丁香酚對“優(yōu)鱸3號”幼魚運(yùn)輸水質(zhì)及其血液、肌肉生理指標(biāo)的影響

唐忠林 張佳佳 周國勤 陳樹橋 徐鋼春 徐跑 強(qiáng)俊 王佩佩

(1 南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所，江蘇南京 210036；2 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，江蘇無錫 214000)

大口黑鱸“優(yōu)鱸3號”(GS-01-001-2018)是2019年全國水產(chǎn)原種和良種審定委員會審定通過的新品種之一[1]，是以“優(yōu)鱸1號”(GS01-004-2010)和從美國引進(jìn)的北方亞種為基礎(chǔ)選育種群，經(jīng)連續(xù)4代選育而獲得的。相比“優(yōu)鱸1號”和未選育群體，“優(yōu)鱸3號”幼魚和成魚生長速度更快，一般養(yǎng)殖5～7個月即可達(dá)到上市規(guī)格，適合在我國淡水水域采用配合飼料進(jìn)行養(yǎng)殖[2-3]。但目前我國鱸魚養(yǎng)殖主要集中在廣東、江蘇、浙江和四川等地，呈現(xiàn)出分布不均(沿海多內(nèi)地少、鄉(xiāng)村多城市少)的局面，導(dǎo)致產(chǎn)區(qū)賣魚難、銷區(qū)吃魚難，同種水產(chǎn)品在不同地區(qū)價格差異較大[4-5]。同時，鮮活魚和冰鮮魚的售價相差近1倍，鮮活魚和冷凍魚的價差甚至達(dá)幾倍、十幾倍，價格相差懸殊。因此，亟待研究安全有效的大口黑鱸活魚運(yùn)輸技術(shù)。

麻醉運(yùn)輸是一種較為常見的中長途運(yùn)輸方式[6]，而丁香油(主要成分為丁香酚)作為天然藥物，被稱為是最有效的麻醉劑。丁香酚具有溶解性高、麻醉效果好、價格低、使用安全、易于管控等優(yōu)點[7]，目前已被應(yīng)用在鯔魚(Mugilcephalus)[8]、暗紋東方鲀(Takifuguobscurus)[9]、日本黃姑魚(Argyrosomusjaponicus)[10]等品種的生產(chǎn)運(yùn)輸上。

日本、澳大利亞、新西蘭等國已明確規(guī)定丁香酚可作為合法的漁用麻醉劑[7]，我國目前尚未出臺相關(guān)的規(guī)章制度。日本規(guī)定丁香酚藥浴劑量為50～200 μg/mL，休藥期為7 d，最高殘留量(MRL)為50 ng/mL[11]。聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織食品添加劑聯(lián)合專家委員會(JECFA)規(guī)定，丁香酚的每日允許攝入量(ADI)為0～2.5 mg/(kg·bw)[12]?？紤]到丁香酚在使用的過程中會在魚的肌肉和肝臟中富集，可能會帶來食品安全等問題，已有學(xué)者進(jìn)行了相關(guān)的研究。王鵬等[13]抽檢了石斑魚、鱖魚和羅非魚，所檢樣品中異丁香酚殘留均小于6 mg/kg；王彩霞等[14]的研究結(jié)果也表明，經(jīng)過48 h復(fù)蘇后，加州鱸肝臟中的丁香酚可以完全代謝；經(jīng)7 d暫養(yǎng)后，魚肌肉中的丁香酚可完全代謝?？傮w上看，丁香酚類麻醉劑殘留對人體健康未構(gòu)成風(fēng)險。

