驢早期妊娠診斷中奶牛早孕試紙應(yīng)用研究

王世泰，李吉鵬，韓芙蓉，李愛文，趙艷紅，高鳳琴

(1. 甘肅省畜牧技術(shù)推廣總站，甘肅 蘭州730030；2. 金川區(qū)畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心)

驢作為傳統(tǒng)家養(yǎng)大型家畜，因其吃苦耐勞，適應(yīng)性強(qiáng)，對飼養(yǎng)條件要求不高而受到我國北方農(nóng)牧民的普遍歡迎，養(yǎng)殖量一度居全國各類大家畜飼養(yǎng)量之首。與牛、馬等其他大家畜相比，驢的養(yǎng)殖量雖然占有絕對優(yōu)勢，但受其自然屬性限制，所有驢種的世代間隔都較長，從出生到成熟直至下一代的出生，一般都需要3.5年或更長的時(shí)間。同時(shí)，驢的繁殖效率低下，在沒有人工干預(yù)的情況下自然繁殖率不足50%，嚴(yán)重制約著驢群快速擴(kuò)繁和種群血液更新速度。進(jìn)入新發(fā)展階段，驢產(chǎn)業(yè)作為特色養(yǎng)殖業(yè)完全擺脫了役用和肉用等傳統(tǒng)領(lǐng)域，繼而成為以藥、食、游及生物活性原料提供為主要盈利點(diǎn)的新型產(chǎn)業(yè)。驢作為長日照繁殖動(dòng)物，繁殖具有明顯季節(jié)性，因此如何高效利用有限繁殖季節(jié)，提高母驢群的繁殖效率始終是困擾畜牧工作者的難題之一。隨著科技進(jìn)步和現(xiàn)代繁育技術(shù)研究不斷深入，各類新技術(shù)、新材料普遍應(yīng)用于驢的繁殖各環(huán)節(jié)，對提升繁殖效率發(fā)揮了積極作用。B超作為一種驢早期妊娠診斷方法已在國內(nèi)大型養(yǎng)殖場普遍應(yīng)用，可以在最短時(shí)間內(nèi)確定配種母驢是否受孕，有效縮減母驢空懷期，對提升驢群繁殖效率，減少資源浪費(fèi)意義重大。由于驢產(chǎn)業(yè)起步較晚，驢早孕診斷試紙開發(fā)和檢測技術(shù)研究嚴(yán)重滯后，不能為新形勢下的驢產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展提供助力，可否利用奶牛早孕診斷試紙來診斷母驢是否受孕的研究也未見報(bào)道。為此筆者對兩個(gè)不同品種的繁殖母驢群進(jìn)行了為期2年的B超和早孕試紙(板型)跟蹤測定研究，旨在探討奶牛早孕診斷試紙(板型)應(yīng)用于母驢早孕測定的可行性以及兩種不同測定方法間的可替代性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)驢群

分別選定金昌市金川區(qū)某養(yǎng)殖有限公司的涼州驢繁殖群(下文簡稱A組)和蘭州市永登縣某養(yǎng)殖專業(yè)合作社德州驢繁殖群(下文簡稱B組)作為試驗(yàn)樣本。涼州驢屬甘肅當(dāng)?shù)匦⌒偷胤搅挤N，耐粗飼，適應(yīng)性好。本場存欄基礎(chǔ)母驢128頭，本交自然繁殖率達(dá)54%左右。德州驢屬國內(nèi)優(yōu)秀大型驢種，生長發(fā)育快，成體出肉率高，皮張質(zhì)量好，但對飼養(yǎng)條件要求較好，尤其對日糧中精飼料質(zhì)量及比例要求高于本地品種。本場存欄基礎(chǔ)母驢512頭，本交自然繁殖率為45%左右。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間

