提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)及動(dòng)物

本試驗(yàn)于2018年10月在甘肅省武威市涼州區(qū)某大型規(guī)模羊場(chǎng)（存欄3.1萬(wàn)只）開展，篩選生長(zhǎng)發(fā)育良好、無(wú)疾病、未接種過任何疫苗、同期生產(chǎn)、體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）的1月齡湖羊羔羊90只（均為雙羔，公母各半）。試驗(yàn)前對(duì)挑選羊只進(jìn)行布病虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）和試管凝集試驗(yàn)（SAT）檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性方可作為參試羊。

1.2 試驗(yàn)疫苗

M5-90株疫苗（簡(jiǎn)稱M5株疫苗，產(chǎn)品批號(hào)20170724），由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)；S2株活疫苗（產(chǎn)品批號(hào)1708016），由中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物藥廠生產(chǎn)。將試驗(yàn)疫苗保存于4 ℃冰箱，使用時(shí)恢復(fù)至室溫，以生理鹽水稀釋。使用S2株疫苗專用連續(xù)注射器（內(nèi)循環(huán)）口服、一次性注射器皮下注射。

1.3 檢測(cè)試劑

RBT抗原（批號(hào)170010601）、SAT抗原（批號(hào)170010801）、陽(yáng)性及陰性對(duì)照樣品，均購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司，各檢測(cè)試劑均在有效期內(nèi)使用。

2 方法

2.1 疫苗接種方法

90只參試羊按照公母各半隨機(jī)分為3組，每組30只，分別為M5免疫組、S2免疫組、對(duì)照組。參試羊記錄耳標(biāo)號(hào)，在同等生產(chǎn)條件下飼養(yǎng)管理，自由采食、自由飲水。

3組參試羊隔離飼養(yǎng)，按照疫苗說明書要求，M5株疫苗采用頸部皮下注射方法接種，免疫劑量1頭份/只（活菌數(shù)10×109CFU）；S2株疫苗采用口服免疫方法接種，免疫劑量1頭份/只（活菌數(shù)10×109CFU）；對(duì)照組羔羊肌內(nèi)注射同等劑量生理鹽水。

免疫后對(duì)參試羊的臨床反應(yīng)、體溫、飲食、飲水等情況進(jìn)行觀察和記錄，評(píng)價(jià)不同布病疫苗對(duì)羔羊的免疫副反應(yīng)。

2.2 樣品采集和抗體檢測(cè)

于免疫前和免疫后7、14、21、28、90、120 d，頸靜脈采集血液樣品并分離血清，以RBT對(duì)布病抗體進(jìn)行初步檢測(cè)，再通過SAT進(jìn)行最終判定[5-6]。具體操作與判定標(biāo)準(zhǔn)按照《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T 18646—2018）進(jìn)行。

2.3 數(shù)據(jù)采集

使用天津市衡器有限公司JH-84018型號(hào)電子秤（精度0.05 kg）于早晨空腹稱量參試羊免疫前（1月齡）及免疫后30 d（2月齡）、60 d（3月齡）、90 d（4月齡）、120 d（5月齡）體重，并計(jì)算參試羊在各階段的階段內(nèi)增重情況以及階段總增重情況。其中，階段增重=N月齡羔羊體重-（N-1）月齡羔羊體重；階段總增重=N月齡羔羊體重-1月齡羔羊體重。

2.4 數(shù)據(jù)分析

3 結(jié)果與分析

3.1 免疫副反應(yīng)觀察

結(jié)果（表1）顯示：試驗(yàn)組共60只參試羊，出現(xiàn)發(fā)燒14只（23.33%），厭食17只（28.33%），死亡4只（死亡率6.67%）；對(duì)照組共30只參試羊，未出現(xiàn)發(fā)燒、厭食情況，但因腹瀉死亡1只（3.33%）。試驗(yàn)組參試羊死亡前表現(xiàn)發(fā)燒、呼吸困難、拉稀、食欲廢絕等臨床癥狀。

表1 各組羊只疫苗副反應(yīng)情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3.2 免疫羔羊血清抗體陽(yáng)性率情況

