羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測CA153的性能研究

于佳 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院濱海醫(yī)院 （天津 300480）

內(nèi)容提要： 目的：研究羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測血清糖類抗原（Carbohydrate antigen，CA）153的性能。方法：于2020年1月～12月在本院住院、門診患者中選取20份血液樣本，參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）系列文件和相關(guān)文獻，同時與具體工作對羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測CA153的精密度、生物參考區(qū)間、線性范圍等進行驗證與評估。結(jié)果：批內(nèi)精密度變異系數(shù)（Coefficient of variation of precision，CV）高、低值分別為2.68%和3.95%，＜1/4CLIA’88TEa（6.35%）；批間精密度CV高、低值分別為3.63%和2.51%，＜1/3CLIA’88 TEa（8.34%）；所測線性范圍值與廠家提供范圍值相似；CA153符合率為100.00%。結(jié)論：羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀測定CA153其檢測性能均與廠家提供的相關(guān)性能符合，且達到相關(guān)質(zhì)量要求，檢測符合率較高，在臨床具有較高的參考價值。

近年來，國內(nèi)醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展，我國醫(yī)學(xué)實驗中檢驗項目逐漸完善，檢驗項目的方法學(xué)性能評估、醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可是目前檢驗科研究的重點內(nèi)容[1]。羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀在臨床常用于檢測心肌損傷、貧血、腫瘤標(biāo)志物以及傳染病癥等多種項目的檢測，該檢驗技術(shù)使用了國際先進的電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)，具有檢測結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡便、自動化程序高等優(yōu)點[2]。血清糖類抗原（Carbohydrate antigen，CA）153是目前臨床應(yīng)用較為廣泛的癌癥診斷與病情監(jiān)測指標(biāo)。據(jù)調(diào)查，僅有各項性能的驗證結(jié)果均符合要求的新檢驗儀器設(shè)備、檢測方式才可在本實驗室開展，隨后在臨床工作中開展服務(wù)[3]。因此本文以CA153為例，對羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀進行性能驗證，闡述如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

于2020年1月～12月在本院住院、門診患者中選取20份血液樣本，檢測CA153。20份樣本中男、女各11例、9例，年齡21～75歲，平均（45.27±6.38）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：20份樣本均無嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸等情況。

排除標(biāo)準(zhǔn)：中途轉(zhuǎn)院、死亡患者；不愿意參與本次研究。

1.2 方法

儀器：羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀；檢測：檢測試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均為羅氏診斷公司生產(chǎn)的原裝配套產(chǎn)品?？崭共杉茉囌?mL靜脈血，自凝后離心10min（3000r/min），實施血清分離，將樣本置于-20°C冰箱內(nèi)待檢。CA153的臨界值是31.3 U/mL，若檢測指標(biāo)超過臨界值，則為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn)

精密度評價[5]：選擇羅氏公司配套的不同濃度水平的質(zhì)控品，參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）Pl5-A2標(biāo)準(zhǔn)，實驗周期5d，每天檢測一批樣本，重復(fù)檢測3次，對同批次樣本、不同批次樣本精密度變異系數(shù)（Coefficient of variation of precision，CV）進行計算。同一批次不同樣本精密度將質(zhì)量目標(biāo)設(shè)定在CLIA’88允許總誤差（Total allowable error，TEa）在1/4之內(nèi)，不同批次精密度將質(zhì)量目標(biāo)設(shè)定在CLIA’88 TEa在1/3之內(nèi)。

線性范圍評價：參考CLSI EP6-A2線性評價方法，分別選取1份低、高濃度樣本（L、H），依據(jù)儀器所規(guī)定線性范圍配置不同系列濃度血清。各樣本均檢測2次，并記錄，將預(yù)測值設(shè)為X，實際值設(shè)為Y，使用多項式回歸方式進行擬合。

參考區(qū)間評價：依據(jù)CCLSC 28-A2評價方式，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（standard operating procedure，SOP）要求在羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀進行檢測，對結(jié)果進行統(tǒng)計，若兩份檢測結(jié)果均在廠商參考區(qū)間范圍內(nèi)，則表示該區(qū)間可用于本實驗室。