試驗(yàn)期2年，分別為2020年3月至2020年11月，2021年3月至2021年11月。

1.3 試驗(yàn)分組

A組和B組分屬不同地區(qū)、 不同品種，分別單獨(dú)進(jìn)行B超和奶牛早孕試紙(板型)跟蹤測定。

1.4 試驗(yàn)儀器及材料

試驗(yàn)用B超儀為山東尚農(nóng)電子科技有限公司生產(chǎn)的尚農(nóng)全數(shù)字獸用B超測孕儀，型號(hào)為SN-N30。血清分離機(jī)為江蘇省常州金壇區(qū)西城新瑞儀器廠生產(chǎn)的80-1型。試紙為北京萬華生物工程有限公司生產(chǎn)的奶牛孕酮膠體金檢測試紙(雙抗夾心法)，商品名為奶牛早孕診斷試紙(板型)，生產(chǎn)批號(hào)分別為20191012和20200906。

1.5 飼養(yǎng)管理

A、B兩組母驢均采用全舍飼養(yǎng)殖。圈舍為標(biāo)準(zhǔn)化保溫建筑，通風(fēng)良好，光線充足，地面防滑平整，食槽高度適中，自動(dòng)飲水。待配母驢平均槽位100 cm, 可供舍內(nèi)所有驢同時(shí)采食。運(yùn)動(dòng)場面積為舍內(nèi)面積的四倍以上，其中輔設(shè)飲水槽和蹭癢樁，夏天增設(shè)遮陰設(shè)施。繁殖季圈舍與運(yùn)動(dòng)場間隔斷門長期開啟，以保證驢群自由活動(dòng)。每日定時(shí)定量飼喂，投喂新料前清理上次所投草料中驢不愿采食的部分。頭均日糧供給按全群平均體重的3%(干物質(zhì))計(jì)算，日糧組成為20%精料+80%飼草，平均粗蛋白含量為11.2%左右。飼養(yǎng)員和配種員相對固定，不隨易改變。每天定時(shí)清理舍內(nèi)外衛(wèi)生。

1.6 測定方法

公母驢單獨(dú)飼養(yǎng)，每天早晨將試情公驢放入母驢群，挑出發(fā)情母驢后開始計(jì)時(shí)，到發(fā)情第5 d和第7 d分別由采用本交方式配種1次，共2次。于第二次配種后第15 d用B超儀做直腸妊娠檢查，檢查時(shí)先保定母驢，術(shù)者保證手及上臂沒有外傷，戴長臂產(chǎn)科手套并充分潤滑，先緩慢將手探入母驢直腸，掏出宿便，確定再無宿便后重新潤滑手套和探頭，將探頭用食指、中指和無名指夾緊且探頭發(fā)射面朝向子宮側(cè)伸入母驢直腸，助手持B超顯示屏于術(shù)者一側(cè)，便于術(shù)者觀察。B超檢查的同時(shí)，于母驢頸靜脈處經(jīng)充分消毒后用負(fù)壓采血器采取靜脈血5 mL用做早孕試紙檢測試驗(yàn)。

1.7 結(jié)果判定

B超探頭前后移動(dòng)，待顯示屏中可清晰觀察到宮腔內(nèi)影像時(shí)，隨著探頭緩慢移動(dòng)仔細(xì)觀察宮腔四壁是否有孕囊或孕體， 若能于顯示屏中觀察到圓形液性暗區(qū)(孕囊)或圓形液性暗區(qū)內(nèi)有強(qiáng)回聲光團(tuán)或光斑(孕體)證明已受孕；若沒有觀察到孕囊或孕體，同時(shí)移動(dòng)探頭觀察兩側(cè)卵巢，若卵巢表面有發(fā)育中的卵泡呈現(xiàn)，證明母驢沒有受孕；所采血液先呈45～60度角于4℃的冰箱中先靜置1 h，然后以3 000轉(zhuǎn)/ min的轉(zhuǎn)速低速離心5 min，再用移液器將析出的血清滴3～4滴于樣品孔(S)，靜置5 min后觀察結(jié)果。若在檢測區(qū)(T)和控制區(qū)(C)各出現(xiàn)一條色帶判定為陽性，即母驢妊娠；若僅在控制區(qū)(C)出現(xiàn)一條色帶判定為陰性，即母驢沒有妊娠；若在控制區(qū)(C)出現(xiàn)色帶而在檢測區(qū)(T)出現(xiàn)陰影判定為可疑；若控制區(qū)(C)未出現(xiàn)色帶為無效。對于“可疑”和“無效”兩種情況用新試紙重新測定一次，觀察結(jié)果是否與前次測定一致，若一致對于“可疑”情況待5 d后重新采樣并重復(fù)測定，對于“無效”情況重新取另一批次的試紙進(jìn)行重新檢測。