本研究以“優(yōu)鱸3號”幼魚為對象，開展靜態(tài)麻醉和麻醉運(yùn)輸試驗，探索丁香酚最優(yōu)麻醉質(zhì)量濃度，并檢測麻醉運(yùn)輸過程中幼魚血液和肌肉生理指標(biāo)的變化，為丁香酚在“優(yōu)鱸3號”幼魚運(yùn)輸中的應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗用“優(yōu)鱸3號”幼魚[體質(zhì)量(19.17±1.32) g，體長(11.14±0.26) cm]來自江蘇南京帥豐飼料有限公司。試驗魚暫養(yǎng)在有生物過濾循環(huán)處理系統(tǒng)的恒溫水族箱中，循環(huán)水流速為5 L/min，光照為14 h/d。暫養(yǎng)期間每天投喂2次(8:00—9:00和20:00—21:00)江蘇南京帥豐飼料有限公司生產(chǎn)的大口黑鱸配合飼料。整個暫養(yǎng)和試驗期間水體溶解氧高于5 mg/L，氨氮和亞硝酸鹽質(zhì)量濃度均低于0.01 mg/L。試驗前24 h停止飼喂，試驗期間不投飼。

丁香酚購自上海醫(yī)療器械有限公司。用乙醇作為溶劑制成10 g/L的母液，母液在使用當(dāng)天制備，并保存于深色玻璃瓶中。

1.2 靜水麻醉試驗

麻醉試驗在容量為10 L的水族箱中進(jìn)行，試驗水溫為25 ℃。按丁香酚的質(zhì)量濃度設(shè)置9個梯度組(3、6、9、12、15、18、21、24和27 mg/L)，每個梯度組重復(fù)6尾魚，每尾魚單獨(dú)觀察并只使用1次，每重復(fù)3尾魚更換新鮮溶液。參照Cooke等[15]以及王文豪等[16]的分類標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合“優(yōu)鱸3號”幼魚的實際情況，將麻醉誘導(dǎo)過程分為5個階段，完全復(fù)蘇標(biāo)準(zhǔn)為行為完全恢復(fù)(見表1)。最終得出適宜的靜水麻醉劑質(zhì)量濃度范圍。再綜合運(yùn)輸需求、存活率和殘留代謝，選擇合適的運(yùn)輸麻醉劑質(zhì)量濃度。

表1 麻醉與復(fù)蘇階段“優(yōu)鱸3號”幼魚的行為特征

1.3 模擬麻醉運(yùn)輸試驗

設(shè)置5種運(yùn)輸密度(30、50、70、90、110、130 g/L)，每個密度組設(shè)3個平行，不添加麻醉劑模擬運(yùn)輸10 h，恢復(fù)24 h后統(tǒng)計存活率，得出適合 “優(yōu)鱸3號”幼魚的運(yùn)輸密度。

以上述合適的麻醉劑濃度和運(yùn)輸密度，模擬運(yùn)輸10 h，檢測運(yùn)輸過程中和運(yùn)輸后的水質(zhì)變化以及幼魚血液和肌肉相關(guān)指標(biāo)的變化。試驗設(shè)置2個處理組：試驗組(麻醉+運(yùn)輸)和對照組(無麻醉+運(yùn)輸)，每組設(shè)3個重復(fù)。試驗水溫為25.0 ℃，用氣石微充氣，將整理箱固定于恒溫振蕩器中，以轉(zhuǎn)速70 r/min模擬運(yùn)輸10 h。分別在運(yùn)輸0、2、4、6、8、10 h的時間點取樣。

1.4 水質(zhì)檢測

試驗結(jié)束后，立即采集運(yùn)輸水質(zhì)于50 mL的聚乙烯離心管中，加蓋密封。同時，用便攜式氨氮測定儀測定水體的酸堿度(pH)和氨氮(NH4+-N)質(zhì)量濃度。

1.5 血清指標(biāo)測定

每個重復(fù)隨機(jī)取3尾魚，無抗凝劑尾靜脈取血，合并為1個混合樣，每個處理組共3個血液樣本。全血樣品在4 ℃下靜置12 h，待血液分層后以3 000 r/min離心10 min，收集血清于2 mL離心管中。測定皮質(zhì)醇、乳酸、尿素氮的含量和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性，所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.6 肌肉指標(biāo)測定