2.結(jié)果

2.1 精準(zhǔn)度結(jié)果

CA153不同濃度相對應(yīng)的精密度數(shù)值，見表1。

表1. CA153不同濃度對應(yīng)的精密度數(shù)值 (U/mL)

2.2 CA153批內(nèi)、批間精密度驗證結(jié)果

高、低濃度樣本CA153批內(nèi)CV%均＜1/4CLIA’88，批間CV%均＜1/3CLIA’88，表示此方式精準(zhǔn)度與標(biāo)準(zhǔn)要求符合，見表2。

表2. CA153批內(nèi)、批間精密度驗證結(jié)果(±s)

表2. CA153批內(nèi)、批間精密度驗證結(jié)果(±s)

項目 CV批內(nèi)低值CV 高值CV 1/4CLIA’88 是否接受CA153 3.95 2.68 6.35 是項目 CV批間低值CV 高值CV 1/3CLIA’88 是否接受CA153 2.51 3.63 8.34 是

2.3 線性范圍評價、參考區(qū)間評價實驗室結(jié)果

CA153測量結(jié)果為1.06～288.72 U/mL，廠家參考范圍1.0～300 U/mL；CA153參考區(qū)間0～25 U/mL，結(jié)果符合率為100.00%。

3.討論

電化學(xué)發(fā)光免疫分析主要特點包括靈敏度高、儀器價格低、可實現(xiàn)自動化等，故該技術(shù)已被臨床廣泛應(yīng)用并取得了良好效果。根據(jù)醫(yī)學(xué)實驗室-質(zhì)量和能力的專用要求，儀器說明書中明確規(guī)定的參數(shù)均是在設(shè)備處于最為理想的狀態(tài)下進行測定的，但因為每個實驗室的水質(zhì)、電壓、溫度、濕度等外部因數(shù)存在不同程度的差異，同時并非所有實驗操作人員操作習(xí)慣均一致，因此在檢測系統(tǒng)投入使用前各實驗室都必須對儀器其性能及參數(shù)進行詳細(xì)的分析和驗證[6,7]?！夺t(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》文中明確提出在保證檢驗分析系統(tǒng)、分析儀器的質(zhì)量時，必須對其進行相關(guān)測試，包括其性能、規(guī)定參數(shù)等[8]。醫(yī)學(xué)實驗室-質(zhì)量和能力的專用要求同時規(guī)定：每個實驗室在引進新的檢測系統(tǒng)、檢測設(shè)備時必須對儀器性能進行規(guī)范化、針對性的操作分析，同時將驗證結(jié)果與臨床檢驗標(biāo)準(zhǔn)進行比對，保證其標(biāo)準(zhǔn)符合臨床實際應(yīng)用[9]。

羅氏Cobas601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確性，且價格低廉、操作簡便，能夠?qū)崿F(xiàn)自動化等優(yōu)點，已在臨床中得以廣泛應(yīng)用。在實際實驗室中，對同種樣本使用不同儀器檢測，其結(jié)果可能會存在一定差異，輕則影響診斷、治療效果，重則引發(fā)醫(yī)患糾紛，因此確保檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性，是為臨床診斷、治療提供有效理論依據(jù)的關(guān)鍵。故依據(jù)實驗室能力認(rèn)可需求，各個實驗室均需對所檢測項目每年實施一次性能驗證，進而保障實驗性檢測結(jié)果可靠性、準(zhǔn)確性[10]。

