飼糧中添加蘆丁對(duì)肉雞回腸形態(tài)、免疫、抗氧化及屏障功能的影響

劉慧娟，王 超，周斌斌，張佳琦，王 恬，莊 蘇

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，南京 210095)

腸道既是動(dòng)物機(jī)體消化、吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要場(chǎng)所，也是機(jī)體主要的分泌器官和免疫器官[1]。腸道作為免疫的第一道防線，在維持機(jī)體腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的同時(shí)可有效抵抗病原微生物及抗原物質(zhì)進(jìn)入腸細(xì)胞，保護(hù)腸道功能[2-3]。應(yīng)激狀態(tài)下，腸道功能受損，部分細(xì)菌和毒素可穿過胃腸道進(jìn)入宿主體內(nèi)，降低腸黏膜上皮細(xì)胞的抵抗力，繼而破壞機(jī)體免疫，影響動(dòng)物健康與生長(zhǎng)。在動(dòng)物生產(chǎn)過程中，氧化應(yīng)激引起動(dòng)物腸道組織形態(tài)改變，破壞腸內(nèi)微生態(tài)平衡，導(dǎo)致腸道功能障礙，同時(shí)也可導(dǎo)致腸屏障功能損傷，造成腸道組織繼發(fā)性感染，影響腸道健康[4]。多項(xiàng)研究表明，黃酮類物質(zhì)作為一種高效抗氧化劑，能夠有效緩解由氧化應(yīng)激引起的腸道損傷，保護(hù)腸道完整性，提高其抗氧化能力[5-6]。蘆丁(rutin)又稱蕓香甙，主要來源于蕓香葉的一種黃酮類化合物，廣泛存在于多種藥用植物和食物中，為淡黃色或淡綠色針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末[7]。它具有抗氧化、抗炎、增強(qiáng)免疫和清除自由基等多種生物學(xué)功能[8-9]。研究表明，蘆丁因其本身具備獨(dú)特的黃酮多酚結(jié)構(gòu)，主要在小腸被吸收或與小腸內(nèi)源性蛋白質(zhì)結(jié)合，進(jìn)而在腸道組織或通過入血轉(zhuǎn)運(yùn)至機(jī)體其他組織中發(fā)揮作用[10]。Itagaki等[11]報(bào)道，蘆丁能夠清除大鼠腸道組織多余的活性氧進(jìn)而保護(hù)腸道健康。Hassan等[12]研究證明，飼糧中添加蘆丁能促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)，提高肉雞抗氧化功能。目前關(guān)于蘆丁的功能研究多集中在體外細(xì)胞或小鼠上，而對(duì)肉雞腸道功能的研究較為缺乏，因此，本試驗(yàn)擬通過在肉雞飼糧中添加不同水平的蘆丁，從回腸組織形態(tài)、抗氧化、免疫和腸屏障功能方面系統(tǒng)評(píng)估蘆丁的作用效果，以期為蘆丁在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì)

1.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 動(dòng)物飼養(yǎng)及屠宰測(cè)定均經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物保護(hù)和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。試驗(yàn)擇取1日齡AA肉雞256只，隨機(jī)分為4組，每組8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只，分別飼喂基礎(chǔ)飼糧中添加0、250、500和1 000 mg·kg-1的蘆丁。整個(gè)試驗(yàn)期為42 d，分為飼養(yǎng)前期(1～21 d)和飼養(yǎng)后期(22～42 d)?；A(chǔ)日糧(粉料)參照美國(guó)國(guó)家研究委員會(huì)NRC(2012)推薦營(yíng)養(yǎng)水平配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。試驗(yàn)所用蘆丁(純度95%)購(gòu)自上海阿拉丁生物科技股份有限公司；試驗(yàn)肉雞購(gòu)自當(dāng)?shù)厣唐贩趸瘓?chǎng)(南京，江蘇)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)期內(nèi)，將所有肉仔雞飼養(yǎng)在1個(gè)溫度可控的房間內(nèi)，每個(gè)重復(fù)(8只)飼養(yǎng)于1欄內(nèi)，前4 d房間溫度保持在33～34 ℃，之后逐漸降低為22 ℃直到試驗(yàn)結(jié)束。試驗(yàn)過程中，肉仔雞自由采食和飲水。期間按雞場(chǎng)飼養(yǎng)管理要求進(jìn)行環(huán)境清理和常規(guī)免疫，保持舍內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生并觀察和記錄肉雞的精神狀態(tài)和健康狀況。

