豬繁殖與呼吸綜合征病毒北美經典株感染導致仔豬腹瀉的診斷、治療

曹禮靜 ，張立武

（1.重慶市榮昌區(qū)職業(yè)教育中心，重慶 榮昌 402460；2.重慶三杰眾鑫生物工程有限公司，重慶 榮昌 402460）

0 前言

在實際生產中，腹瀉是引起仔豬死亡的主要原因，飼養(yǎng)管理不善、細菌、病毒、寄生蟲感染等均能引起仔豬腹瀉。仔豬腹瀉是多因一果，如無實驗室檢測確診病因和采取針對性的治療方案，將造成較高死亡率。2022年6月，四川省南充市某養(yǎng)殖場外購27日齡仔豬1356頭，該批仔豬在進場后6 d開始零星發(fā)病，主要臨床癥狀為消瘦、精神沉郁、發(fā)燒、食欲減退、拉稀糊樣至水狀糞便、被毛被糞便污染（圖1），該場用多西環(huán)素、甲硝唑、黃芪多糖中藥提取物等藥物拌料給藥治療5 d無效并迅速波及全群，發(fā)病后4 d開始出現(xiàn)死亡病例，至發(fā)病后9 d，死亡仔豬293頭，死亡仔豬消瘦、剖檢見腸系膜和腹股溝淋巴結腫大以及間質性肺炎。發(fā)病后10 d，該豬場送病料至作者單位，經對常見致豬腹瀉病原實驗室檢測，確診致病病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒北美經典株。進行實驗室診斷期間（發(fā)病后10-11 d），又新增死亡仔豬38頭。于發(fā)病12 d后根據(jù)實驗室診斷結果，采取針對性治療，治療后5 d，全群仔豬痊愈，治療期間僅死亡17頭重癥病豬，現(xiàn)報道如下，供參考。

圖1 發(fā)病仔豬

1 材料與方法

1.1 血清與病料

用一次性無菌注射器經前腔靜脈隨機采病豬血液12份，采血量3-5 mL/頭，轉入滅菌離心管中密封，于4℃冷藏2 h后，于4℃條件下3 000 rpm離心25 min，吸取上層血清，用滅菌離心管盛裝、標記；采集死亡豬肺臟和腸道內容物，各取樣3頭，用采樣袋盛裝、標記。上述病料于-20℃冷凍，加冰袋、用泡沫盒密封后送樣檢測。

1.2 致病性大腸桿菌分離鑒定

將腸道內容物用滅菌生理鹽水按質量體積比1:5稀釋，取適量分別在LB固體培養(yǎng)平皿和麥康凱平皿上劃線，37℃培養(yǎng)24 h，取生長的單菌落分別進行革蘭氏染色鏡檢、生化鑒定和與致病性大腸桿菌O25K19、O78K80、O138因子血清進行凝集試驗，判斷是否為致病性大腸桿菌。

1.3 血清抗體檢測

病豬血清樣品12份，分別用豬偽狂犬病毒gE抗體ELISA檢測試劑盒、豬偽狂犬病毒gB抗體ELISA檢測試劑盒、豬圓環(huán)病毒抗體ELISA檢測試劑盒、豬繁殖與綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒，按試劑盒操作說明，檢測相應抗體滴度。

1.4 致仔豬腹瀉主要病毒檢測

取死亡豬肺臟3份，按《SN/T 1446-2010豬傳染性胃腸炎檢疫規(guī)范》、《SN/T 1699-2017豬流行性腹瀉檢疫技術規(guī)范》、《SN/T 5196-2020豬輪狀病毒感染檢疫技術規(guī)范》、《GB/T 35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法》，對每份病料分別進行上述4種病毒的檢測，檢測用儀器為熒光定量PCR儀Archimed-X4，檢測用試劑盒生產廠家/批號為全式金/Q20126。

豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒判定：在陰陽性對照成立條件下，F(xiàn)AM通道CT值≤ 35，且具有典型的S型擴增曲線，判為豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒核酸陽性；35＜FAM通道CT值≤40，判為可疑；FAM通道CT值＞40或無CT值，判為陰性。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒判定：在陰陽性對照成立條件下，F(xiàn)AM通道CT值≤35，且具有典型的S型擴增曲線，判為豬繁殖與呼吸綜合征病毒北美經典株核酸陽性；VIC通道CT值≤ 35，且具有典型的S型擴增曲線，判為豬繁殖與呼吸綜合征病毒高致病變異株核酸陽性；35＜FAM/VIC通道CT值≤ 40，判為可疑；FAM/VIC通道無CT值，判為陰性。

