不同免疫劑量禽流感滅活疫苗對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋率及抗體效價(jià)的影響

王雪芬，周守長，崔國林，2，李佳佳，張明月，王雪敏，閆文亮

（1.華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司，河北邯鄲 057151；2.河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北邯鄲 056038）

禽流感是由正黏病毒科流感病毒屬A 型流感病毒引起的一種急性、高度接觸性禽類傳染病，一年四季均可發(fā)生，但冬春季節(jié)多發(fā)，具有發(fā)病急、死亡快、發(fā)病率高的特點(diǎn)[1]。禽流感不僅會(huì)導(dǎo)致雞群大量死亡，還會(huì)在短時(shí)間發(fā)生大面積流行，這一方面會(huì)給養(yǎng)殖企業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失，另一方面給食品安全構(gòu)成一定威脅，因此需要做好禽流感防控工作。其中，給雞群注射禽流感滅活疫苗是一種有效的防控手段[2]。

我國從2005 年開始實(shí)施的禽流感強(qiáng)制免疫措施[3]，對(duì)控制禽流感暴發(fā)和流行起到了重要作用。產(chǎn)蛋雞在產(chǎn)蛋高峰期，對(duì)外界刺激較敏感，抗應(yīng)激能力低[9]，此時(shí)接種禽流感疫苗會(huì)造成其產(chǎn)蛋性能下降。根據(jù)重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗免疫雞群的臨床效果評(píng)價(jià)，210、250、300、340 日齡時(shí)免疫，對(duì)產(chǎn)蛋造成影響的比例分別為50%、83%、33%和33%[4]。

為保證雞群在產(chǎn)蛋期有較高的抗體水平，需要在產(chǎn)蛋期進(jìn)行1～2 次的禽流感疫苗加強(qiáng)免疫。而處于產(chǎn)蛋期的雞群對(duì)疫苗注射較為敏感，常因疫苗注射應(yīng)激，導(dǎo)致雞群產(chǎn)蛋量下降，給生產(chǎn)者帶來損失，特別是對(duì)種雞群影響更大。為使抗體效價(jià)始終保持在有效水平以上，同時(shí)盡量降低疫苗注射對(duì)雞群生產(chǎn)性能的影響，在河北省某海蘭褐父母代蛋種雞養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行禽流感免疫劑量對(duì)比試驗(yàn)，以期給養(yǎng)殖生產(chǎn)選擇最適免疫劑量提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇55 周齡海蘭褐蛋種雞720 羽開展相關(guān)試驗(yàn)。該試驗(yàn)雞群6 周齡首免，15 周齡二免重組禽流感病毒H5+H7 三價(jià)滅活疫苗，開產(chǎn)后未再進(jìn)行免疫。

1.2 試驗(yàn)疫苗與試劑

重組禽流感病毒H5+H7 三價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 Re-3 株）來自市購，其H5 亞型Re-11、Re-12 株和H7N9 亞型H7-Re3株雞胚液HA 效價(jià)均不低于1:512，使用說明要求胸部皮下注射，2～5 周齡注射劑量為0.3 mL/羽，5周齡以上為0.5 mL/羽。禽流感亞型標(biāo)準(zhǔn)抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽性血清及陰性血清，購自哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司。

1.3 儀器與試劑

一次性注射器、離心機(jī)、96 孔V 型板、微量移液器、微量振蕩器、消毒離心管、吸頭，雞紅細(xì)胞懸液等。

1.4 試驗(yàn)分組及免疫

平均分成6 組，每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30 羽，對(duì)其進(jìn)行同一飼養(yǎng)管理。按每羽免疫劑量分組，分為0.2、0.3、0.5、0.7 mL 組，同時(shí)設(shè)0.5 mL 生理鹽水組及不免疫空白對(duì)照組，按疫苗說明書進(jìn)行免疫操作。

1.5 抗體檢測(cè)

各組分別在免疫前和免疫后3、6、10、14 周采血，按照《禽流感血凝抑制試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)》（GB/T 18936—2003）檢測(cè)抗體。

1.6 產(chǎn)蛋率統(tǒng)計(jì)

每日下午4—5 點(diǎn)，記錄各組蛋雞產(chǎn)蛋數(shù)量，統(tǒng)計(jì)不同劑量4 個(gè)重復(fù)組的產(chǎn)蛋均值，按周計(jì)算產(chǎn)蛋率并與上一周數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比。

1.7 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 軟件整理，用SPSS 16.0 軟件統(tǒng)計(jì)，采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05 和P＜0.01 分別表示差異顯著和差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)蛋率

各分組產(chǎn)蛋率統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表1）顯示：免疫后1 周，不同劑量免疫組的產(chǎn)蛋率均出現(xiàn)下降，其中0.7 mL 組下降幅度最大，與對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01），其次為0.5 mL 和0.2 mL 組，與對(duì)照組差異均顯著（P＜0.05），而0.3 mL 組和生理鹽水組，與對(duì)照組差異均不顯著（P＞0.05）；免疫后2 周，免疫組產(chǎn)蛋率繼續(xù)大幅下降，其中0.7 mL 組下降幅度最大，其次為0.5 mL 和0.3 mL組，與對(duì)照組差異均極顯著（P＜0.01），0.2 mL組和生理鹽水組，與對(duì)照組差異均不顯著（P＞0.05）；免疫后3 周，各免疫組產(chǎn)蛋率均開始回升，與對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05），其中0.2 mL 組產(chǎn)蛋率恢復(fù)至正常水平；免疫后4 周，0.5 mL 組（P＜0.05）和0.7 mL 組（P＜0.01）產(chǎn)蛋率繼續(xù)上升，與對(duì)照組均差異顯著，其他各免疫組變化幅度不明顯（P＞0.05）。