每個重復(fù)隨機(jī)取3尾魚，取肌肉組織0.1 g，加入0.9 mL的生理鹽水，冰水浴勻漿，以2 500 r/min離心10 min，取上清液測定蛋白質(zhì)濃度和乳酸含量。稱取5 g去骨去皮的魚肉，加雙蒸水勻漿2 min，定容至100 mL，轉(zhuǎn)入離心管中，以5 000 r/min 離心10 min，過濾，取上清液測定pH。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗所得數(shù)據(jù)均用(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)的方式表示，所有數(shù)據(jù)均用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。利用單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan’s多重比較檢驗法對同一試驗組不同時間點以及不同試驗組同一時間點的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和檢驗分析，設(shè)顯著性水平為0.05。用Origin 8.6軟件繪圖。

2 結(jié)果

2.1 丁香酚對“優(yōu)鱸3號”幼魚的靜水麻醉及復(fù)蘇效果

不同質(zhì)量濃度丁香酚對“優(yōu)鱸3號”幼魚的麻醉及復(fù)蘇效果見表2。由表2可知，質(zhì)量濃度為3～27 mg/L的丁香酚均能使“優(yōu)鱸3號”幼魚進(jìn)入鎮(zhèn)靜期，并且復(fù)蘇率均為100%，質(zhì)量濃度在21～27 mg/L，幼魚進(jìn)入A1(輕度鎮(zhèn)靜期)的時間無顯著性差異(P>0.05)；質(zhì)量濃度6 mg/L的丁香酚能使“優(yōu)鱸3號”幼魚進(jìn)入輕度麻醉期；質(zhì)量濃度9～27 mg/L的丁香酚均能使其進(jìn)入深度麻醉期，且隨著丁香酚濃度的增加，“優(yōu)鱸3號”幼魚進(jìn)入相同麻醉時期的時長縮短，同時完全復(fù)蘇的時間也隨之延長。復(fù)蘇24 h內(nèi)，丁香酚質(zhì)量濃度為24 mg/L和27 mg/L的組“優(yōu)鱸3號”幼魚出現(xiàn)死亡，且死亡率隨著麻醉劑濃度的增加而提高。綜合考慮運(yùn)輸實際需求、成活率和殘留代謝等因素，選擇在“優(yōu)鱸3號”幼魚模擬運(yùn)輸試驗中麻醉劑的質(zhì)量濃度為6 mg/L。

表2 不同質(zhì)量濃度丁香酚對“優(yōu)鱸3號”幼魚的麻醉及復(fù)蘇效果

2.2 “優(yōu)鱸3號”幼魚在不同運(yùn)輸密度下的存活率

不同密度模擬運(yùn)輸后“優(yōu)鱸3號”幼魚的存活率情況見圖1。試驗魚經(jīng)10 h模擬運(yùn)輸后，30～90 g/L密度組的存活率和復(fù)蘇后24 h成活率均為100%；當(dāng)密度達(dá)到110 g/L時，試驗魚出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，且恢復(fù)24 h期間也出現(xiàn)死亡，因此，選擇90 g/L為“優(yōu)鱸3號”幼魚最適宜運(yùn)輸密度。

圖1 不同密度運(yùn)輸后“優(yōu)鱸3號”幼魚的存活率

2.3 模擬麻醉運(yùn)輸中水質(zhì)指標(biāo)的變化

由圖2-a可知，模擬麻醉運(yùn)輸開始時運(yùn)輸箱內(nèi)水體pH約為7.5，前2 h內(nèi)試驗組水體pH的變化不顯著(P>0.05)。隨著運(yùn)輸時長的增加，試驗組和對照組的pH均顯著降低(P<0.05)。模擬運(yùn)輸試驗過程中，試驗組的pH一直高于對照組。運(yùn)輸10 h時對照組的pH最低約為6.6。

由圖2-b可知，在模擬運(yùn)輸開始時水體中氨氮的質(zhì)量濃度均低于0.1 mg/L。隨著運(yùn)輸時長增加，對照組和試驗組水體的氨氮質(zhì)量濃度均顯著上升(P<0.05)，但與對照組相比，麻醉組相同運(yùn)輸時間的氨氮含量有明顯降低 (P<0.05)。

