哮喘患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群、IL-5、IL-25水平變化及其與ACT評(píng)分的相關(guān)性研究

羅婷婷，胡夢(mèng)嬌，趙靜利，程雨嘉，李青

寶雞市人民醫(yī)院兒科，陜西 寶雞 721000

支氣管哮喘屬于兒童慢性呼吸系統(tǒng)多發(fā)病，可對(duì)人體健康造成嚴(yán)重?fù)p害。有調(diào)查顯示，全球哮喘者有3億多，其中我國(guó)臨床發(fā)病率約為16%[1]。相關(guān)研究表明，Th1/Th2型免疫失衡(其中Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答)為導(dǎo)致哮喘氣道炎癥反應(yīng)的基礎(chǔ)[2]。而人體白介素25(IL-25)屬于Th2細(xì)胞因子，主要由肥大細(xì)胞以及Th2細(xì)胞分泌。當(dāng)前研究指出，IL-25能夠協(xié)同Th2類有關(guān)細(xì)胞因子，與機(jī)體免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[3]。亦有研究指出，白介素-5(IL-5)驅(qū)動(dòng)的相應(yīng)嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)增多性呼吸道炎癥為大部分哮喘患者共同特征[4]。近年來(lái)隨著臨床研究不斷深入，已證實(shí)人體T淋巴細(xì)胞亞群(包括Th17細(xì)胞以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等)能夠參與氣道炎癥反應(yīng)，其數(shù)量及功能失衡與哮喘的出現(xiàn)、病程進(jìn)展存在緊密聯(lián)系[5]。當(dāng)前研究主要集中在對(duì)哮喘患者淋巴細(xì)胞亞群與相關(guān)細(xì)胞因子變化方面，關(guān)于其與哮喘病情控制關(guān)系的研究較少。為此，本文旨在探究哮喘患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群、IL-5、IL-25水平與哮喘控制測(cè)試(ACT)評(píng)分的相關(guān)性，希望為臨床提供一定指導(dǎo)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年5月至2020年6月寶雞市人民醫(yī)院收治的115例哮喘患兒作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《支氣管哮喘防治指南》[6]中有關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)4～14周歲；(3)住院患兒；(4)家屬對(duì)本次研究知情，自愿簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并呼吸衰竭、肺部感染或者先天性心臟病等；(2)支氣管畸形或者異物吸入者；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病或者內(nèi)分泌疾病等；(4)腫瘤患者。另選取同期在我院體檢的50例健康兒童作為對(duì)照組。觀察組中男性64例，女性51例；年齡4～14歲，平均(7.65±1.28)歲；體質(zhì)量(22.78±4.06)kg。對(duì)照組中男性28例，女性22例；年齡4～14歲，平均(7.39±1.26)歲；體質(zhì)量(22.95±4.13)kg。兩組兒童的性別、年齡及體質(zhì)量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。哮喘患兒依據(jù)臨床表現(xiàn)分為緩解期組47例和急性發(fā)作期組68例。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批注。

1.2 方法(1)檢測(cè)方法：抽取對(duì)照組兒童入院檢查時(shí)、觀察組入院后空腹靜脈血5 mL，采取3 000 r/min速率予以離心處理，取血清。通過(guò)八色流式細(xì)胞儀(型號(hào)：MACSQuant，購(gòu)自德國(guó)Miltenyi Biotec)完成T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)的檢測(cè)。通過(guò)Thermo Multiskan MK3酶標(biāo)儀，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)——雙抗體夾心法進(jìn)行IL-5與IL-25水平檢測(cè)，相關(guān)試劑盒來(lái)自美國(guó)R&D公司，嚴(yán)格依據(jù)說(shuō)明書(shū)完成操作過(guò)程。(2)采取哮喘控制測(cè)試評(píng)分表(ACT)[7]評(píng)估患兒哮喘控制情況，總分25分，控制良好：25分；基本控制：20～24分；未得到控制：＜20分。

