鹽酸達泊西汀片的體外溶出曲線相似性評價

郭巧蘭 陳良梅 安 明

1.包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014040；2.天士力研究院江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，天津 300410

鹽酸達泊西汀是用于治療早泄的短效的5-色胺再攝取抑制劑[1]，通過減少神經(jīng)元對血清素的吸收[2]以及神經(jīng)遞質(zhì)對細胞突觸前和突觸后受體之間電位差的影響來延緩早泄癥狀[3]。鹽酸達泊西汀具有pH依賴性（pKa=8.6）[4]，在中性溶液中的溶解度較低[5]，在生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)中屬于Ⅳ類藥物，溶出度成為藥物吸收的限制環(huán)節(jié)[6]，這類藥物的體外溶出至關(guān)重要[7]。同時普通口服固體制劑給藥后，藥物在體內(nèi)的溶解和釋放對于藥物的吸收起重要作用[8]。本研究考察鹽酸達泊西汀片在不同溶出介質(zhì)中的體外溶出曲線[9]，并通過相似因子（?2）法與參比制劑的溶出曲線進行相似性評價[10]，為后續(xù)相關(guān)研究提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1 儀器

7080DS自動溶出度儀(美國安捷倫科技有限公司）；Cary60紫外分光光度計(美國安捷倫科技有限公司)；XS105DU十萬分之一電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；S220 pH計[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；TS-100C恒溫搖床（上海天呈實驗儀器制造有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸達泊西汀原研片60 mg（德國美納里尼集團楊森公司，批號：1800101）；鹽酸達泊西汀自制片60mg（天士力研究院，批號：D03、D04、D05、D06）；鹽酸達泊西汀原料藥[廣州市同暉化工有限公司，批號：2DPH(M)0060820]；鹽酸達泊西汀對照品（杭州國瑞生物科技有限公司，批號：WR20211202）；甲醇（美國Supelco公司，色譜純，批號：1148507118）

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)制備

按照《普通口服固體制劑溶出度實驗技術(shù)指導(dǎo)原則》[11]配制9種介質(zhì)，分別為pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.0醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.8磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.0磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.4磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液及水。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取27 mg鹽酸達泊西汀對照品置于10 ml容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度并搖勻，作為儲備液。精密量取1 ml儲備液置于100 ml容量瓶中，加相應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻得到對照品溶液。

2.3 溶解度的測定

根據(jù)搖瓶法分別測定達泊西汀原料在pH 1.0、pH 4.5、pH 5.5、pH 5.8、pH 6.8和水6種介質(zhì)中的飽和溶解度并繪制曲線，結(jié)果見圖1。溶出介質(zhì)pH在1.0～4.5時，達泊西汀呈現(xiàn)較高溶解度，該pH區(qū)間不同處方工藝自制片的體外溶出度較快，難以反映不同制劑工藝導(dǎo)致的自制片溶出度差異。溶出介質(zhì)在pH 4.5～6.8時，原料藥溶解度顯著降低，因此可選擇具有區(qū)分力的溶出條件以區(qū)分不同制劑工藝片劑對體外溶出度的影響。

圖1 達泊西汀原料藥的pH-溶解度曲線

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 檢測波長的確定 精密稱量處方中可能使用的輔料，分別加6種介質(zhì)充分溶解并過濾，得到空白輔料溶液。在200～400 nm內(nèi)對空白輔料溶液、空白溶劑和對照溶液進行紫外掃描。結(jié)果表明，鹽酸達泊西汀在292 nm處有最大吸收峰，而空白溶劑和空白輔料溶液在292 nm處無明顯吸收，所以選擇292 nm為測定波長。

2.4.2 線性關(guān)系考察 精密量取適量的鹽酸達泊西汀儲備液置于100 ml量瓶中，用6種溶出介質(zhì)稀釋至刻度，分別配制成15、20、30、40、45 μg/ml的不同濃度對照品溶液。根據(jù)紫外分光光度法，測定不同濃度溶液在292 nm處的吸光度。以鹽酸達泊西汀的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標，吸光度（y）為縱坐標繪制標準曲線，得到回歸方程，結(jié)果見表1，在15～45 μg/ml內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