1.2 樣品采集

在21日齡和42日齡時(shí)，試驗(yàn)雞禁食12 h后，從各組每重復(fù)中隨機(jī)選取1只雞進(jìn)行解剖，分離出肉雞的回腸組織并取約2.0 cm的腸段組織于4%多聚甲醛溶液中固定，以備后續(xù)制備腸道切片。另取部分回腸樣本，沿腸道縱軸用剪刀剪開腸腔，用載玻片刮取腸道黏膜于凍存管中，置于液氮冷凍后存于-80 ℃低溫冰柜儲(chǔ)存待測(cè)。

1.3 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.3.1 腸道組織形態(tài)觀察 將回腸組織于4%多聚甲醛中固定48 h后，通過酒精、二甲苯處理，石蠟包埋、切片，并用伊紅和蘇木精染色后置于顯微鏡(ECLIPSE 80i型，尼康日本)下觀察組織形態(tài)，用Image-Pro Plus軟件測(cè)量絨毛高度(VH)，絨毛寬度(VW)和隱窩深度(CD)，并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度比值(V/C)。

1.3.2 腸道黏膜免疫球蛋白測(cè)定 取21日齡和42日齡肉雞腸道黏膜樣品與0.9%的氯化鈉溶液按質(zhì)量/體積比(1∶9)勻漿后離心(4 ℃，3 000 r·min-1，15 min)，收集上清液按照ELISA法測(cè)定回腸黏膜中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量，試劑盒購(gòu)自南京奧青生物有限公司。采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定總蛋白(TP)含量計(jì)算回腸黏膜中每毫克蛋白含有的sIgA含量，測(cè)定步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 腸道抗氧化指標(biāo)測(cè)定 取“1.3.2”中上清液測(cè)定丙二醛(MDA)含量、總抗氧化能力(T-AOC)以及總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)的活性，所用試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.4 目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量測(cè)定 取回腸黏膜樣品，使用TRIzol試劑(TaKaRa，大連)提取總RNA，通過qRT-PCR檢測(cè)目的基因mRNA表達(dá)，以β-actin作為內(nèi)參基因，使用2-ΔΔCt方法計(jì)算各基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量，具體操作根據(jù)先前研究方法進(jìn)行[13]。引物序列見表2。

(續(xù)表1 Continued)

表2 qRT-PCR引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2019初步整理后，采用SPSS 22.0分析軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析，并用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，采用多項(xiàng)式中的線性和二次分析對(duì)蘆丁不同梯度的效果進(jìn)行分析。P<0.05表示差異顯著，0.05≤P<0.10表示趨勢(shì)性影響。

2 結(jié) 果

2.1 不同水平蘆丁對(duì)肉雞腸道形態(tài)組織結(jié)構(gòu)的影響

由表3可知，飼糧中添加蘆丁線性增加42 d回腸絨毛高度(PL<0.05；PQ=0.090)，對(duì)21 d回腸V/C值有二次升高趨勢(shì)(PQ=0.069)。與對(duì)照組相比，飼糧中添加250 mg·kg-1提高了21 d回腸V/C值，而添加500 mg·kg-1蘆丁增加了42 d回腸VH(P<0.05)。添加蘆丁對(duì)肉雞前、后期VW和CD無顯著影響(P>0.05)。

表3 不同水平蘆丁對(duì)肉雞回腸組織形態(tài)的影響

2.2 不同水平蘆丁對(duì)肉雞回腸黏膜sIgA含量的影響

如表4所示，飼糧中添加蘆丁線性和二次曲線提高21 d回腸黏膜中sIgA含量(PL<0.05；PQ<0.05)，且蘆丁處理組回腸黏膜中sIgA含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。飼糧中添加蘆丁對(duì)42 d回腸黏膜中sIgA含量無顯著影響(P>0.05)。

