超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法直接同時(shí)測(cè)定牛乳中草銨膦及其代謝物

張立佳，劉麗君，汪 洋，文 靜，莫 楠，謝瑞龍，呂志勇，李翠枝

（內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110）

草銨膦是我國(guó)允許使用的除草劑。中國(guó)作為全球農(nóng)業(yè)大國(guó)，草銨膦轉(zhuǎn)基因技術(shù)推廣和應(yīng)用，已經(jīng)成為全球第二大轉(zhuǎn)基因作物除草劑[1]。草銨膦是屬于新型廣譜長(zhǎng)效觸殺型化學(xué)除草劑，具有化學(xué)活性高、低毒、無(wú)污染、易降解、對(duì)作物安全、環(huán)境友好和除草快捷等特點(diǎn)[2]。盡管草銨膦是屬于廣譜非持久性農(nóng)藥，但如果放任其大量的、無(wú)約束的長(zhǎng)期使用，則仍是有一定可能在農(nóng)作物上產(chǎn)生殘留，再通過(guò)食物鏈進(jìn)入人類的餐桌，影響人體健康。草銨膦也可以在動(dòng)物體內(nèi)代謝為3-(甲基膦基)丙酸和N-乙?；蒌@膦。大量研究發(fā)現(xiàn)吸入低劑量的草銨膦可以傷害新生兒和動(dòng)物幼崽大腦的發(fā)育，高劑量可以導(dǎo)致過(guò)敏、高燒、精神紊亂、流涕、抽搐等中毒癥狀，此外，該藥物的殘留可以升級(jí)為食品安全事件，擾亂國(guó)際進(jìn)出口貿(mào)易[3-4]。世界各國(guó)已制定了草銨膦最大殘留限量的規(guī)定，美國(guó)和日本限量值為0.05～6.00 mg/kg[5]，加拿大限量值為0.10～2.00 mg/kg[6]，國(guó)際食品法典規(guī)定0.02～8.00 mg/kg[7]，歐盟規(guī)定0.10～5.00 mg/kg[8]，GB 2763—2021《食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定為0.01～0.50 mg/kg，其中牛乳中最大殘留限量為0.02 mg/kg[9]，并定義以草銨膦及其3-(甲基膦基)丙酸和N-乙?；蒌@膦2 種代謝物之和計(jì)。隨著牛乳需求量日益增加，為防止草銨膦的濫用，保證牛乳的品質(zhì)，真正實(shí)現(xiàn)乳品行業(yè)安全監(jiān)控，亟需建立牛乳中草銨膦及其代謝物的檢測(cè)方法。

目前，國(guó)內(nèi)外報(bào)道的主要方法有：離子色譜法[10-12]、氣相色譜-質(zhì)譜法[13-15]、毛細(xì)管電泳法[16]和液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法[17-28]。離子色譜法存在基質(zhì)干擾較大，無(wú)法有效的分離，靈敏度無(wú)法滿足限量要求等缺點(diǎn)；氣相色譜-質(zhì)譜法存在前處理繁瑣，衍生反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)；毛細(xì)管電泳法對(duì)于測(cè)試液的凈化效果要求較高，否則容易堵塞毛細(xì)管損壞儀器，同時(shí)檢測(cè)器靈敏度低，不適合復(fù)雜基質(zhì)的痕量分析；液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法在定性和定量上均具有一定的優(yōu)勢(shì)，但是仍受限于色譜分離能力和保留能力以及特殊基質(zhì)的前處理技術(shù)。我國(guó)尚未發(fā)布有關(guān)牛乳中草銨膦及其代謝物檢測(cè)方法的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道，因而急需建立一種實(shí)用且快速檢測(cè)牛乳中草銨膦及其代謝物的分析方法，滿足食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的限量規(guī)定以及行業(yè)的訴求。本研究采用多壁碳納米管（multi-walled carbon nanotube，MWCNTs）吸附劑作為前處理凈化填料，選用一款新型的陰離子農(nóng)殘專用色譜柱，旨在開發(fā)一種同時(shí)測(cè)定牛乳中草銨膦及其2 種代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。圖1為草銨膦與2 種代謝物的結(jié)構(gòu)式。