表1 不同劑量滅活疫苗對(duì)海蘭褐蛋蛋種雞產(chǎn)蛋率的影響 單位：%

2.2 抗體效價(jià)

2.2.1 H5 亞型效價(jià) 0.2、0.3、0.5、0.7 mL 組與生理鹽水組相比，免疫后3 周的H5N1 Re-11 抗體水平均顯著上升（表2）。其中：0.7 mL 組免疫后3 周的抗體滴度與免疫前相比上升幅度最高，上升了4.50log2；其次是0.5 mL 組，免疫后3 周的抗體滴度比免疫前上升了4.10log2；其他免疫組抗體滴度上升幅度較小，0.2 mL 組免疫后3 周比免疫前上升了3.40log2，0.3 mL 組上升了3.20log2，免疫后14 周0.2 mL 組抗體滴度為8.60log2，與0.7 mL 組持平。具體數(shù)據(jù)見表2。

表2 免疫前后H5 Re-11 抗體滴度均值變化情況 單位：log2

2.2.2 H7 亞型效價(jià) 各免疫組分別與生理鹽水組相比，免疫后3 周的H7N9 H7-Re3 抗體水平均顯著上升（P＜0.05），而各免疫組間的上升幅度差異均不顯著（P＞0.05）。其中：0.7 mL 組的抗體滴度與免疫后3 周相比上升幅度最高，上升了4.08log2；其次為0.5 mL 組，免疫后3 周抗體滴度比免疫前上升了3.66log2；再次為0.3 mL 組，免疫后3 周抗體滴度比免疫前上升了3.50log2；0.2 mL組免疫后3 周的抗體滴度上升幅度最小，比免疫前上升了2.96log2。免疫后14 周，0.7、0.3、0.2 mL組的抗體滴度均在7.60log2 以上。具體數(shù)據(jù)見表3。

表3 免疫前后H7-Re3 抗體滴度均值變化情況 單位：log2

3 討論

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：免疫禽流感滅活疫苗會(huì)對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能造成一段時(shí)間的影響，免疫劑量越大對(duì)產(chǎn)蛋性能的影響越高；免疫劑量為0.2 mL/羽時(shí)，免疫后3 周的抗體水平已在保護(hù)線以上，且維持時(shí)間大于14 周。杜元釗[5]指出：H5 亞型的臨界保護(hù)滴度為5log2，此抗體水平可以保護(hù)雞群不發(fā)生高致病性禽流感。畢英佐[6]認(rèn)為，HI 抗體達(dá)到5log2時(shí)，禽群感染禽流感病毒后可以不出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，達(dá)到7log2 以上時(shí)產(chǎn)蛋率不會(huì)下降。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，0.2 mL/羽免疫劑量的抗體效價(jià)均遠(yuǎn)高于5log2，不僅能起到保護(hù)作用，而且對(duì)產(chǎn)蛋性能的影響也是最低的。但這與張?jiān)獊淼萚3]提到的0.6 mL/羽免疫劑量、魏軍等[7]提到的0.8 mL/羽免疫劑量抗體效果最佳有差異，這可能與選取的雞群免疫基礎(chǔ)不同有關(guān)。本試驗(yàn)選取的試驗(yàn)雞群為海蘭褐父母代種雞，處于產(chǎn)蛋中期55 周齡，在開產(chǎn)前進(jìn)行了2 次基礎(chǔ)免疫。0.2 mL/羽的免疫劑量即可產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，這與潘舒心等[8]的試驗(yàn)研究結(jié)果一致。0.7 mL/羽免疫劑量產(chǎn)生的抗體水平與其他劑量相比并未顯著增高，卻因免疫劑量過大引起了雞群較高的應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)產(chǎn)蛋率影響較大。因此，對(duì)產(chǎn)蛋中期蛋雞進(jìn)行禽流感疫苗免疫時(shí)，不必盲目加大劑量，以免造成不必要的浪費(fèi)以及免疫副反應(yīng)帶來的經(jīng)濟(jì)損失。

免疫應(yīng)激也是造成蛋雞產(chǎn)蛋性能下降的原因之一。本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，生理鹽水免疫對(duì)產(chǎn)蛋率的影響與對(duì)照組相比差異不顯著，對(duì)照組成立，說明抓雞免疫應(yīng)激對(duì)本試驗(yàn)結(jié)果基本無影響。

綜上，對(duì)于父母代蛋種雞場(chǎng)，建議開產(chǎn)前抗體下降至7log2 時(shí)，進(jìn)行加強(qiáng)免疫，推薦免疫劑量為0.2 mL/羽，這樣即可保證在生產(chǎn)性能不受顯著影響的情況下免疫抗體達(dá)到預(yù)期保護(hù)水平。