表4 不同水平蘆丁對(duì)肉雞回腸黏膜中sIgA含量的影響

2.3 不同水平蘆丁對(duì)肉雞腸道抗氧化指標(biāo)的影響

如表5和圖1所示，21 d時(shí)，飼糧中添加蘆丁線性和二次曲線提高了回腸黏膜中T-AOC(PL<0.05；PQ<0.05)以及HO-1 mRNA的表達(dá)量(PL<0.05；PQ<0.05)，提高了GSH-Px活性(PL=0.096；PQ<0.05)，線性增加NQO1 mRNA的表達(dá)量(PL<0.05)，并二次曲線降低回腸黏膜中MDA含量(PQ<0.05)，提高Nrf2 mRNA的表達(dá)量(PQ<0.05)；與對(duì)照組相比，蘆丁處理組顯著提高回腸黏膜中HO-1 mRNA的表達(dá)量(P<0.05)，250和500 mg·kg-1蘆丁組顯著降低回腸黏膜中MDA含量(P<0.05)，提高GSH-Px活性(P<0.05)，同時(shí)添加250 mg·kg-1蘆丁顯著提高回腸黏膜中Nrf2 mRNA的表達(dá)量(P<0.05)，500 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中T-AOC和NQO1 mRNA的表達(dá)量也顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。42 d時(shí)，飼糧中添加蘆丁線性和二次曲線降低回腸黏膜中MDA含量(PL<0.05；PQ<0.05)，Nrf2和HO-1 mRNA的表達(dá)量呈二次曲線增加(PQ<0.05)，同時(shí)有提高T-SOD(PL=0.058；PQ=0.055)與GSH-Px活性(PQ=0.053)趨勢(shì)；與對(duì)照組相比，添加500 mg·kg-1蘆丁顯著降低了回腸黏膜中MDA含量(P<0.05)，提高T-SOD活性和Nrf2、HO-1 mRNA的表達(dá)量(P<0.05)，250 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中HO-1 mRNA的表達(dá)量也顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。添加蘆丁對(duì)回腸黏膜CAT活性和GSH-Px、SODmRNA的表達(dá)量無顯著影響(P>0.05)。

表5 不同水平蘆丁對(duì)肉雞回腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

圖1 不同水平蘆丁對(duì)21 d(A)和42 d(B)肉雞腸道抗氧化相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

2.4 不同水平蘆丁對(duì)肉雞腸道黏膜增殖與凋亡基因相對(duì)表達(dá)量的影響

如圖2所示，21 d時(shí)，飼糧中添加蘆丁二次曲線提高回腸黏膜中Bcl-2 mRNA表達(dá)量(PQ<0.05)，且250 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中Bcl-2 mRNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。42 d時(shí)，飼糧中添加蘆丁線性提高回腸黏膜中Bcl-2 mRNA表達(dá)量(PL<0.05)，且與對(duì)照組相比，添加500 mg·kg-1蘆丁顯著增加了回腸黏膜Bcl-2和ki67 mRNA表達(dá)量(P<0.05)，1 000 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中Bcl-2 mRNA表達(dá)量也顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。蘆丁對(duì)回腸黏膜中Bax和Caspase-3 mRNA的表達(dá)量無顯著影響(P>0.05)。

2.5 不同水平蘆丁對(duì)肉雞腸道黏膜緊密連接蛋白基因相對(duì)表達(dá)量的影響

如圖3所示，21 d時(shí)，飼糧中添加蘆丁二次曲線提高了回腸黏膜中ZO-1 mRNA表達(dá)量(PQ<0.05)，且250和500 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中ZO-1 mRNA的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

圖3 不同水平蘆丁對(duì)21 d(A)和42 d(B)肉雞回腸黏膜緊密連接蛋白相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

42 d 時(shí)，飼糧中添加蘆丁線性提高回腸黏膜中ZO-1和Mucin2 mRNA的表達(dá)量(PL<0.05)，且與對(duì)照組相比，添加500和1 000 mg·kg-1蘆丁可顯著提高回腸黏膜中Mucin2 mRNA表達(dá)量(P<0.05)，500 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中ZO-1 mRNA的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。此外，飼糧中添加蘆丁有增加21 d回腸黏膜中Mucin2 mRNA(PQ=0.077)和42 d黏膜中CLDN2 mRNA(PL=0.058)表達(dá)量的趨勢(shì)。