2 結(jié)果

2.1 2020年全年配種及兩種早期妊娠檢測方法檢查情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果

從下表中可以看出，驢作為典型長日照季節(jié)性繁殖動(dòng)物，每年從3月份開始進(jìn)入繁殖時(shí)段，開始陸續(xù)發(fā)情配種，隨著日照時(shí)數(shù)持續(xù)延長至6月份后進(jìn)入發(fā)情盛期，至9月份后隨著日照時(shí)間逐步縮短而發(fā)情驢數(shù)量快速減少，11月份基本不再發(fā)情。從每個(gè)月兩組發(fā)情母驢二次復(fù)配15 d檢查結(jié)果看，妊娠驢占本期參加配種驢的50%左右。10個(gè)月的繁殖季中，A組全期參加配種113驢(次)，應(yīng)用B超早期妊娠檢查，陽性結(jié)果73例，占配種次數(shù)的64.6%，應(yīng)用奶牛早孕診斷試紙檢查，陽性結(jié)果76例，占配種次數(shù)的67.3%，兩種方法同時(shí)檢測陽數(shù)為62例，占配種次數(shù)的54.9%，經(jīng)過50 d跟蹤，確定有55頭母驢妊娠。B組全期參加配種573驢(次)，使用B超早期妊娠檢查，結(jié)果陽性288例，占配種次數(shù)的50.3%，應(yīng)用奶牛早孕診斷試紙檢查，結(jié)果陽性287例，占配種次數(shù)的50.1%，兩種方法同時(shí)檢測陽數(shù)為274例，占配種次數(shù)的47.8%，經(jīng)過50 d跟蹤，最終確定有229頭母驢妊娠。

表1 2020年各月份配種及兩種方法檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)表 頭

2.2 2021年全年配種及兩種早期妊娠檢測方法檢查情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2021年發(fā)情配種開始時(shí)間、結(jié)束時(shí)間以及全期發(fā)展趨勢與2020年基本一致，不再贅述。從表2中可以看出A組全年參加配種142驢(次)，應(yīng)用B超進(jìn)行早期妊娠檢查，陽性結(jié)果86例，占配種總次數(shù)的60.6%，使用奶牛早孕診斷試紙檢查，陽性結(jié)果87例，占配種總次數(shù)的61.3%，兩種檢測方法同時(shí)顯示陽性75例，占參加配種總次數(shù)的52.8%，經(jīng)過50 d跟蹤確定妊娠69例。B組全年參加配種570驢(次)，其中應(yīng)用B超早期妊娠檢查，顯示結(jié)果陽性270例，占參加配種總次數(shù)的47.4%，使用奶牛早孕診斷試紙檢測，顯示陽性結(jié)果271例，占參加配種總次數(shù)的47.5%，兩種檢測方法同時(shí)顯示陽性250例，占參加配種總次數(shù)的43.9%，經(jīng)過50 d跟蹤確定妊娠226例。

表2 2021年各月份配種及兩種方法檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)表 頭

2.3 2020年兩組母驢全期配種結(jié)果分析

從表3看出，A組參加配種的母驢為93頭，全年總配種次數(shù)113次，配種50日后總?cè)焉飻?shù)55頭。在全程早孕檢測中，B超檢測陽性結(jié)果73例，妊娠數(shù)占B超檢測陽性數(shù)的75.3%，奶牛早孕試紙檢測陽性結(jié)果76例，妊娠數(shù)占奶牛早孕試紙檢測陽性數(shù)72.4%。經(jīng)全程跟蹤最終妊娠數(shù)為51例，受胎率為54.8%。B組對應(yīng)數(shù)據(jù)分別為435頭、573次、229頭、288例、79.5%、287例、79.8%、205例及47.1%。