注：不同字母表示同組不同運(yùn)輸時間點的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)；*表示與對照組同一時間點的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。圖2 “優(yōu)鱸3號”幼魚模擬麻醉運(yùn)輸時水質(zhì)變化情況

2.4 模擬麻醉運(yùn)輸過程中血清指標(biāo)變化

由圖3-a可以看出，隨著運(yùn)輸時長的增加，“優(yōu)鱸3號”幼魚血清中的皮質(zhì)醇含量(COR)總體呈先上升再下降的趨勢，其中對照組在運(yùn)輸6 h時達(dá)到峰值，隨后下降，但在運(yùn)輸模擬結(jié)束時依舊顯著高于運(yùn)輸開始時(P<0.05)；麻醉組在運(yùn)輸2 h時即達(dá)到最高值，隨后開始下降，但在運(yùn)輸模擬結(jié)束時依舊顯著高于運(yùn)輸開始時(P<0.05)。在整個模擬運(yùn)輸?shù)倪^程中，除運(yùn)輸4 h時兩個組COR含量無顯著差異外，其余時間點均存在顯著差異(P<0.05)。其中，運(yùn)輸2 h時麻醉組高于對照組。

由圖3-b可以看出，隨著運(yùn)輸時間的延長，“優(yōu)鱸3號”幼魚血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性總體呈上升趨勢，模擬運(yùn)輸結(jié)束時對照組AST活性與運(yùn)輸起始相比提高了4.57倍，麻醉組則提高了3.88倍。在模擬運(yùn)輸?shù)?—6 h，麻醉組AST活性顯著高于對照組(P<0.05)，模擬運(yùn)輸8—10 h，麻醉組AST活性低于對照組，但差異不顯著(P>0.05)。

由圖3-c可以看出，隨著運(yùn)輸時間的延長，“優(yōu)鱸3號”幼魚血清中尿素氮(BUN)的含量有所增加，但是在運(yùn)輸?shù)那? h變化不是非常顯著。模擬運(yùn)輸結(jié)束時對照組的BUN含量與運(yùn)輸起始相比增加了0.74倍，麻醉組增加了0.37倍。在整個模擬運(yùn)輸試驗過程中麻醉組BUN含量均低于對照組，且在運(yùn)輸?shù)?—10 h顯著低于對照組(P<0.05)。

由圖3-d可以看出，隨著運(yùn)輸時間的延長，“優(yōu)鱸3號”幼魚血清中的乳酸(LD)含量顯著增加(P<0.05)。在模擬運(yùn)輸2 h時，對照組LD含量沒有明顯變化(P>0.05)，而麻醉組LD含量顯著增加了(P<0.05)。模擬運(yùn)輸試驗結(jié)束時對照組LD含量與運(yùn)輸起始相比增加了3.27倍，麻醉組增加了2.48倍。在整個模擬運(yùn)輸試驗過程中，麻醉組的LD含量均低于對照組，且在運(yùn)輸?shù)?—10 h顯著低于對照組(P<0.05)。

2.5 模擬麻醉運(yùn)輸過程中肌肉指標(biāo)變化

“優(yōu)鱸3號”幼魚在麻醉模擬運(yùn)輸中肌肉指標(biāo)的變化見圖4?？梢钥闯?，“優(yōu)鱸3號”幼魚在運(yùn)輸過程中肌肉乳酸、pH均發(fā)生了一定程度的變化，二者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。其中對照組乳酸的含量隨著運(yùn)輸時間的延長顯著升高(P<0.05)，在運(yùn)輸10 h時達(dá)到1.95 mmol/(g·prot)，為運(yùn)輸起始時的3.09倍；麻醉組在運(yùn)輸4 h時顯著升高(P<0.05)，直至運(yùn)輸10 h時肌肉乳酸的含量達(dá)到1.36 mmol/(g·prot)，相對初始時升高了1.15倍。模擬運(yùn)輸過程中麻醉組乳酸的積累量均顯著低于對照組(P<0.05)。肌肉pH的變化與乳酸相反，總體呈下降趨勢，且變化顯著(P<0.05)。對照組由最初的7.02下降至6.59，降低了6.21%。麻醉試驗組由起始的7.02下降至6.73，降低了4.19%。運(yùn)輸?shù)倪^程中麻醉組pH均顯著高于對照組(P<0.05)。