2.6 不同水平蘆丁對(duì)肉雞回腸黏膜炎癥基因相對(duì)表達(dá)量的影響

如圖4所示，21 d時(shí)，飼糧中添加蘆丁使回腸黏膜中NF-κBmRNA表達(dá)量呈二次曲線降低(PQ<0.05)，且250和500 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中NF-κBmRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。42 d時(shí)，飼糧中添加蘆丁線性和二次曲線降低回腸黏膜中IL-2 mRNA的表達(dá)量(PL<0.05；PQ<0.05)，NF-κBmRNA表達(dá)量呈二次曲線下降(PQ<0.05)，且與對(duì)照組相比，蘆丁處理組可顯著降低回腸黏膜中IL-2 mRNA的表達(dá)量(P<0.05)，500 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中NF-κBmRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。此外，飼糧中添加蘆丁能夠線性降低42 d回腸黏膜中TNF-αmRNA表達(dá)量(PL<0.05)，但對(duì)Myd88和IFN-γmRNA的表達(dá)量無顯著影響(P>0.05)。

圖4 不同水平蘆丁對(duì)21 d(A)和42 d(B)肉雞回腸黏膜炎癥相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

3 討 論

3.1 不同水平蘆丁對(duì)肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和腸屏障功能的影響

腸道是機(jī)體養(yǎng)分消化與吸收的主要場(chǎng)所，腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)指標(biāo)，如腸道絨毛高度(VH)、隱窩深度(CD)及絨毛高度與隱窩深度比值(V/C)等，是衡量飼料轉(zhuǎn)化效率的重要指標(biāo)[14-15]。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，飼糧中添加250和500 mg·kg-1蘆丁分別提高了21 d回腸V/C值和42 d回腸VH，這與馬紹航[16]發(fā)現(xiàn)的山銀花黃芩提取物(一種黃酮類物質(zhì))能夠顯著提高肉雞腸道VH和V/C值，增強(qiáng)肉雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收功能的結(jié)果相似。Kamboh和Zhu[17]研究表明，染料木素和橙皮苷可顯著提高肉雞腸道中VH和VW，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。張佳琦等[18]研究也發(fā)現(xiàn)，日糧添加蘆丁能顯著提高仔鼠空腸VH和VW，改善斷奶仔鼠空腸絨毛形態(tài)。蘆丁含有獨(dú)特的黃酮多酚結(jié)構(gòu)，它可以在小腸內(nèi)被吸收或與小腸內(nèi)源性蛋白質(zhì)結(jié)合后對(duì)腸道組織發(fā)揮有益作用，防止腸道損傷[10, 19]，這可能是蘆丁能夠改善肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的主要原因之一。Bcl-2和ki67能夠抑制細(xì)胞凋亡、參與細(xì)胞增殖調(diào)控，在組織器官生長(zhǎng)發(fā)育過程中具有重要作用[20]。Bax是Bcl-2的同源基因，當(dāng)Bax表達(dá)過量時(shí)自身可結(jié)合成同源二聚體，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[21]。ki67是細(xì)胞增殖的標(biāo)志物。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，添加250 和1 000 mg·kg-1蘆丁分別提高了21和42 d回腸黏膜中Bcl-2 mRNA表達(dá)量，500 mg·kg-1蘆丁組顯著增加回腸黏膜中Bcl-2和ki67 mRNA的表達(dá)量，結(jié)合蘆丁對(duì)肉雞回腸V/C和VH的影響結(jié)果，提示飼糧中添加適宜劑量蘆丁對(duì)促進(jìn)肉雞腸道絨毛生長(zhǎng)和改善腸道結(jié)構(gòu)具有積極作用。