1.5 發(fā)病仔豬治療

根據(jù)上述檢測結果，制定相應的治療方案如下：（1）帶豬對圈舍用聚維酮碘溶液消毒2 h后，將全群病豬轉移至另外一棟經消毒處理的空置保育舍，每個保育床約20頭，加強飼養(yǎng)管理（圈舍每日消毒2次、清掃1次，圈舍通道口搭建臨時紫外線消毒室、設消毒腳墊）；（2）在飼料中按說明書用量添加泰樂菌素和強力霉素連續(xù)飼喂5 d控制細菌繼發(fā)感染；（3）全群豬肌注轉移因子2 mL+豬干擾素α30萬U/頭，每天1次，連用3 d；（4）對個別發(fā)燒超過40℃的豬肌注30%安乃近注射液5 mL/頭，僅用1次；（5）用溫的補液鹽水按體積質量比3:1稀釋治療仔豬腹瀉中藥散（重慶三杰眾鑫生物工程有限公司研制），以治療仔豬腹瀉中藥散質量計，全群病豬灌服8-10 g/頭，每天1次，連用3 d。

2 結果

2.1 致病性大腸桿菌分離鑒定

3份死亡豬腸道內容物在LB固體培養(yǎng)平皿和麥康凱平皿上培養(yǎng)，生長的單菌落經革蘭氏染色鏡檢、生化鑒定和致病性大腸桿菌O25K19、O78K80、O138因子血清凝集試驗，排除了致病性大腸桿菌。

2.2 血清抗體檢測

12份病豬血清樣品的豬偽狂犬病毒gE抗體、豬偽狂犬病毒gB抗體、豬圓環(huán)病毒抗體、豬繁殖與綜合征病毒抗體結果見表1。結果說明該批仔豬的偽狂犬病毒陰性，但偽狂犬病毒抗體陽性率偏低，存在被感染風險；豬圓環(huán)病毒抗體陽性率較高，可抵御豬圓環(huán)病毒感染；豬繁殖與綜合征病毒抗體陽性率高且離散度大，提示該抗體的產生可能來源于豬繁殖與綜合征病毒野毒感染而非疫苗接種，但有待于豬繁殖與綜合征病毒核酸檢測的進一步確認。

表1 抗體檢測結果

2.3 致仔豬腹瀉主要病毒檢測

3份死亡豬肺臟的豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒高致病變異株均為陰性，豬繁殖與呼吸綜合征病毒北美經典株均為陽性（表2）。

表2 熒光定量PCR檢測結果

2.4 發(fā)病仔豬治療

開始治療前，剩余豬的數(shù)量是1 025頭，全群豬精神沉郁、水樣腹瀉、采食量。與治療當日比較，治療后1 d開始，全群豬精神狀態(tài)、糞便形態(tài)、采食量逐日好轉或提升，死亡率逐步下降，至治療后3-5 d，全群豬各項指標基本恢復正常，無豬死亡（表3）。觀察至60日齡，全群豬均未復發(fā)腹瀉和未再死亡，豬發(fā)育良好（圖2）。

圖2 觀察至60日齡的豬狀態(tài)

表3 治療結果

3 討論

豬繁殖與呼吸綜合征病毒有2個血清型，即美洲型和歐洲型，我國分離到的毒株為豬繁殖與呼吸綜合征病毒美洲型及其變異株，該病毒對酸、堿都較敏感，尤其很不耐堿，一般的消毒劑對其都有作用，斷奶仔豬染病后，主要表現(xiàn)為厭食、嗜睡、咳嗽、呼吸困難，有些豬雙眼腫脹，出現(xiàn)結膜炎、腹瀉、關節(jié)炎、耳朵變紅、皮膚有斑點等。豬繁殖與呼吸綜合征的診斷依賴于血清抗體核酸檢測，臨床上沒有特效藥物用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒病治療，只能采取消毒和退燒、抗病毒、止瀉、防細菌繼發(fā)感染等對癥治療的辦法加以控制。

在本發(fā)病豬場中，通過剖檢病死豬、采集腸道做組織切片觀察，發(fā)現(xiàn)腸道上皮絨毛幾乎完全脫落，腸道已基本失去消化、吸收功能，飼料在腸道內不能被消化吸收，進一步造成了代謝性腹瀉，從而加重了仔豬脫水，進而導致死亡。基于實驗室檢測結果和發(fā)病仔豬的臨床癥狀、病理變化，采取了對圈舍和病豬消毒的方式來減少環(huán)境中的病毒載量，對個別發(fā)燒嚴重的豬肌注安乃近注射液退燒，在飼料中添加抗生素控制細菌繼發(fā)感染，用轉移因子、豬干擾素肌注增強機體抵抗力、非特異性地抑制病毒復制從而達到減少機體的病毒載量，用口服補液鹽水稀釋治療仔豬腹瀉中藥散。上述綜合方案到達了緩解癥狀、控制繼發(fā)感染、增強機體免疫力、抑制病原、清熱燥濕、瀉火解毒、利水消腫、生肌收口、收斂止痢、修復受損傷的腸道上皮細胞，達到快速止瀉的目的，產生了較好的治療效果，全群豬采食量逐步上升至正常水平，停止腹瀉和死亡。