圖1 草銨膦及其代謝物的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formulas of glufosinate ammonium and its two metabolites

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品（CAS 號(hào)77182-82-2、分子式C5H15N2O4P、純度≥99%）、3-(甲基膦基)丙酸標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)15090-23-0、分子式C4H9O4P、純度≥99%）N-乙酰基草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)73634-73-8、分子式C7H14NO5P、純度≥94%） 美國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；草銨膦-D3鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)1323254-05-2、分子式C5H10D3N2O4P、純度≥99%） 美國(guó)TRC公司；C18SPE小柱（500 mg，6 mL）、石墨化炭黑（ENVICarb）SPE小柱（500 mg，6 mL） 美國(guó)默克公司；PRIME HLB SPE小柱（150 mg，3 mL） 美國(guó)Waters公司；MWCNTs（粒徑范圍10～20 nm，顆粒物長(zhǎng)度5～15 μm，比表面積（225±25）m2/g） 天津博納艾杰爾科技有限公司；PSA和C18填料 美國(guó)西格瑪公司；一次性針式過(guò)濾器（0.2 μm，尼龍），乙腈、甲酸、甲酸銨（色譜級(jí)） 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；Milli-Q純水由實(shí)驗(yàn)室制備。

1.2 儀器與設(shè)備

ACQUITY UPLC TQ-S超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀、Anionic Polar Pesticide色譜柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）、BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、BEH HILIC色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm） 美國(guó)Waters公司；MS 3 basic旋渦振蕩器 德國(guó)IKA公司；Sorvall Biofuge Stratos高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Thermo Fisher公司；Millipore Q純水機(jī) 美國(guó)Millipore公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

草銨膦標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg/mL）：稱取草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg于100 mL塑料瓶容量瓶中，加入適量的超純水超聲助溶5 min，用水定容至刻度。

草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg/mL）：稱取草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)品1.00 mg于10 mL塑料瓶容量瓶中，用超純水定容至刻度。

N-乙?；蒌@膦標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg/mL）：稱取N-乙酰基草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg于100 mL塑料瓶容量瓶中，用超純水定容至刻度。

3-(甲基膦基)丙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg/mL）：稱取3-(甲基膦基)丙酸標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg于100 mL塑料瓶容量瓶中，用超純水定容至刻度。

草銨膦混標(biāo)中間液（I）（1 μg/mL）的配制：分別量取草銨膦、3-(甲基膦基)丙酸和N-乙?；蒌@膦標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.25 mL到25 mL塑料容量瓶中，用超純水定容至刻度。

草銨膦混標(biāo)中間液（II）（100 ng/mL）的配制：量取草銨膦混標(biāo)中間液（I）2.5 mL到25 mL塑料容量瓶中，用超純水定容至刻度。

草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)中間液（I）（1 μg/mL）的配制：量取草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.25 mL到25 mL塑料容量瓶中，用超純水定容至刻度。

草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)中間液（II）（100 ng/mL）的配制：量取草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)中間液（I）2.5 mL到25 mL塑料容量瓶中，用超純水定容至刻度。

以上試劑需要存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中，0～4 ℃，避光保存。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：選擇6 份陰性樣品，不加草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)中間液，其余步驟同1.3.3節(jié)樣品前處理，制備空白基質(zhì)溶液。精密量取草銨膦混標(biāo)中間液（II）（100 ng/mL）0、10、20、50、100、200、500 μL至于不同的進(jìn)樣小瓶中，分別加入草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)中間液（II）（100 ng/mL）100 μL，分別用空白基質(zhì)溶液稀釋，配制成質(zhì)量濃度依次為0、1、2、5、1、20、50 ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度為10 ng/mL。溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線選用50%甲醇溶液稀釋，其余步驟同空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制。