1.3 觀察指標(biāo)比較緩解期組、急性發(fā)作期組與對(duì)照組兒童外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、IL-5、IL-25水平；比較緩解期組、急性發(fā)作期組兒童ACT評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間兩兩比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析法，多組兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)法；采取Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)法分析T淋巴細(xì)胞亞群、IL-5、IL-25與ACT評(píng)分的相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α(雙側(cè))=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 緩解期組、急性發(fā)作期組與對(duì)照組兒童的T淋巴細(xì)胞亞群比較三組兒童的CD3+比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；急性發(fā)作期組兒童的CD8+明顯低于緩解期組和對(duì)照組，且緩解期組明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；急性發(fā)作期組兒童的CD4+、CD4+/CD8+明顯高于解期組和對(duì)照組，且緩解期組明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 緩解期組、急性發(fā)作期組與對(duì)照組兒童的T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

表1 緩解期組、急性發(fā)作期組與對(duì)照組兒童的T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

注：與對(duì)照組比較，a P＜0.05；與緩解期組比較，b P＜0.05。Note:Compared with the control group,a P＜0.05;compared with the remission stage group,b P＜0.05.

組別急性發(fā)作期組緩解期組對(duì)照組F值P值例數(shù)68 47 50 CD3+(%)65.01±10.57 65.24±10.62 65.92±10.73 0.109 0.897 CD4+(%)54.78±7.06ab 51.16±7.75a 47.61±5.02 16.478 0.001 CD8+(%)37.02±5.24ab 40.19±6.23a 43.05±5.03 17.656 0.001 CD4+/CD8+1.57±0.28ab 1.40±0.25a 1.18±0.17 37.201 0.001

2.2 緩解期組、急性發(fā)作期組與對(duì)照組兒童的IL-5、IL-25水平比較急性發(fā)作期組兒童的IL-5、IL-25水平明顯高于緩解期組和對(duì)照組，且緩解期組明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 緩解期組、急性發(fā)作期組與對(duì)照組兒童的IL-5、IL-25水平比較(±s)Table 2 Comparison of IL-5 and IL-25 levels among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

表2 緩解期組、急性發(fā)作期組與對(duì)照組兒童的IL-5、IL-25水平比較(±s)Table 2 Comparison of IL-5 and IL-25 levels among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

注：與對(duì)照組比較，a P＜0.05；與緩解期組比較，b P＜0.05。Note:Compared with the control group,a P＜0.05;compared with the remission stage group,b P＜0.05.

組別急性發(fā)作期組緩解期組對(duì)照組F值P值IL-25(pg/mL)57.24±8.96ab 48.73±8.05a 44.68±7.12 36.505 0.001例數(shù)68 47 50 IL-5(pg/mL)74.92±12.13ab 67.38±10.54a 50.86±9.85 69.476 0.001

2.3 緩解期組、急性發(fā)作期組兒童的ACT評(píng)分比較急性發(fā)作期組兒童的ACT評(píng)分為(16.15±2.76)分，明顯低于緩解期組的(20.84±2.37)分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.479，P＜0.05)。

2.4 T淋巴細(xì)胞亞群、IL-5、IL-25水平與ACT評(píng)分相關(guān)性經(jīng)Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CD8+與ACT評(píng)分呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25與ACT評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 T淋巴細(xì)胞亞群、IL-5、IL-25水平與ACT評(píng)分相關(guān)性Table 3 Correlation of T lymphocyte subsets,IL-5,and IL-25 levels with ACT score

