卵巢癌組織中circKIF4A和miR-942-5p的表達(dá)及其與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

湯 明， 方春田， 王 燕， 張 仙， 喻 欣

(1.湖北省洪湖市人民醫(yī)院， 湖北 洪湖 433200 2.湖北省婦幼保健院婦科， 湖北 武漢 430070)

卵巢癌(Ovarian cancer，OC)是女性中第七大最常見的癌癥，全球每年約新增239,000病例。盡管隨著手術(shù)治療及化療藥物的發(fā)展使OC患者生存率得到了提高，但晚期OC患者的5年生存率依然較低[1]。因此，尋找更多的分子靶點(diǎn)以促進(jìn)對(duì)OC患者的診斷及預(yù)后勢(shì)在必行。據(jù)報(bào)道，微小RNA(miRNA)在多種癌癥中異常表達(dá)可能通過參與多個(gè)步驟的調(diào)控，有望成為OC的治療靶點(diǎn)[2]。Xie等[3]研究表明OC組織中miR-942水平顯著降低。環(huán)狀RNA(circRNA)是各種癌癥生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中許多生物學(xué)過程的重要介質(zhì)。大量研究證實(shí)circRNA在OC中異常表達(dá)，在OC中具有診斷和預(yù)后價(jià)值[4]。Sheng等[5]研究表明circKIF4A在卵巢癌組織中高表達(dá)，敲低circKIF4A可以抑制卵巢癌中的細(xì)胞增殖和遷移。miR-942-5p、circKIF4A在卵巢癌中的表達(dá)均有報(bào)道，但二者與卵巢癌的臨床病理特和預(yù)后尚處于研究中。基于此，本研究通過檢測(cè)卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p和circKIF4A的表達(dá)情況，探討二者與臨床參數(shù)的關(guān)系以及對(duì)預(yù)后的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2015年1月至2017年1月在本院進(jìn)行手術(shù)的卵巢癌患者154例為研究對(duì)象，收集卵巢癌患者的癌組織及癌旁正常組織進(jìn)行研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：①卵巢癌診斷參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定標(biāo)準(zhǔn)[6]，且經(jīng)過手術(shù)病理確診；②術(shù)前均沒有接受過放療或化療；③患者及家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有卵巢、子宮手術(shù)史患者；②合并有重大疾病、凝血障礙及子宮肌瘤、內(nèi)膜異位癥等疾病；③臨床資料不完整者。本研究經(jīng)我院道德倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，樣品采集均取得研究對(duì)象的知情和同意。

1.2方 法:qRT-PCR法檢測(cè)組織中miR-942-5p、circKIF4A水平:使用Trizol試劑(貨號(hào)R0016；Beyotime，上海)從組織中提取RNA。接下來，使用特定的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara，大連)合成互補(bǔ)DNA(cDNA)。qRT-PCR在ABI 7900HT Systems(Applied Biosystems，美國(guó))上使用miScript SYBR Green PCR Kit(Qiagen，Germany)在以下熱循環(huán)條件下運(yùn)行：95℃ 10min，然后是95℃ 5s、60℃ 10s和72℃ 10s，共設(shè)40個(gè)循環(huán)。miR-942-5p、circKIF4A的表達(dá)分別以U6、GAPDH為內(nèi)參。使用2-ΔΔCt方法計(jì)算miR-942-5p、circKIF4A相對(duì)表達(dá)水平。

1.3隨訪:定期隨訪主要通過門診或電話進(jìn)行，詢問并記錄患者的生存時(shí)間和生存率，隨訪開始時(shí)間從出院起計(jì)算，截止時(shí)間為2022年1月，終點(diǎn)事件為患者死亡。

2 結(jié) 果

2.1卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p、circKIF4A的表達(dá):卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p表達(dá)水平低于癌旁組織，circKIF4A在卵巢癌患者癌組織中表達(dá)較癌旁組織中高(P<0.05)，見表1。

表1 癌組織及癌旁組織中miR-942-5p circKIF4A表達(dá)水平比較

2.2卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p、circKIF4A表達(dá)的相關(guān)性:卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p、circKIF4A表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=-0.312，P<0.05)，見圖1。

圖1 癌組織中miR-942-5p、circKIF4A表達(dá)相關(guān)性分析

2.3miR-942-5p、circKIF4A表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系:circKIF4A、miR-942-5p的表達(dá)與卵巢癌患者的年齡、病理類型、WHO組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑、浸潤(rùn)程度無關(guān)，與TNM分期、分化程度、腫瘤分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無腹水有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 癌組織中miR-942-5p circKIF4A的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4Kaplan-Meier生存分析:所有患者均進(jìn)行隨訪，無失訪病例，隨訪期間死亡97例，miR-942-5p、circKIF4A均以在癌組織中相對(duì)表達(dá)水平的中位數(shù)為臨界值，超出該范圍判定為高表達(dá)，低于該范圍定義為低表達(dá)。其中miR-942-5p高表達(dá)者共80例，低表達(dá)者74例。circKIF4A高表達(dá)者共78例，低表達(dá)者76例。繪制5年生存曲線，Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示，circKIF4A高表達(dá)組患者5年累積生存率26.92%(21/78)顯著低于低表達(dá)組47.37%(36/76)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log rank χ2=6.651，P=0.010)；miR-942-5p高表達(dá)組患者5年累積生存率46.25%(37/80)顯著高于低表達(dá)組患者27.03%(20/74)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log rank χ2=9.978，P=0.000)，見圖2。