基質(zhì)效應(yīng)按下式[29-31]計(jì)算：

1.3.3 樣品前處理

稱取牛乳5 g（精確到0.0001 g），置于30 mL塑料離心管中，加入150 μL草銨膦-D3標(biāo)準(zhǔn)中間液（I）（1 μg/mL）混勻，靜置10 min，準(zhǔn)確加入10 mL甲醇，渦旋振蕩提取10 min，0～4 ℃ 低溫冷凍離心（15000 r/min）5 min，取5 mL上清液轉(zhuǎn)移到另外一支離心管中，加入10 mg MWCNTs填料凈化，渦旋振蕩10 min，0～4 ℃ 低溫冷凍離心（15000 r/min）5 min。取1.0 mL上清液于1.5 mL離心管中，0～4 ℃低溫冷凍離心（20000 r/min）5 min，取上清液過(guò)0.22 μm尼龍針式過(guò)濾器于進(jìn)樣小瓶，待測(cè)定。

1.3.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

1.3.4.1 液相色譜條件

Anionic Polar Pesticide色譜柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）；柱溫50 ℃；進(jìn)樣量10 μL；流動(dòng)相：0.9%甲酸溶液（A）和0.9%甲酸-乙腈溶液（B）；流速0.5 mL/min；線性洗脫梯度：0～3 min，10%～80% A、90%～20% B；3～5 min，80% A、20% B；5～8.0 min，10% A、90% B。

1.3.4.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源；數(shù)據(jù)采集采用負(fù)離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式；脫溶劑溫度600 ℃；離子源溫度150 ℃，脫溶劑流量1000 L/h；草銨膦及其代謝物的離子對(duì)等質(zhì)譜參數(shù)如表1所示。

表1 草銨膦及其代謝物質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Mass spectrometric parameters of glufosinate ammonium and its metabolites

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方法的選擇

2.1.1 提取試劑的選擇

由于生乳中含有大量的蛋白質(zhì)，需要去除蛋白，才能進(jìn)質(zhì)譜檢測(cè)，而草銨膦及其代謝物的極性較強(qiáng)，易溶于水、甲醇、乙腈等，同時(shí)有機(jī)溶劑可以使生乳中的蛋白質(zhì)變性發(fā)生沉淀，因此考察甲醇和乙腈作提取試劑進(jìn)行分析。結(jié)果表明：當(dāng)選擇乙腈作為提取試劑，凈化液體中牛乳蛋白質(zhì)去除的效果較好，但是草銨膦及其代謝物的提取效率不足50%，而當(dāng)選擇加入同等體積的甲醇作為提取試劑，牛乳蛋白質(zhì)去除效果不如乙腈作為提取試劑，但是提取效率可以達(dá)到90%以上，因此選擇甲醇作為提取試劑。

2.1.2 凈化方法的選擇

考察C18SPE小柱（500 mg，6 mL）、石墨化炭黑SPE小柱（500 mg，6 mL）、PRiME HLB SPE小柱（150 mg，3 mL）以及不過(guò)SPE小柱凈化效果。結(jié)果表明，3 種SPE小柱凈化后，批次間的重復(fù)性較差，重復(fù)性均大于20%，不符合方法重復(fù)性規(guī)定，只有不經(jīng)過(guò)SPE小柱凈化的重復(fù)性小于10%，需要繼續(xù)優(yōu)化。再次考察不過(guò)柱直接加入填料的凈化效果，分別加入相同質(zhì)量的C18填料、PSA填料、MWCNTs填料以及不加填料對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果表明，草銨膦及其2 種代謝物在3 種填料中凈化效果均優(yōu)于不加填料，其中MWCNTs絕對(duì)回收率最高，說(shuō)明去除基質(zhì)的能力最佳。MWCNTs是基于多個(gè)石墨烯片同軸卷曲結(jié)合優(yōu)秀的納米技術(shù)形成的中空管狀立體結(jié)構(gòu)，每層納米管壁通過(guò)sp2與周圍3 個(gè)碳原子結(jié)合，具有較大的比表面積；MWCNTs吸附機(jī)理主要集中在π-π作用、疏水作用、H鍵作用、靜電作用力等，與非極性有機(jī)化合物和多核芳香化合物相作用，而與極性較強(qiáng)的化合物不會(huì)產(chǎn)生吸附作用；牛乳中脂肪等非極性化合物含量較高，樣品基質(zhì)中含有高含量的脂肪會(huì)增加質(zhì)譜電噴霧電離源的表面張力，降低目標(biāo)物的霧化效率，增強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，影響儀器的靈敏度以及數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，與文獻(xiàn)[32-33]中MWCNTs吸附非極性雜質(zhì)的效果優(yōu)于PSA結(jié)論一致。因此，選擇MWCNTs作為凈化填料，見圖2。同時(shí)，對(duì)MWCNTs添加量進(jìn)行優(yōu)化，考察5、10、15、20 mg不同添加量，其中5 mg回收率最低，其他不同添加量并無(wú)明顯差異，因此，選擇最小的加入量10 mg。此外。比對(duì)凈化后的液體不離心和高速低溫離心之間的差異。結(jié)果表明，凈化后的液體不離心較渾濁，不適合精密儀器檢測(cè)，經(jīng)高速低溫離心后較澄清，可以有效去除油脂以及殘留蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。因此，凈化后的液體增加高速低溫離心凈化步驟。