3 討論

當(dāng)前，臨床尚未明確哮喘詳細(xì)發(fā)病機(jī)制。近年來(lái)，免疫機(jī)制成為了哮喘患者發(fā)病中的一個(gè)研究熱點(diǎn)，希望為哮喘診治提供可靠指導(dǎo)。相關(guān)研究指出，哮喘發(fā)病以及發(fā)展和細(xì)胞免疫失衡具有緊密聯(lián)系[8]。人體T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫反應(yīng)主要執(zhí)行者，其在受刺激信號(hào)影響之后，能夠分化為各種亞群，T淋巴細(xì)胞亞群失衡于人體哮喘發(fā)生中發(fā)揮著重要作用[9]。通常情況下，T淋巴細(xì)胞依據(jù)功能分為抑制性T細(xì)胞(Ts)、輔助性T細(xì)胞(Th)以及殺傷T細(xì)胞(Tc)等，依據(jù)表面標(biāo)志可以分為CD4+以及CD8+兩大亞群，其中CD4+屬于Th，CD8+屬于Ts/Tc。現(xiàn)階段，大部分學(xué)者認(rèn)可的觀點(diǎn)是哮喘患者處于Th1/Th2亞群失衡以及Th2功能亢狀態(tài)，機(jī)體免疫平衡受損，導(dǎo)致哮喘發(fā)生[10]。當(dāng)前亦有研究表明，CD8+T細(xì)胞以及CD8+CD28-T細(xì)胞均可參與哮喘患者免疫調(diào)節(jié)[11]。然而相關(guān)臨床資料非常少。CD4+/CD8+值平衡為保持機(jī)體免疫平衡主要環(huán)節(jié)，當(dāng)人體受到外界變應(yīng)原刺激后，可使外周T淋巴細(xì)胞亞群產(chǎn)生異常變化，其中速發(fā)性哮喘患者以CD8+降低較為常見(jiàn)，遲發(fā)性哮喘則以CD4+升高較為多見(jiàn)[12]。本研究中CD8+為：急性發(fā)作期組＜緩解期組＜對(duì)照組，CD4+、CD4+/CD8+為：急性發(fā)作期組＞緩解期組＞對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與上述研究觀點(diǎn)基本一致。說(shuō)明哮喘患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群失衡，其中以急性發(fā)作期患兒CD8+減少、CD4+與CD4+/CD8+異常升高更明顯。以往研究表明，CD8+細(xì)胞能夠通過(guò)抑制免疫球蛋白E(IgE)分泌、糾正Th1/Th2失衡以及抑制氣道炎癥等方式對(duì)哮喘起到保護(hù)作用[13]。本研究中CD8+在不同臨床表現(xiàn)患兒中比較結(jié)果反向支持了上述研究理論。

IL-25為目前新發(fā)現(xiàn)的一種Th2細(xì)胞因子，能夠?qū)е耇h2細(xì)胞因子于人體氣道中增多、上皮細(xì)胞增生以及嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)浸潤(rùn)，使得黏液分泌增多，造成氣道高反應(yīng)性[14]。相關(guān)研究指出，哮喘患者血清里面IL-25表達(dá)水平升高，其能對(duì)氣道內(nèi)部平滑肌細(xì)胞增殖起到促進(jìn)作用，為引起氣道重塑重要影響因素[15-16]。本研究中，哮喘患兒IL-25水平明顯高于對(duì)照組，且急性發(fā)作期組明顯高于緩解期組，表明哮喘患兒出現(xiàn)了IL-25表達(dá)水平異常升高表現(xiàn)，且急性發(fā)作期患兒升高更顯著。主要由于Th2細(xì)胞大量增生、亢進(jìn)造成正調(diào)節(jié)因子IL-25表達(dá)上調(diào)，而哮喘進(jìn)入緩解期后，Th1/Th2失衡有所改善。有研究對(duì)小鼠采取抗IL-5抗體，發(fā)現(xiàn)可有效抑制抗原所致呼吸道EOS浸潤(rùn)，同時(shí)該變化具有劑量依賴性[17]。亦有研究表明，IL-5可對(duì)EOS分化、成熟以及大量聚集起到促進(jìn)作用，參與哮喘患者的呼吸道重塑[18]。本研究中IL-5為：急性發(fā)作期組＞緩解期組＞對(duì)照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與劉函曄等[19]研究觀點(diǎn)一致。說(shuō)明哮喘患兒IL-5水平呈現(xiàn)異常升高變化，其中急性發(fā)作期患兒表現(xiàn)更嚴(yán)重。分析原因：EOS屬于哮喘發(fā)生重要炎性細(xì)胞，IL-5為其特異分化因子，而哮喘急性發(fā)作期EOS炎癥更嚴(yán)重，因此IL-5水平更高[20]。本研究相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，CD8+、CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25均和患兒ACT評(píng)分顯著相關(guān)，哮喘控制越好，CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25水平越低，CD8+升高，臨床可通過(guò)其檢測(cè)評(píng)估哮喘患兒病情控制情況。

綜上，哮喘患兒出現(xiàn)了T淋巴細(xì)胞亞群失衡改變，且IL-5、IL-25呈現(xiàn)異常升高趨勢(shì)，其中以急性發(fā)作期更嚴(yán)重，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25表達(dá)水平和患兒ACT評(píng)分存在顯著相關(guān)性，臨床可根據(jù)其檢測(cè)有效評(píng)估患兒病情。本研究具有樣本量較少、為單中心研究等局限性，有待后續(xù)大樣本與多中心研究進(jìn)一步補(bǔ)充、完善。