表1 不同溶出介質(zhì)線性回歸方程

2.4.3 精密度實驗 取適量對照品溶液，用紫外分光光度法重復(fù)測定6次。RSD分別為0.29%、0.45%、0.36%、0.55%、0.63%和0.61%。結(jié)果表明，該儀器具有良好的精密度。

2.4.4 穩(wěn)定性實驗 取適量6種介質(zhì)的對照品溶液，置于室溫下0、2、4、6、8、12和24 h并測量吸光度。RSD分別為0.54%、0.38%、0.59%、0.41%、0.51%和0.46%，表明鹽酸達泊西汀室溫下24 h內(nèi)在6種介質(zhì)中具有良好的穩(wěn)定性。

2.4.5 回收率實驗 分別精密稱取約21.6、27.3、30.0 mg的鹽酸達泊西汀原料并置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻并作為儲備液。分別精密量取1 ml儲備液放入100 ml容量瓶中，加入處方輔料，分別加入6種介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻并過濾。根據(jù)紫外分光光度法測定292 nm處的吸光度值，計算鹽酸達泊西汀回收率和RSD。3個濃度樣品（80%、100%、120%）中的鹽酸達泊西汀平均回收率在99.4%～99.7%，RSD分別為0.70%、0.48%、0.20%、0.28%、0.19%、0.32%，表明在6種介質(zhì)中的鹽酸達泊西汀回收率均良好。

2.5 溶出度測定

按《中華人民共和國藥典》2015年版第4部分通則0931[12]，溶出介質(zhì)900 ml，取樣時間為5、10、15、20、30、45和60 min，根據(jù)紫外分光光度法測定3批不同處方（批號：D03、D04、D05）自制片吸光度，計算平均累積溶出度并繪制溶出曲線，結(jié)果見圖2～7。

圖2 pH 1.0介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

2.6 溶出介質(zhì)的區(qū)分力考察

為進一步考察溶出介質(zhì)的區(qū)分力，在常見的4種介質(zhì)評價中，加入了pH 5.5、pH 5.8兩種介質(zhì)，考察了3批工藝參數(shù)不同的自制片的溶出曲線相似性，結(jié)果見表2。由表可知6種介質(zhì)均表現(xiàn)出D03批與D05批自制片溶出曲線的不相似以及D04批與D05批的溶出曲線相似性。自制片D03和D04批在pH 5.5批和pH 5.8兩種介質(zhì)中的溶出曲線明顯不相似，表明兩種介質(zhì)具有一定區(qū)分力。

圖3 pH 4.5介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖4 pH 5.5介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖5 pH 5.8介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖6 pH 6.8介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖7 水中的3批自制片溶出曲線

表2 ?2結(jié)果統(tǒng)計表

2.7 溶出曲線相似性評價

通過該6種介質(zhì)評價經(jīng)處方優(yōu)化的自制片D06與原研片的溶出曲線相似性，結(jié)果見圖8。結(jié)果顯示，與 原 研 片 的?2分 別 為69.9、67.5、67.9、68.9、68.3、67.0，結(jié)果均大于50，表明自制片D06與原研片在6種介質(zhì)中的溶出曲線相似。

圖8 自制片D06與原研片在6種不同介質(zhì)中的溶出曲線

3 討論

具有區(qū)分力的溶出方法在固體制劑的處方工藝中發(fā)揮重要作用，可以區(qū)分出不同處方藥物的內(nèi)在質(zhì)量屬性[13]。本文闡述了具有區(qū)分力的溶出方法的篩選和驗證思路[14]，為固體制劑的處方工藝研發(fā)提供了參考。對于仿制藥，與原研片具有相似的體外溶出曲線，雖不能完全證明具有和原研片的生物等效性，但可大大提高生物等效性（BE）的通過率。

各國普遍使用?2法雖計算簡便，但也存在局限性[15]。為進一步的體內(nèi)外相關(guān)性評價，需要在此基礎(chǔ)上通過其他模型類擬合統(tǒng)計法進行綜合評價，掌握體外溶出評估體系，才能在仿制藥的再評價和質(zhì)量標準的建立提供便利[16]。