圖2 不同凈化填料優(yōu)化Fig.2 Effect of different column fillers on the recoveries of glufosinate ammonium and its metabolites

2.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

草銨膦及其代謝物均屬于極性較強(qiáng)的酸性化合物，適合在質(zhì)譜的負(fù)離子模式下進(jìn)行掃描分析。各目標(biāo)化合物工作液需要使用50%甲醇溶液稀釋，提高目標(biāo)化合物在儀器上的靈敏度。通過(guò)質(zhì)譜端的蠕動(dòng)泵注入一定濃度的稀釋后標(biāo)準(zhǔn)溶液，在質(zhì)譜軟件的調(diào)諧界面優(yōu)化質(zhì)譜參數(shù)，如電壓、溫度、氣體流速等質(zhì)譜參數(shù)，得到質(zhì)譜條件，選擇2 個(gè)響應(yīng)較強(qiáng)、無(wú)干擾的目標(biāo)物特征離子對(duì)，用于定性和定量分析。

2.3 色譜條件優(yōu)化

2.3.1 色譜柱的選擇

考察BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、BEH HILIC色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）和Anionic Polar Pesticide色譜柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）。結(jié)果表明，BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）目標(biāo)峰保留能力差，不適合草銨膦及其代謝物的分析；BEH HILIC色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）存在靈敏度低、色譜峰拖尾，且無(wú)法實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物與基質(zhì)的有效分離，因此也不適用于草銨膦及其代謝物的分析；Anionic Polar Pesticide色譜柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）是在BEH HILIC基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，結(jié)合WAX（陰離子交換）功能的一款新型的用于分析陰離子農(nóng)殘色譜柱，使該色譜柱對(duì)于草銨膦及其代謝物均具有優(yōu)秀的保留特性和選擇性。通過(guò)對(duì)Anionic Polar Pesticide色譜柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）條件的優(yōu)化，可實(shí)現(xiàn)對(duì)草銨膦及其代謝物N-乙?；蒌@膦、3-(甲基膦基)丙酸的分離，經(jīng)過(guò)連續(xù)數(shù)日大量樣品的檢測(cè)，草銨膦及其代謝物N-乙?；蒌@膦、3-(甲基膦基)丙酸出峰時(shí)間較穩(wěn)定，色譜峰較好，受基質(zhì)干擾小，靈敏度高，滿足牛乳中草銨膦及其代謝物檢測(cè)分析。