注：不同字母表示同組不同運(yùn)輸時間點的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)；*表示與對照組同一時間點的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。圖3 “優(yōu)鱸3號”幼魚在麻醉模擬運(yùn)輸中血液指標(biāo)的變化

3 討論

3.1 丁香酚對“優(yōu)鱸3號”幼魚的麻醉效果

丁香酚作為天然的麻醉劑，自1972年被發(fā)現(xiàn)對魚類有麻醉作用后，國內(nèi)外學(xué)者已對多種魚類進(jìn)行了麻醉試驗，如革胡子鯰(Clariasgariepinus)[17]、斑點叉尾魚回(IetalurusPunetaus)[18]等，均獲得了較好的麻醉效果。從本試驗結(jié)果看，丁香酚能快速達(dá)到麻醉和復(fù)蘇效果，具有較高的時效性。但是麻醉劑量的選擇也是麻醉運(yùn)輸中重要的一環(huán)，麻醉劑濃度過高可能會使魚體出現(xiàn)窒息死亡，降低成活率，例如質(zhì)量濃度66 mg/L的丁香酚使得大西洋鮭死亡率高達(dá)90%[19]；而麻醉劑濃度過低則不能使魚在運(yùn)輸過程中處于鎮(zhèn)靜狀態(tài)。本試驗中，當(dāng)丁香酚質(zhì)量濃度在6～27 mg/L時，“優(yōu)鱸3號”幼魚均能進(jìn)入深度鎮(zhèn)靜和麻醉期。但當(dāng)丁香酚的濃度高于24 mg/L時，幼魚出現(xiàn)死亡。原因可能是丁香酚麻醉濃度過高，過量的丁香酚聚積在魚的肝臟，使得魚類死亡[20]，也可能是過度麻醉降低了魚體的呼吸頻率，導(dǎo)致其動脈中氧分壓降低，呼吸不暢，加上血氧降低、二氧化碳升高，因而魚的血壓和心率發(fā)生變化[21]。另外，王文豪等[16]發(fā)現(xiàn)，16 mg/L的丁香酚能引起體質(zhì)量為130 g的大口黑鱸死亡，這一結(jié)果與本試驗結(jié)果稍有差異，原因可能是相較于普通大口黑鱸，“優(yōu)鱸3號”幼魚對丁香酚的耐受性有所增強(qiáng)，同時也可能與魚體大小、溫度等因素有關(guān)[14]。相似的結(jié)果也在對白魚(Coregonuslavaretus)[22]和大西洋鮭[18]的麻醉試驗中發(fā)現(xiàn)。Marking等[23]認(rèn)為，理想的麻醉劑濃度是3 min內(nèi)能夠使魚麻醉，5 min內(nèi)能夠令其蘇醒。按照此標(biāo)準(zhǔn)，12～18 mg/L的丁香酚麻醉液是“優(yōu)鱸3號”幼魚靜水麻醉的理想麻醉劑濃度。但是，在實際運(yùn)輸生產(chǎn)中還應(yīng)該綜合考慮運(yùn)輸時間、成活率、殘留代謝等因素，因此，在模擬麻醉運(yùn)輸試驗時選取的麻醉劑質(zhì)量濃度為6 mg/L。