腸上皮緊密連接結(jié)構(gòu)(TJ)是構(gòu)成腸道機(jī)械屏障結(jié)構(gòu)的主要連接方式[22]，它是由大量功能性和結(jié)構(gòu)性蛋白組成，包括OCLN、CLDN2和ZO-1等[23]。ZO-1是通過與其他蛋白質(zhì)(CLDN和OCLN)的相互作用來保持腸道緊密連接的關(guān)鍵因素之一。OCLN和CLDN表達(dá)下降可直接破壞緊密連接結(jié)構(gòu)的完整性，導(dǎo)致腸屏障功能障礙。在本試驗(yàn)中，添加250和500 mg·kg-1蘆丁顯著提高了21 d回腸黏膜中ZO-1 mRNA的表達(dá)量，500 mg·kg-1蘆丁組42 d回腸黏膜中Mucin2和ZO-1 mRNA的表達(dá)量也顯著高于對(duì)照組，這與Gil-Cardoso等[24]研究相似，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加榭皮素可促進(jìn)腸道中ZO-1和OCLNmRNA的表達(dá)量，保護(hù)腸道屏障結(jié)構(gòu)的完整。Noda等[25]也證明，黃酮類化合物對(duì)腸道屏障功能具有促進(jìn)作用。因此推測(cè)，飼糧中添加蘆丁可能通過增強(qiáng)腸道黏膜緊密連接蛋白的表達(dá)量來完善肉雞腸道屏障結(jié)構(gòu)，維護(hù)腸道功能。

3.2 不同水平蘆丁對(duì)肉雞腸道黏膜免疫功能的影響

腸道黏膜免疫是機(jī)體抵御病原微生物入侵的第一道防御屏障，sIgA是其主要效應(yīng)因子[26]。sIgA主要分布于黏液層由腸道漿母細(xì)胞分泌，是腸道黏膜免疫的核心，能夠保護(hù)腸上皮細(xì)胞免受損傷[27]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，飼糧中添加250、500和1 000 mg·kg-1蘆丁顯著提高21 d回腸黏膜中sIgA含量，而對(duì)42 d回腸黏膜中sIgA含量無顯著影響，這可能是由于肉雞前期的免疫系統(tǒng)暫未發(fā)育健全，添加蘆丁后能夠影響和促進(jìn)肉雞免疫系統(tǒng)的發(fā)育，而隨著生長(zhǎng)期的延長(zhǎng)，肉雞免疫系統(tǒng)逐步發(fā)育成熟與完善，蘆丁對(duì)免疫系統(tǒng)的作用效果也逐漸減弱。

NF-κB介導(dǎo)的信號(hào)通路參與體內(nèi)多種反應(yīng)，它是一種轉(zhuǎn)錄因子，參與炎癥過程中的調(diào)節(jié)[28-29]，當(dāng)其過度表達(dá)時(shí)可誘導(dǎo)相關(guān)促炎因子的轉(zhuǎn)錄和合成[30]。TNF-α和IL-2是促炎性細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)機(jī)體的炎癥反應(yīng)，并受NF-κB轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控[31]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，蘆丁處理組回腸黏膜中IL-2 mRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照組，且與對(duì)照組相比，飼糧中添加500 mg·kg-1蘆丁顯著降低21和42 d回腸黏膜中NF-κBmRNA表達(dá)量，因此推測(cè)，肉雞飼糧中添加蘆丁能夠通過抑制NF-κBmRNA的表達(dá)量，下調(diào)相關(guān)炎癥因子的表達(dá)從而對(duì)機(jī)體發(fā)揮抗炎作用。該結(jié)果與Yeh等[32]和Su 等[33]研究結(jié)果相似，即蘆丁能夠顯著抑制小鼠肺部或乳腺中NF-κBmRNA的表達(dá)，降低IL-1β、TNF-α、IL-6等多種促炎癥因子的水平，具有較強(qiáng)的抗炎作用。

