Bartha-K61疫苗對PRV變異株免疫效果的Meta分析

徐 玉，王 彬，曾智勇，梁海英，湯德元，何信群 ，徐松平，黃二素，萬 娟，張婧旭，祝 羊

(1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025 ； 2. 重慶永健生物技術(shù)有限責(zé)任公司，重慶 榮昌 402460)

偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)是引起偽狂犬病(Pseudorabies，PR)的一種皰疹病毒，屬于皰疹病毒目、皰疹病毒科、α-皰疹病毒亞科、水痘病毒屬?？筛腥矩i、牛、兔、狗、貓、貂、人等多種動(dòng)物[1-2]。1947年，我國首次報(bào)道了貓的偽狂犬病[3]。1975 年，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)統(tǒng)計(jì)顯示，偽狂犬病已經(jīng)發(fā)展成為一種世界范圍內(nèi)的災(zāi)難性疫病，造成的經(jīng)濟(jì)損失僅次于口蹄疫和豬瘟[4-5]。20世紀(jì)70年代，我國從匈牙利進(jìn)口了Bartha-K61疫苗，將其廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)，有效地預(yù)防和控制了PRV在我國豬群中的傳播。但2011年底以來，國內(nèi)各地區(qū)相繼暴發(fā)PR，出現(xiàn)PRV變異毒株，使得國內(nèi)豬群感染PRV的情況日益惡化[6]?；诖?，許多專家學(xué)者紛紛以“Bartha-K61疫苗對PRV變異毒株是否能提供有效的免疫保護(hù)”為研究對象做了相關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)，如：An等[7]認(rèn)為Bartha-K61疫苗對傳統(tǒng)毒株的免疫保護(hù)可以達(dá)到100%，而王一鵬等[8]發(fā)現(xiàn)，其對變異株HeN1的保護(hù)率僅為50%； 王繼春等[9]卻認(rèn)為，雖然變異株比經(jīng)典株毒力強(qiáng)，但血清型沒有改變，Bartha-K61疫苗仍能對變異株產(chǎn)生有效保護(hù)。

Meta分析是針對同一科學(xué)問題綜合比較和分析一系列獨(dú)立研究結(jié)果的方法，對各個(gè)研究報(bào)告的統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，目的在于獲得更可靠的結(jié)論[10-12]。20世紀(jì)90年代，Meta分析就已經(jīng)在國外疫苗學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。至今，Meta分析已經(jīng)普遍應(yīng)用于疫苗評(píng)價(jià)，但在獸醫(yī)領(lǐng)域的研究報(bào)道較少[13-14]。本試驗(yàn)擬采用Meta分析的方法對前人報(bào)道的關(guān)于經(jīng)典疫苗Bartha-K61對PRV變異株免疫效果的試驗(yàn)進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，為預(yù)防與控制PR及Meta分析在預(yù)防獸醫(yī)學(xué)疫苗評(píng)價(jià)中的應(yīng)用提供了科學(xué)的參考。

1 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索 根據(jù)參考文獻(xiàn)[15]提到的文獻(xiàn)檢索方法，結(jié)合本試驗(yàn)實(shí)際情況，以主題(“Bartha-K61”或“Bartha K61”)和(“PRV變異株”或“偽狂犬變異株”或“免疫保護(hù)”或“免疫效果”)為檢索式分別檢索中國知網(wǎng)(CNKI)、萬方數(shù)據(jù)知識(shí)服務(wù)平臺(tái)(WANFANG DATA)、維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(VIP)2011—2020年的相關(guān)文獻(xiàn)。以All Fields("Bartha-K61" or "Bartha K61")and("PRV variant" or "Pseudorabies variant" or "Immune protection" or "Immune effect")為檢索式檢索美國國立醫(yī)學(xué)圖書館數(shù)據(jù)庫(PubMed)2011—2020年的相關(guān)文獻(xiàn)。