圖4 “優(yōu)鱸3號”幼魚麻醉模擬運(yùn)輸中肌肉指標(biāo)的變化

3.2 運(yùn)輸密度

高密度運(yùn)輸可以有效降低運(yùn)輸?shù)某杀?，但是密度過高會使魚苗相互擠壓，從而導(dǎo)致魚受傷甚至死亡。同時高密度運(yùn)輸會引起水體中氨氮、溶解氧和pH的顯著變化，不良的水質(zhì)也會使魚受到傷害，或在運(yùn)輸后出現(xiàn)免疫力降低，發(fā)生病害甚至死亡，這都不利于養(yǎng)殖生產(chǎn)[24-25]。陳旭等[26]研究發(fā)現(xiàn)，隨著尖吻鱸(Latescalcarifer)運(yùn)輸密度的提高，運(yùn)輸水體中氨氮、亞硝酸鹽濃度顯著升高，溶解氧和pH顯著降低。張偉等[27]對大黃魚(Larimichthyscrocea)的運(yùn)輸試驗也得出了類似的結(jié)論，同時發(fā)現(xiàn)，隨著運(yùn)輸密度的增加，幼魚的死亡率也顯著升高，當(dāng)運(yùn)輸密度為8 g/L時，魚的死亡率接近50%。由此可以看出，選擇合適的運(yùn)輸密度在實際生產(chǎn)運(yùn)輸中尤為關(guān)鍵。本試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)“優(yōu)鱸3號”幼魚的密度高于110 g/L時，幼魚出現(xiàn)死亡，且恢復(fù)24 h后仍然出現(xiàn)死亡；王文豪等[16]以130 g/L的密度進(jìn)行大口黑鱸運(yùn)輸，運(yùn)輸后魚的死亡率為80%，恢復(fù)24 h死亡率為60%。綜上，本試驗選取“優(yōu)鱸3號”幼魚的模擬運(yùn)輸密度為90 g/L。

3.3 麻醉運(yùn)輸對水質(zhì)的影響

水體是魚類進(jìn)行氣體交換和離子交換的主要媒介，同時也是代謝魚體廢物的凈化劑。但在魚類的運(yùn)輸中，由于運(yùn)輸時長、容器、運(yùn)輸密度等客觀因素的影響，運(yùn)輸水體的水質(zhì)會劇烈變化，從而影響運(yùn)輸效率和成活率[28-29]。本試驗以90 g/L的運(yùn)輸密度，在25 ℃的運(yùn)輸溫度下，隨著運(yùn)輸時間的延長，運(yùn)輸水體逐漸變得混濁，氨氮含量顯著升高，pH顯著降低。相似的結(jié)果也在翹嘴鲌(Culteralburnus)[29]、倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)[30]等運(yùn)輸中發(fā)現(xiàn)。原因可能是運(yùn)輸震動、擠壓等脅迫使得魚類代謝速率加快，繼而耗氧率增加，CO2和氨氮等代謝廢物的排泄量也增加。而CO2溶于水中又會導(dǎo)致水體pH降低[26]，當(dāng)pH偏低時，水體中亞硝酸鹽、硫化氫的毒性增強(qiáng)。同時，CO2在血漿中富集會導(dǎo)致血漿酸化，降低血液的攜氧能力和血紅蛋白對氧氣的親和力[31]。另一方面，當(dāng)水體中氨氮含量過高時，還會抑制魚體向外排氨，從而導(dǎo)致魚體血液中氨氮含量顯著升高，血液的載氧能力降低，使魚體缺氧而死[32]。本試驗也發(fā)現(xiàn)添加丁香酚的麻醉組水體中氨氮含量顯著低于對照組，pH顯著高于對照組，原因可能是丁香酚使幼魚處于鎮(zhèn)靜狀態(tài)。在這種狀態(tài)下，幼魚活動量減少，相互之間的摩擦擠壓會減少，同時呼吸頻率有所減弱，CO2和氨氮等代謝廢物的排泄速率也會隨之減弱。值得一提的是，王利娟[33]在用丁香油麻醉運(yùn)輸大口黑鱸的試驗中發(fā)現(xiàn)，隨著運(yùn)輸時間的增加，因而水體pH不斷升高，這與本試驗的結(jié)果不一致。原因可能是水體中氨氮的含量還沒有達(dá)到抑制魚體氨氮排放的濃度，魚體仍然可以持續(xù)排氨，因而水體pH持續(xù)升高；也可能是運(yùn)輸時長的原因。有研究表明，隨著運(yùn)輸時間的增加，魚體氨的排泄速率會明顯上升[23]。

