膠體金農(nóng)殘快速檢測技術應用初探

陸萍 顧心悅 仇婷婷 石國忠 林麗 房旖旎 蔣麗君

（1上海市松江區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，上海 201600；2上海市松江區(qū)新浜鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村服務中心，上海 201605）

農(nóng)殘快速檢測技術是排查產(chǎn)地和流通環(huán)節(jié)農(nóng)產(chǎn)品安全隱患的一種重要手段，在村鎮(zhèn)基層檢測部門落實屬地化農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管中發(fā)揮了重要作用[1]。目前，蔬菜農(nóng)殘快速檢測方法基本按照《G B/T 5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》執(zhí)行,其中，酶抑制法所能檢測的項目僅局限于有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，因此，檢測項目的局限性、檢測設備的精確性等問題已成為目前蔬菜農(nóng)殘快速檢測中亟待解決的難題。膠體金是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型免疫標記技術，近年來已在生物學、臨床醫(yī)學等領域中得到了廣泛使用。膠體金農(nóng)殘快速檢測的技術是一種操作簡單的農(nóng)殘快速檢測方法，其檢測結果與色譜儀檢測結果一致或相近似。為加快膠體金農(nóng)殘快速檢測技術的推廣應用，現(xiàn)將其技術原理以及在實驗中的應用結果介紹如下，以期進一步提升蔬菜農(nóng)殘速測技術能力和實驗室綜合檢測水平。

1 膠體金農(nóng)殘快速檢測的技術原理

膠體金農(nóng)殘快速檢測技術是綜合膠體化學、有機合成化學、免疫學、物理學和材料學等，實現(xiàn)復雜的原理與簡單的操作相統(tǒng)一。以啶蟲脒農(nóng)藥的膠體金快速檢測為例，采用了抗原抗體的特異性反應以及側向層析和膠體金技術進行樣本中啶蟲脒分子的快速定性檢測[2]。樣本中啶蟲脒殘留農(nóng)藥在流動過程中與膠體金標記的特異性單克隆抗體相結合，抑制了抗體和NC膜檢測線（T線）上的啶蟲脒—BSA偶聯(lián)物的結合，從而產(chǎn)生檢測線顏色的變化。通過檢測線與質(zhì)控線（C）顏色深淺比較，從而實現(xiàn)對檢測樣品中啶蟲脒殘留情況的定性檢測，見圖1。

圖1 樣品待測液加入膠體金檢測卡結果顯示

結果判斷：（1）陰性（一）：T線（檢測線，靠近加樣孔一端）顯色比C線（對照線）深或一樣深，表明樣品中啶蟲脒農(nóng)藥殘留濃度低于檢測限量值或無啶蟲脒農(nóng)藥殘留。（2）陽性（+）：T線顯色比C線淺，表明樣品中啶蟲脒農(nóng)藥殘留濃度高于檢測限量值，且T線越淺表明樣品中啶蟲脒農(nóng)藥殘留濃度越高。（3）無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明操作過程不正確或檢測卡已變質(zhì)損壞，在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的檢測卡重新測試。

2 膠體金農(nóng)殘快速檢測技術在實驗中的應用

根據(jù)上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管工作實施要求，對一些常規(guī)農(nóng)藥指標進行重點篩查，現(xiàn)以啶蟲脒農(nóng)藥為例，開展免疫膠體金檢測卡的操作實驗應用[3]，以切實提高檢測的靶向性和精準性。

2.1 儀器和試劑材料

上海瑞鑫科技儀器有限公司生產(chǎn)的C N Y-1218D多功能農(nóng)藥殘留速測儀，電子天平，啶蟲脒免疫膠體金檢測卡，專用稀釋液，移液槍，50 mL離心管，1.5 mL離心管，一次性滴管等。

2.2 樣品前處理

選擇有代表性的新鮮樣品（若是采用冷藏樣品，檢測前需恢復至室溫），從不同葉片或不同部位取樣，剪碎成1 cm左右見方的碎片，稱取2 g碎片樣品于50 mL離心管中，加入5 mL專用稀釋液，手動顛倒混勻（振幅50次/min），充分清洗樣品2 min，靜置1 min，得到樣品待測液。

2.3 檢測卡檢測

從包裝袋中取出免疫膠體金檢測卡和一次性滴管。用滴管吸取3滴（約100 ul）待測液滴入樣孔中，加樣后開始計時，5～8 min后讀取檢測結果（其他時間檢測的結果則判讀無效），讀取檢測結果時，檢測卡宜水平放置于觀察者的正面，切勿將檢測卡倒置。

2.4 上機測定

進入CNY-1218D多功能農(nóng)藥殘留速測儀主頁面，點擊膠體金軟件，在用戶設置頁面輸入生產(chǎn)單位、樣品名稱、檢驗員等信息；點擊檢測界面，將2.3中的檢測卡插入卡槽，啟動檢測，查看檢測結果。

2.5 膠體金農(nóng)殘快檢技術應用

2.5.1 添加啶蟲脒農(nóng)藥檢測實驗

在空白對照膠體金檢測結果為陰性的條件下，以啶蟲脒為例進行農(nóng)藥添加實驗，在50 uL 20%啶蟲脒可溶液劑中加10 mL提取液，混勻作待測液，從包裝袋中取出免疫膠體金檢測卡和一次性滴管，用滴管吸取3滴（約100 uL）待測液滴入樣孔中，加樣后開始計時，5～8 min后讀取檢測結果（其它時間結果判讀無效），重復做3次，若結果均為陽性,則表明檢測定性準確。

2.5.2 膠體金技術樣品檢測實驗

為了解膠體金快速檢測技術在常規(guī)農(nóng)藥和不同蔬菜品種中的應用結果，筆者擴大了檢測范圍，對夜開花、茄子、尖椒、空心菜、米莧、黃瓜等6種蔬菜中的氯氟氰菊酯、噠螨靈、毒死蜱、啶蟲脒、百菌清、滅蠅胺、蚍蟲林等7種農(nóng)藥進行了檢測，檢測結果見表1。

表1 不同蔬菜品種的農(nóng)殘檢測結果

3 結 論

實驗證實，膠體金農(nóng)殘快速檢測技術是農(nóng)殘快速檢測上的一項突破性技術，該技術彌補了傳統(tǒng)檢測方法在檢測參數(shù)、檢測樣品等方面的局限性。筆者以啶蟲脒為例，從樣品制作、樣品檢測、結果識別等方面做了檢測技術介紹，并通過對不同蔬菜品種和不同農(nóng)藥進行免疫膠體金檢測應用實驗，進一步驗證了該技術具有檢測速度快、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作便捷等性能優(yōu)勢。同時，有效開展蔬菜農(nóng)殘快速檢測工作是適應新時期農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的發(fā)展和趨勢，膠體金檢測技術有效提高了農(nóng)藥殘留快速檢測靶向性定性篩查的技術能力，提升了實驗室綜合檢測水平，加強了蔬菜農(nóng)殘監(jiān)管力度，同時也為保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全提供了新的檢測技術手段。