3.3 不同水平蘆丁對(duì)肉雞腸道黏膜抗氧化的影響

抗氧化能力能夠反映機(jī)體的健康狀況，機(jī)體內(nèi)的氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)共同參與調(diào)節(jié)自由基的生長(zhǎng)與消除，抗氧化酶是一種存在于細(xì)胞環(huán)境中的蛋白質(zhì)，它具有較強(qiáng)清除體內(nèi)自由基的活性作用。T-SOD、CAT和GSH-Px是抗氧化的關(guān)鍵酶，也是抗氧化系統(tǒng)中的重要組成部分[34]。T-SOD可維持機(jī)體氧化與抗氧化系統(tǒng)平衡。T-AOC表示機(jī)體總抗氧化能力， MDA含量直接決定機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度，是機(jī)體評(píng)價(jià)脂質(zhì)氧化損傷的重要指標(biāo)，同時(shí)也可間接反映腸黏膜細(xì)胞的損傷程度[35]。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，添加250和500 mg·kg-1蘆丁顯著降低21 d回腸黏膜中MDA含量，500 mg·kg-1蘆丁組42 d 回腸黏膜中MDA含量顯著低于對(duì)照組，提示蘆丁能夠緩解腸道脂質(zhì)氧化損傷。此外，500 mg·kg-1蘆丁組21 d回腸黏膜中T-AOC和GSH-Px活性及42 d T-SOD活性均顯著低于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果與Hassan 等[12]研究結(jié)果相似，其發(fā)現(xiàn)飼糧中添加蘆丁能夠顯著提高肉雞血清中SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量。張佳琦等[18]研究也顯示，蘆丁能夠顯著降低小鼠腸道中MDA含量，提高SOD活性。蘆丁因其結(jié)構(gòu)含有豐富的酚羥基，可以通過抽氫反應(yīng)產(chǎn)生較穩(wěn)定的苯氧自由基進(jìn)而中止鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，同時(shí)活潑氫與機(jī)體內(nèi)自由基結(jié)合，及時(shí)清除機(jī)體內(nèi)過多的ROS，這可能與蘆丁能夠有效抑制肉雞腸道脂質(zhì)過氧化，并通過增強(qiáng)酶促和非酶促抗氧化系統(tǒng)來提高肉雞的抗氧化能力的關(guān)鍵原因之一[11, 36]。

Nrf2在體內(nèi)抗氧化信號(hào)通路中可通過調(diào)下游相關(guān)抗氧化基因表達(dá)如HO-1、NQO1等來提高機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)[37]。HO-1作為一種抗氧化酶在應(yīng)激狀態(tài)下能夠保持機(jī)體細(xì)胞穩(wěn)定性，當(dāng)其表達(dá)上調(diào)時(shí)有助于增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能，緩解組織氧化損傷[38]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，21 d時(shí)，蘆丁處理組顯著提高回腸黏膜中HO-1 mRNA的表達(dá)量，添加250 和500 mg·kg-1蘆丁分別提高了回腸黏膜中Nrf2和NQO1 mRNA的表達(dá)量；42 d時(shí)，500 mg·kg-1蘆丁組回腸黏膜中Nrf2和HO-1 mRNA的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組，故推測(cè)飼糧中添加500 mg·kg-1蘆丁可能通過增強(qiáng)Nrf2信號(hào)通路來調(diào)節(jié)肉雞腸道的抗氧化功能，這與王斌等[39]研究發(fā)現(xiàn)灌胃蘆丁(100 mg·kg-1)可通過Nrf2/HO-1信號(hào)通路緩解小鼠腎氧化應(yīng)激損傷，提高其抗氧化功能的結(jié)果一致。同時(shí)，本試驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，與500 mg·kg-1蘆丁組相比，1 000 mg·kg-1蘆丁組42 d肉雞回腸黏膜中Nrf2 mRNA的表達(dá)量顯著下降，這與Féres等[40]研究發(fā)現(xiàn)，添加2 000 mg·kg-1蕓香苷(蘆丁含量為(76±3)%)可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一定副作用的結(jié)果相似，但其具體機(jī)制尚需要進(jìn)一步研究。

4 小 結(jié)

飼糧中添加蘆丁可改善肉雞回腸形態(tài)結(jié)構(gòu)、提高腸道免疫、屏障功能并通過增強(qiáng)回腸組織中Nrf2信號(hào)通路增強(qiáng)其抗氧化能力。在本試驗(yàn)條件下，綜合蘆丁對(duì)肉雞全期的作用效果，推薦蘆丁添加量為500 mg·kg-1。