圖2 不同miR-942-5p、circKIF4A表達(dá)的Kaplan-Meier生存曲線

2.5影響卵巢癌患者生存狀況的COX回歸分析:以是否死亡為因變量，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期、腫瘤分級(jí)、腹水、miR-942-5p、circKIF4A為自變量，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期、circKIF4A高表達(dá)、miR-942-5p低表達(dá)均是影響卵巢癌患者生存狀況的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響卵巢癌患者生存狀況的COX回歸分析

3 討 論

卵巢癌在婦科腫瘤中致死率最高，是女性癌癥死亡的第五大原因[7]。由于OC患者在腫瘤發(fā)生早期通常不會(huì)出現(xiàn)明顯癥狀，且到目前為止，還沒有早期診斷和治療OC的有效方法[8]。因此，大多數(shù)OC患者直到晚期才被診斷出患有卵巢癌，錯(cuò)過了最佳的治療機(jī)會(huì)，且有超過70%的晚期OC患者會(huì)在手術(shù)后復(fù)發(fā)，導(dǎo)致其預(yù)后較差[9]。因此，急需選擇更加有效可靠的指標(biāo)評(píng)估卵巢癌患者病情及預(yù)后。

miRNAs是內(nèi)源性和進(jìn)化上保守的小型非編碼RNA。最近的證據(jù)表明，miRNA在卵巢癌疾病發(fā)展中發(fā)揮重要作用[10]。研究顯示miR-942-5p的異常表達(dá)在多種腫瘤中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。如長(zhǎng)鏈非編碼RNA的linc00675可通過調(diào)節(jié)miR-942抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移[11]。在肝細(xì)胞癌中，miR-942-5p表達(dá)異常升高，與臨床特征和預(yù)后密切相關(guān)[12]。在本研究中，卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p表達(dá)較癌旁組織中降低，提示miR-942-5p水平降低可能參與調(diào)控卵巢癌的發(fā)生；進(jìn)一步通過與患者臨床病理特征比較分析，結(jié)果顯示miR-942-5p表達(dá)與疾病的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤分級(jí)、有無腹水密切相關(guān)，提示miR-942-5p表達(dá)異常與卵巢癌的臨床分期密切相關(guān)，臨床可通過判斷患者miR-942-5p的表達(dá)情況為疾病的分期及診斷提供一定參考依據(jù)。生存分析結(jié)果顯示miR-942-5p高表達(dá)組患者5年累積生存率顯著高于低表達(dá)組患者，提示miR-942-5p低表達(dá)可能與卵巢癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)相關(guān)，有可能成為評(píng)估卵巢癌患者預(yù)后不良的潛在指標(biāo)之一。

circRNA是一類具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的新型內(nèi)源性非編碼RNA，與線性RNA相比，circRNA在哺乳動(dòng)物組織中更豐富，且無帽尾[13]。circRNA曾經(jīng)被認(rèn)為是基因不正確轉(zhuǎn)錄的副產(chǎn)物，現(xiàn)在被認(rèn)為是多種生物內(nèi)過程的重要調(diào)控因子，包括癌癥的發(fā)生和發(fā)展[13]。Huo等[14]發(fā)現(xiàn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤中circKIF4A的表達(dá)顯著增加，敲低circKIF4A基因降低了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的集落形成能力、遷移和侵襲能力，并減慢腫瘤生長(zhǎng)速度。蒙秋等[15]研究表明circKIF4A在卵巢癌組織中表達(dá)升高，可能通過負(fù)向調(diào)控miR-384的表達(dá)從而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。在本研究中，患者癌組織中circKIF4A表達(dá)與癌旁組織相比明顯升高，提示circKIF4A可能在卵巢癌疾病中發(fā)揮了促癌基因的作用。circKIF4A表達(dá)也與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤分級(jí)、有無腹水有關(guān)，提示circKIF4A與患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可能通過增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲力以及附著力參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程；研究進(jìn)一步得到miR-942-5p和circKIF4A的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示二者之間可能存在靶向關(guān)系，circKIF4A可能充當(dāng)miR-942-5p的海綿分子，負(fù)向調(diào)控miR-942-5p的表達(dá)，從而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)展進(jìn)程，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。生存分析結(jié)果顯示circKIF4A高表達(dá)組患者5年累積生存率顯著低于低表達(dá)組，提示circKIF4A高水平表達(dá)與卵巢癌疾病惡化及預(yù)后不良密切相關(guān)。研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、circKIF4A高表達(dá)、miR-942-5p低表達(dá)均是影響卵巢癌患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示臨床表現(xiàn)circKIF4A高表達(dá)、miR-942-5p低表達(dá)的患者，應(yīng)該在術(shù)后給與更嚴(yán)密的隨訪觀察，必要時(shí)給予輔助治療，改善患者預(yù)后。

綜上所述，卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p呈低表達(dá)，circKIF4A呈高表達(dá)，二者表達(dá)，與卵巢癌疾病的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)二者對(duì)評(píng)估臨床卵巢癌患者的生存預(yù)后具有重要意義，二者有可能作為卵巢癌分子治療的新的潛在靶點(diǎn)。但本研究尚存在不足之處，circKIF4A、miR-942-5p在卵巢癌疾病中的具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行深入研究。