不同布病疫苗免疫參試羊血清抗體檢測(cè)結(jié)果（表2、圖1）顯示：M5和S2組免疫后7 d均產(chǎn)生抗體，且血清抗體消長(zhǎng)規(guī)律基本一致；M5組免疫后14 d血清抗體陽(yáng)性率最高（96.43%），S2組免疫后14 d血清抗體陽(yáng)性率也達(dá)到峰值（93.10%）；免疫后90 d兩試驗(yàn)組血清抗體水平均呈下降趨勢(shì)，免疫后120 d時(shí)M5組血清抗體降至29.63%，S2組降至27.59%。

圖1 不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)布病血清抗體消長(zhǎng)曲線（SAT復(fù)核結(jié)果）

表2 各試驗(yàn)組布病血清抗體檢測(cè)結(jié)果

3.3 免疫羔羊生長(zhǎng)性能影響情況

參試羊不同生長(zhǎng)階段生長(zhǎng)性能指標(biāo)的測(cè)定與分析結(jié)果（表3）顯示：M5組在免疫后2、3、4和5月齡的體重指標(biāo)均極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），S2組在免疫后3、4月齡極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），2、5月齡顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；階段增重分析發(fā)現(xiàn)，M5組在免疫后2、3月齡階段內(nèi)增重極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），S2組在免疫后2月齡階段內(nèi)顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），3月齡階段內(nèi)極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）；階段總增重分析結(jié)果顯示，M5組在免疫后所有階段總增重指標(biāo)均極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），S2組在免疫后2、5月齡顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），3、4月齡極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。研究結(jié)果表明，免疫M(jìn)5和S2株疫苗都對(duì)羔羊早期生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生一定影響，但S2株疫苗比M5株疫苗所產(chǎn)生的影響稍小。

表3 不同疫苗對(duì)羔羊生長(zhǎng)性能的影響情況（）

表3 不同疫苗對(duì)羔羊生長(zhǎng)性能的影響情況（）

注：*.P＜0.05，與對(duì)照組比較差異顯著；**.P＜0.01，與對(duì)照組比較差異極顯著。

4 分析與討論

布魯氏菌是一種細(xì)胞內(nèi)寄生菌，短時(shí)間內(nèi)可大量繁殖，在外界環(huán)境中抵抗力較強(qiáng)。生產(chǎn)實(shí)踐中，布病防控的有效措施之一就是疫苗免疫，且弱毒疫苗相比滅活疫苗更能激起有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生良好的保護(hù)效果。這是因?yàn)闄C(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)中細(xì)胞免疫對(duì)布魯氏菌的清除起主要作用[5]。目前，我國(guó)主要使用的布病M5、S2株疫苗均為光滑型弱毒疫苗，因佐劑類型、毒株組成和生產(chǎn)過程不同，其產(chǎn)生的免疫保護(hù)力、副反應(yīng)等都有所差異[6]。馮學(xué)明[7]、程君生等[8]、白麗艷等[9]、趙心力等[10]研究發(fā)現(xiàn)：M5株疫苗具有很強(qiáng)的毒力，皮下注射能夠?qū)?dòng)物起到較強(qiáng)的保護(hù)力，但對(duì)懷孕母羊可造成高比例流產(chǎn)；而S2株疫苗毒力相對(duì)較低，口服該疫苗可有效保護(hù)動(dòng)物免受感染，且不會(huì)造成懷孕母畜流產(chǎn)，降低經(jīng)濟(jì)損耗。然而不同布病疫苗對(duì)羔羊早期生長(zhǎng)發(fā)育是否產(chǎn)生影響，能否對(duì)羔羊進(jìn)行免疫接種且免疫效果如何的相關(guān)研究尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。因此，研究不同布病疫苗免疫羔羊后其血清抗體的消長(zhǎng)規(guī)律以及對(duì)羔羊早期生產(chǎn)發(fā)育的影響，能夠?yàn)橹贫茖W(xué)合理的布病疫苗免疫程序提供依據(jù)。

4.1 疫苗免疫副反應(yīng)分析

1月齡羔羊免疫接種M5、S2株疫苗后均出現(xiàn)不同程度的厭食、發(fā)燒、死亡等癥狀，其中M5免疫組呈現(xiàn)的厭食、發(fā)燒、死亡比例均高于S2免疫組，且死亡率高6.67%。兩試驗(yàn)組免疫副反應(yīng)主要集中表現(xiàn)于免疫后14 d內(nèi)，羔羊死亡時(shí)間主要集中于免疫后7 d內(nèi)。結(jié)果表明，M5、S2株疫苗免疫1月齡羔羊均會(huì)引起不同程度的免疫應(yīng)激反應(yīng)，致使羔羊體溫升高、食欲減退，甚至死亡。并且本試驗(yàn)中M5株疫苗的免疫副反應(yīng)要強(qiáng)于S2株，這可能是由M5株疫苗毒力較強(qiáng)所導(dǎo)致[8，10]。