表3 2020年配種結(jié)果表 頭，次

2.4 2021年兩組母驢全期配種結(jié)果分析

2021年A組參加配種母驢112頭，全程總配種次數(shù)142次，據(jù)跟蹤監(jiān)測，自配種至第50天為止，妊娠69頭。B超檢測陽性驢數(shù)86頭，妊娠數(shù)占陽性數(shù)的比例為80.2%，奶牛早孕試紙檢測陽性驢87頭，妊娠數(shù)占陽性數(shù)的79.3%。經(jīng)后期最終確認(rèn)妊娠62頭，受胎率55.4%。A組對應(yīng)數(shù)據(jù)為441頭、570次、226頭、270頭、83.7%、271次、83.4%、203頭及46.0%。

表4 2021年配種結(jié)果表 頭，次

3 討論與小結(jié)

3.1 應(yīng)用奶牛早孕檢測試紙進(jìn)行母驢早孕測定是可行的

奶牛早孕試紙的反應(yīng)原理是利用膠體金雙抗體夾心法檢測被檢物中孕酮的含量。驢和牛同屬高等哺乳動(dòng)物，繁殖過程中母體受孕后都會(huì)由卵巢黃體分泌大量孕酮進(jìn)入血液，抑制發(fā)情，維持妊娠。孕酮是類固醇類生殖激素，動(dòng)物間沒有種屬特異性，不同物種動(dòng)物的孕酮可相互作用。因此，利用奶牛早孕試紙?jiān)\斷母驢配種后早期是否受孕的方法是可行的。

3.2 利用奶牛早孕試紙?jiān)\斷母驢早期是否受孕的效果理想

通過兩個(gè)配種季對兩組不同品種母驢的跟蹤測定，奶牛早孕試紙檢出陽性案例性與B超檢測所示陽性案例數(shù)很接近。B超作為母驢早孕檢測中很成熟的方法，檢測準(zhǔn)確率很高。試紙檢測陽性數(shù)量與B超測定陽性數(shù)量相近且兩種不同方法檢測結(jié)果絕大部分對應(yīng)重疊，更能說明將奶牛早孕檢測試紙應(yīng)用于母驢早期妊娠診斷的可行性。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，兩種檢測結(jié)果重疊數(shù)量與50 d確定妊娠數(shù)量有10%左右的差距，這正是導(dǎo)致驢繁殖率低的一大癥結(jié)，從配種受孕至受精卵穩(wěn)定著床過程中有10～15%的胚胎會(huì)丟失。這一問題到目前為止還沒有太好的解決辦法。

3.3 B超早孕檢測方法和奶牛早孕檢測試紙兩種方法應(yīng)用于母驢早期妊娠診斷可以互相替代

B超檢查結(jié)果直觀，繁殖領(lǐng)域應(yīng)用面更廣，但術(shù)者要經(jīng)過前期系統(tǒng)培訓(xùn)和大量實(shí)踐后觀察結(jié)論才更可靠。驢與牛、馬等家畜相比較，直腸壁特別薄，術(shù)者在清理宿便和放置探頭過程中一定要慎之又慎，潤滑、消毒、手型、力度和人驢配合方面必須到位，否則容易導(dǎo)致母驢受傷甚者直腸斷裂而死亡。奶牛早孕診斷試紙使用方便，可以以母驢尿液作為檢測對象，也可以以母驢血漿作為檢測對象，檢測結(jié)果直觀且快速。缺點(diǎn)是必須有條件較為完備的實(shí)驗(yàn)室，配套相應(yīng)的血清分離和冷藏等設(shè)備，檢測結(jié)果個(gè)別時(shí)候介于陽性和陰性臨界段，一次無法準(zhǔn)確斷定結(jié)果，需進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)才能準(zhǔn)確斷定。兩種檢測方式?jīng)]有明顯的優(yōu)劣之分，不同的場子可根據(jù)實(shí)際情況或同時(shí)采用兩種方法做重復(fù)試驗(yàn)或采用其中一種方法來做母驢妊娠早期診斷均有良好效果，都可達(dá)到早期診斷，強(qiáng)化管理，有效縮短母驢空懷期，降低養(yǎng)殖成本的目的。