3.4 麻醉運(yùn)輸對幼魚血液指標(biāo)的影響

運(yùn)輸過程中的長時間持續(xù)震蕩搖晃，會造成魚類機(jī)體較大程度的應(yīng)激和其他繼發(fā)損傷，這些首先會表現(xiàn)在生理指標(biāo)的變化上。皮質(zhì)醇(COR)、尿素氮(BUN)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和乳酸(LD)是最直接的指標(biāo)，被廣泛用于評價魚體健康狀況及對環(huán)境的適應(yīng)情況[24，34]。

皮質(zhì)醇(COR)是腎上腺在應(yīng)激反應(yīng)中產(chǎn)生的類激素，作為激素反應(yīng)鏈的最后一項激素，其變化可以作為生物體應(yīng)激狀態(tài)的重要指標(biāo)[23]。大量的研究表明，在溫度、鹽度及運(yùn)輸擠壓等各種脅迫應(yīng)激下，都會引起COR的升高，且COR隨著應(yīng)激強(qiáng)度的增加而上升[35-36]。例如，褐牙鲆在鹽度為3的條件下脅迫1 d后,其血漿COR顯著升高[35]；以8 g/L的密度運(yùn)輸大黃魚幼魚，運(yùn)輸后COR的含量為運(yùn)輸前的4倍多[27]；以質(zhì)量濃度5 mg/L的丁香酚麻醉卵形鯧鲹魚苗，魚苗的血清COR顯著升高[37]。本試驗中，麻醉組和對照組的COR含量均顯著升高，這說明在運(yùn)輸過程中魚體因為震動搖晃產(chǎn)生了應(yīng)激。值得關(guān)注的是，麻醉組COR達(dá)到峰值的時間要早于對照組，原因可能是丁香酚對魚體有一定的刺激作用，但是隨著運(yùn)輸時間的延長，COR均有所下降，可能是魚體適應(yīng)了麻醉劑的刺激，同時麻醉劑降低了魚體對外界的應(yīng)激。

谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)主要存在于肝臟組織中，是肝臟中連接糖、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)代謝的重要酶。正常情況下，機(jī)體血清中AST活性較低且相對穩(wěn)定，但當(dāng)組織器官受損時，AST就會大量釋放到血液中，使血清AST活性增強(qiáng)，因此AST可以作為肝臟受損的指標(biāo)[34,38]。本試驗結(jié)果表明，在開始運(yùn)輸?shù)?—6 h，麻醉組的AST活性顯著高于對照組，這與王文豪等[16]采用50 mg/L MS-222和10 mg/L丁香酚麻醉運(yùn)輸大口黑鱸幼魚的結(jié)果類似，推測可能是丁香酚會引起肝臟方面的問題[20]。本試驗運(yùn)輸結(jié)束時，對照組和麻醉組的AST活性均顯著升高，相似的結(jié)果也在斑點叉尾魚回[39]、鯽魚[40]的保活運(yùn)輸中發(fā)現(xiàn)。原因可能是麻醉劑對幼魚的肝臟產(chǎn)生了影響，幼魚為了應(yīng)對丁香酚麻醉的脅迫，體內(nèi)合成釋放更多的酶，從而導(dǎo)致AST活性升高，也可能是運(yùn)輸水體中氨氮濃度升高，對魚的肝臟結(jié)構(gòu)損傷較大。