4.2 疫苗免疫抗體產(chǎn)生情況分析

本試驗(yàn)對(duì)疫苗免疫血清抗體的檢測(cè)采用了RBT和SAT方法。RBT主要檢測(cè)IgG抗體，敏感性較強(qiáng)，但特異性一般，易受溫度、時(shí)間等因素影響，易出現(xiàn)假陽(yáng)性，同時(shí)因其操作簡(jiǎn)單、快捷且成本較低，生產(chǎn)中常用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、大規(guī)模普查以及布病抗體初步篩檢；而SAT主要檢測(cè)IgM抗體，特異性較強(qiáng)，不易受其他因素干擾，檢測(cè)結(jié)果較RBT準(zhǔn)確，臨床中作為RBT的復(fù)核與最終判定[4，11]。本研究發(fā)現(xiàn)，M5和S2株疫苗均在免疫后7 d檢出血清抗體，M5株疫苗在免疫后14 d陽(yáng)性率最高（96.43%），120 d降為29.63%；S2株疫苗在免疫后14 d陽(yáng)性率也達(dá)峰值（93.10%），120 d降為27.59%。結(jié)果表明，M5、S2株疫苗免疫羔羊后，均能刺激機(jī)體快速產(chǎn)生穩(wěn)定的免疫應(yīng)答反應(yīng)，免疫保護(hù)力效果較好，但M5株疫苗的免疫保護(hù)力略強(qiáng)于S2株疫苗。該結(jié)論與孫晶晶等[12]對(duì)小尾寒羊接種不同布病疫苗免疫效果研究結(jié)果相一致。

4.3 疫苗免疫對(duì)羔羊早期生長(zhǎng)性能影響分析

1月齡羔羊免疫M(jìn)5株疫苗后，羔羊在各階段的體重指標(biāo)以及階段總增重指標(biāo)均極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）；免疫S2株疫苗后，羔羊僅在3、4月齡體重指標(biāo)和階段總增重指標(biāo)極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），之后其生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)有所恢復(fù)，階段內(nèi)增重差異不顯著（P＞0.05），推測(cè)這可能由于M5株疫苗本身毒力較強(qiáng)，對(duì)生理機(jī)能發(fā)育尚不完全的羔羊造成了一定損害，從而引起其機(jī)體生長(zhǎng)性能下降[9]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，M5、S2株疫苗免疫1月齡羔羊后均對(duì)羔羊早期生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生一定影響，分析原因可能是疫苗免疫產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)引發(fā)1月齡羔羊免疫機(jī)能下降、食欲減退，從而導(dǎo)致羔羊生長(zhǎng)發(fā)育緩慢。該結(jié)果與楊志雄[13]報(bào)道的畜禽接種疫苗產(chǎn)生免疫應(yīng)激，引發(fā)動(dòng)物機(jī)體食欲減退，體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝加強(qiáng)，導(dǎo)致生長(zhǎng)發(fā)育緩慢的研究結(jié)果相一致。

5 小結(jié)

對(duì)布魯氏菌M5、S2株疫苗免疫接種1月齡羔羊后其血清抗體產(chǎn)生以及生長(zhǎng)性能影響的研究發(fā)現(xiàn)，M5株疫苗免疫羔羊后產(chǎn)生的免疫副反應(yīng)較大，對(duì)羔羊早期生長(zhǎng)性能影響較大，但血清抗體陽(yáng)性比例較高，免疫保護(hù)力較好；S2株疫苗免疫羔羊后副反應(yīng)相對(duì)較小，對(duì)羔羊早期生長(zhǎng)性能影響也較小，血清抗體消長(zhǎng)規(guī)律與M5株疫苗基本一致，免疫保護(hù)力較好。生產(chǎn)實(shí)際中，建議采用S2株疫苗對(duì)羔羊進(jìn)行口服免疫，同時(shí)適當(dāng)延遲免疫時(shí)間，于羔羊斷奶后免疫。