2.3.2 液相色譜條件的優(yōu)化

考察3 種流動(dòng)相體系，分別為水-乙腈（A）、0.9%甲酸-乙腈（B）、0.9%甲酸-0.9%甲酸乙腈（C）。結(jié)果表明，通過(guò)對(duì)水-乙腈（A）流動(dòng)相體系優(yōu)化色譜梯度，目標(biāo)物的保留能力較差，并未獲得較好的色譜峰形；通過(guò)對(duì)0.9%甲酸-乙腈（B）流動(dòng)相體系優(yōu)化色譜梯度，草銨膦色譜峰形得到改善，但是草銨膦的2 個(gè)代謝物并未獲得較好的色譜峰形；通過(guò)對(duì)0.9%甲酸-0.9%甲酸乙腈（C）流動(dòng)相體系優(yōu)化色譜梯度，草銨膦及其代謝物均獲得較好的色譜峰形。此外，對(duì)流動(dòng)相體系中的甲酸含量也進(jìn)行優(yōu)化，當(dāng)體系中甲酸體積分?jǐn)?shù)低于0.9%，均無(wú)法獲得較好色譜峰形，當(dāng)系統(tǒng)中甲酸體積分?jǐn)?shù)大于0.9%，目標(biāo)化合物靈敏度和色譜峰形均未有顯著提升，因此選擇加入0.9%甲酸。同時(shí)對(duì)柱溫也進(jìn)行優(yōu)化，分別考察35、40、45、50、55 ℃，當(dāng)溫度升高到50 ℃，草銨膦及其代謝物峰形均得到改善，并且靈敏度也得到顯著提升，當(dāng)柱溫升高到55 ℃，化合物的靈敏度略有下降。因此，柱溫定為50 ℃，見圖3。

圖3 草銨膦及其代謝物離子流色譜圖Fig.3 Total ion current chromatograms of glufosinate ammonium and its metabolites

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法實(shí)現(xiàn)基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)估分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線法優(yōu)于單點(diǎn)或者多個(gè)點(diǎn)單獨(dú)比較基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)，更具有統(tǒng)計(jì)意義和代表性。溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線A：用甲醇溶液（1∶2，V/V）稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為0、1、2、5、10、20、50 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液；空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線B：用陰性樣品得到空白基質(zhì)溶液，配制成質(zhì)量濃度與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線A一致的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。通過(guò)空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線B斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線A斜率比值計(jì)算：草銨膦、3-(甲基膦基)丙酸和N-乙酰基草銨膦的基質(zhì)效應(yīng)分別為78%、86%和81%。結(jié)果表明，3 個(gè)化合物的基質(zhì)效應(yīng)均為抑制，而草銨膦基質(zhì)抑制效應(yīng)略大，為提高草銨膦檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和消除基質(zhì)效應(yīng)，草銨膦采用同位素內(nèi)標(biāo)法定量，并配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行校準(zhǔn)。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限結(jié)果

由表2可知，草銨膦及其代謝物添加量為5～20、10～40 μg/kg和10～40 μg/kg時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99，線性相關(guān)性良好；檢出限為2.5、5.0 μg/kg和5.0 μg/kg（以RSN=3確定檢出限），定量限分別為5、10.0 μg/kg和10.0 μg/kg（以RSN=10確定定量限），可以滿足分析的需要。

表2 草銨膦及其代謝物的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限Table 2 Linear ranges,linear equations,correlation coefficients,and limits of detection and quantification of glufosinate ammonium and its metabolites

2.6 準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

選取空白樣品，進(jìn)行低、中、高3 個(gè)水平分別6 個(gè)平行進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD），結(jié)果見表3。研究表明，回收率范圍為79.35%～101.80%，RSD為1.15%～8.63%之間，均有良好的準(zhǔn)確度和精密度，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

表3 加標(biāo)回收率和RSDTable 3 Recoveries and relative standard deviations for spiked samples

2.7 實(shí)際樣品測(cè)定

利用本研究建立的方法對(duì)100 批次不同牧場(chǎng)原奶進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出草銨膦及其代謝物。

3 結(jié)論

采用新穎的MWCNTs吸附材料，結(jié)合一款新型的陰離子農(nóng)殘專用色譜柱，建立同時(shí)檢測(cè)牛乳中草銨膦及其代謝物殘留量檢測(cè)方法。牛乳中草銨膦及其代謝物3-(甲基膦基)丙酸和N-乙?；蒌@膦的檢出限分別為2.5、5.0 μg/kg和5.0 μg/kg，定量限為5.0、10.0 μg/kg和10.0 μg/kg，分別在5、10、20 μg/kg，10、20、40 μg/kg和10、20、40 μg/kg，3 個(gè)不同質(zhì)量濃度水平下的加標(biāo)回收率范圍為79.35%～101.80%，RSD為1.15%～8.63%（n=6）；該方法操作便捷、色譜條件穩(wěn)定、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于牛乳中草銨膦及其代謝物3-(甲基膦基)丙酸和N-乙?；蒌@膦殘留量檢測(cè)。