尿素氮(BUN)是反映腎功能代謝的重要指標(biāo)[14]。本試驗中，運(yùn)輸前期對照組和麻醉組BUN含量的變化并不顯著，這與大口黑鱸[14,33]的運(yùn)輸結(jié)果相似，表明在短途運(yùn)輸時，魚體會自我調(diào)節(jié)，應(yīng)對運(yùn)輸過程的各種脅迫。但是隨著運(yùn)輸時間的延長，BUN的含量顯著升高。原因可能是魚體新陳代謝使得水體中氨氮濃度過高，從而抑制了魚類排氨，導(dǎo)致魚體內(nèi)BUN升高；也可能是長時間的震動刺激導(dǎo)致魚體的蛋白質(zhì)代謝異常，其腎功能出現(xiàn)障礙或受損部分[33]。

乳酸(LD)是魚體肌肉無氧代謝產(chǎn)物，對機(jī)體有一定危害。在本試驗中，運(yùn)輸開始2 h時對照組LD含量無明顯變化，而麻醉組的LD含量顯著增加(P<0.05)，原因可能是丁香酚對其產(chǎn)生了一定的刺激[41]，導(dǎo)致魚體血漿乳酸濃度升高。運(yùn)輸結(jié)束時對照組和麻醉組血清和肌肉中的LD含量都顯著升高，但麻醉組的LD含量低于對照組，可能是震動等因素導(dǎo)致魚體肌肉無氧代謝顯著增加。如銀鯧[42]在經(jīng)過12 h運(yùn)輸后，其血清和肌肉中的乳酸含量在運(yùn)輸脅迫后均顯著升高。

3.5 麻醉運(yùn)輸對幼魚肌肉指標(biāo)的影響

大量的研究表明，不論是無水保活運(yùn)輸還是有水?；钸\(yùn)輸均會導(dǎo)致魚類肌肉pH降低[34,43]。本試驗結(jié)果也顯示，對照組和麻醉組肌肉的pH均隨著運(yùn)輸時間的延長而降低，乳酸含量則增加了，這與王彩霞等[14]、王利娟[33]對大口黑鱸的研究結(jié)果一致。引起肌肉pH下降的主要原因是無氧代謝增加，肌肉組織中的糖原發(fā)生無氧酵解而生成大量乳酸，同時水體中氨氮脅迫也使肌肉pH下降。隨著pH下降，魚體就會出現(xiàn)肌肉硬度降低、肉質(zhì)松散等問題。但是王彩霞等[14]發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過一段時間的暫養(yǎng)，魚體肌肉可恢復(fù)到正常水平，原因可能是魚體內(nèi)的乳酸被乳酸脫氫酶催化轉(zhuǎn)化代謝掉了。也有研究認(rèn)為，在低溫條件下進(jìn)行運(yùn)輸，魚體呼吸強(qiáng)度降低，不會積累大量乳酸而引起pH快速下降[34]。因此，在活魚運(yùn)輸中要盡可能降低運(yùn)輸溫度。同時在運(yùn)輸結(jié)束后可暫養(yǎng)幾天，待魚體恢復(fù)后再上市，這樣可以保證魚肉的品質(zhì)，同時也使丁香酚的殘留物盡可能代謝掉，保障食品安全。

4 結(jié)論

在本試驗中，隨著丁香酚質(zhì)量濃度的升高，幼魚進(jìn)入麻醉期的時間縮短，復(fù)蘇時間延長，12～18 mg/L的丁香酚是“優(yōu)鱸3號”幼魚理想的靜水麻醉液。但綜合考慮運(yùn)輸需求、魚的存活率和殘留代謝等因素，模擬麻醉運(yùn)輸中采用的丁香酚麻醉液的質(zhì)量濃度以6 mg/L為宜。在90 g/L的運(yùn)輸密度下模擬麻醉運(yùn)輸10 h，運(yùn)輸水質(zhì)會惡化，也會使魚體產(chǎn)生一定的應(yīng)激反應(yīng)，血液中皮質(zhì)醇(COR)、尿素氮(BUN)和乳酸(LD)含量以及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性升高，肌肉中pH降低，乳酸(LD)升高。但是使用丁香酚麻醉液可以使相關(guān)指標(biāo)的變化程度減弱，有利于減輕“優(yōu)鱸3號”的應(yīng)激反應(yīng)。