CA153是臨床診斷惡性腫瘤常見腫瘤標(biāo)志物，該指標(biāo)最開始于乳腺癌上皮細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)，其是糖蛋白變異體，一旦細(xì)胞發(fā)生癌變，則會促進糖基化轉(zhuǎn)移酶活化，進而使細(xì)胞表面糖類發(fā)生改變[11]。精密度可反映出監(jiān)測系統(tǒng)分析性能，可對檢測系統(tǒng)的重復(fù)性進行檢驗[12]。本文使用羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測CA153，結(jié)果顯示，批內(nèi)CV高低值分別為2.68%、3.95%，批間CV高低值分別為3.63%、2.51%，表明該儀器在檢測環(huán)境中系統(tǒng)重復(fù)性符合需求，具有較高的精密度，可滿足臨床檢驗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。另外有研究發(fā)現(xiàn)部分儀器參考區(qū)間驗證結(jié)果得出“可以直接引用廠家提供的參考區(qū)間作為這些檢測指標(biāo)的參考區(qū)間”的結(jié)論，但由于臨床調(diào)試時間較短和樣本容量較少、樣本局限性較強，故在該情況的試驗得出的結(jié)果或無法完全反映當(dāng)?shù)貙嵉貦z測狀況，結(jié)果存在一定差異性，在全球范圍內(nèi)也多次出現(xiàn)廠家提供的參考區(qū)間與當(dāng)?shù)貙嶒炇沂褂貌黄鹾系那闆r[13]。因此這種片面的結(jié)果不能清晰、完全地反映當(dāng)?shù)貙嶒炇业那闆r，但在具體實踐開展中又需要充分考慮到實踐成本及人員精力，故目前均按儀器生產(chǎn)廠家給予的參考區(qū)間進行操作[14]。若對儀器的精密度有更高追求，要結(jié)合當(dāng)?shù)貙嶋H情況及當(dāng)?shù)厝巳涸O(shè)定具體參考區(qū)間，而這樣則需要設(shè)定更加精密的取樣人群的取樣標(biāo)準(zhǔn)，同時為提升數(shù)據(jù)的說服力需廣泛采集健康人的標(biāo)本，在更具測定結(jié)果結(jié)合臨床實際標(biāo)準(zhǔn)制定最精確、最符合當(dāng)?shù)氐膮⒖紖^(qū)間，最后再采取最科學(xué)的統(tǒng)計方法對其進行歸納并定期對參考區(qū)間及儀器性能進行評審。

正確度主要是經(jīng)過檢測定值的質(zhì)控品，并對其偏倚進行精準(zhǔn)計算，若最終結(jié)果在廠商規(guī)定范圍內(nèi)，則可被確認(rèn)[15,16]。依據(jù)SOP評標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)，可經(jīng)過對比定值校正品而準(zhǔn)確驗證正確度。本文高、低濃度樣本CA153批內(nèi)CV%均＜1/4CLIA’88，批間CV%均＜1/3CLIA’88，表明該檢測系統(tǒng)檢測CA153的正確性可符合要求。精密度是用于評估檢測值穩(wěn)定性的最重要指標(biāo)之一，該檢查也可用于反映操作系統(tǒng)隨機誤差。精密度的檢測是進行儀器性能分析和評價的基礎(chǔ)和前提，本次試驗的精密度檢測主要參照精密度評價程序EP15-A2文件，數(shù)值符合臨床腫瘤標(biāo)志物檢測指導(dǎo)文件中對精密度的具體要求。

線性范圍指試驗樣本在沒有濃縮、稀釋等預(yù)先處理的情況下可被直接測定出檢測物的范圍，范圍能具體反映性能評價。本次試驗在驗證試劑線性范圍時主要參考臨床相關(guān)文件，共分析多個不同系列濃度的標(biāo)本，這些標(biāo)本基本可對于預(yù)期檢測范圍進行覆蓋。本次試驗結(jié)果提示線性范圍良好，線性范圍與生產(chǎn)廠家指定的檢測范圍相差不大，結(jié)果符合臨床常規(guī)實踐標(biāo)準(zhǔn)。且本次實驗室檢測的線性范圍與廠家提供的范圍相似，分析原因可能為實驗室內(nèi)不同工作人員以及試驗技術(shù)的差異，均會造成線性范圍差異。依據(jù)羅氏配套試劑說明說顯示，各實驗室均應(yīng)建立各自參考范圍，本文研究顯示，CA153結(jié)果符合率為100.00%，符合要求，能夠直接將廠家提供的參考區(qū)間作為CA153參考區(qū)間。

綜上所述，羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測CA153均有較高的精準(zhǔn)度，其各個參數(shù)均可滿足臨床需求與實驗室有關(guān)要求。但本文還存在一定的不足之處，例如樣本數(shù)量少、研究時間短以及未引用客觀性指標(biāo)等，故在今后研究中可進一步增加樣本數(shù)、引用客觀性指標(biāo)以及延長研究時間等，以深入研究羅氏Cobas601全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測CA153的性能。