1.2 文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 參考韓冰峰等[16]Meta分析文獻(xiàn)的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合本試驗(yàn)實(shí)際情況，制定文獻(xiàn)的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)研究類型為對照試驗(yàn)，包括隨機(jī)對照試驗(yàn)(Randomized controlled trial，RCT)和非隨機(jī)對照試驗(yàn)；(2)研究對象為進(jìn)行PRV變異株攻毒的豬；(3)干預(yù)措施為接種Bartha-K61疫苗(疫苗生產(chǎn)廠家不限)；(4)對照組措施主要有3種：接種Bartha-K61疫苗+攻毒PRV經(jīng)典株、不接種PRV疫苗+攻毒PRV變異株、接種其他PRV疫苗+攻毒PRV變異株；(5)主要結(jié)局指標(biāo)有攻毒保護(hù)率，體溫變化，體重變化，臨床癥狀，病理變化，鼻腔、口腔、直腸排毒，組織病毒載量，中和抗體，PRV gE、gB抗體等。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)數(shù)據(jù)重復(fù)文獻(xiàn)、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義文獻(xiàn)、會(huì)議摘要、綜述、機(jī)制研究以及與Bartha-K61疫苗對PRV變異株免疫效果無關(guān)的文獻(xiàn)；(2)試驗(yàn)組未明確提及攻毒PRV變異株的文獻(xiàn)；(3)研究對象不是豬的文獻(xiàn)；(4)無法獲取全文的文獻(xiàn)；(5)數(shù)據(jù)不全或不對的文獻(xiàn)。

1.3 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)和數(shù)據(jù)提取

1.3.1 質(zhì)量評(píng)價(jià) 采用隨機(jī)對照試驗(yàn)評(píng)價(jià)中的Jadad量表進(jìn)行文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)指標(biāo)包括隨機(jī)序列產(chǎn)生、分配隱藏、盲法、退出與失訪。若文獻(xiàn)中對某項(xiàng)進(jìn)行詳細(xì)描述的記為2分，僅提及的記為1分，未提及的記為0分。每項(xiàng)分?jǐn)?shù)累計(jì)，1～3分視為低質(zhì)量文獻(xiàn)，4～7分視為高質(zhì)量文獻(xiàn)[17]。

1.3.2 數(shù)據(jù)提取 采用Microsoft Excel工作表設(shè)計(jì)數(shù)據(jù)摘錄表摘錄納入文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)信息，數(shù)據(jù)摘錄要素包括：(1)文獻(xiàn)題目、第一作者、發(fā)表時(shí)間；(2)試驗(yàn)組和對照組樣本量、干預(yù)措施、劑量、濃度、時(shí)間等；(3)試驗(yàn)組和對照組結(jié)局指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用RevMan 5.4.1軟件對符合條件的數(shù)據(jù)繪制森林圖和漏斗圖。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法選擇用于二分類變量的Mantel-Haenszel法(MH)；采用I2檢驗(yàn)判斷各研究間的異質(zhì)性，若(P>0.1或I2<50%)，則選擇固定效應(yīng)模型(Fixed effects model，F(xiàn)EM)計(jì)算合并比值比(Odds ratio，OR)及其95%置信區(qū)間(Confidence interval，CI)，否則選擇隨機(jī)效應(yīng)模型(Random effects model，REM)；逐一剔除每個(gè)研究，進(jìn)行敏感性分析，了解Meta分析的穩(wěn)定性；漏斗圖檢驗(yàn)發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索與篩選 共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)107篇，去掉數(shù)據(jù)重復(fù)文獻(xiàn)，閱讀文獻(xiàn)題目、摘要和全文，最終納入研究的文獻(xiàn)共15篇，見圖1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程Fig.1 Study flow diagram of reference screening

2.2 納入文獻(xiàn)基本特征和質(zhì)量評(píng)價(jià) 15篇文獻(xiàn)中有8篇英文文獻(xiàn)，7篇中文文獻(xiàn)，包括學(xué)位論文和期刊文章；接種Bartha-K61疫苗+攻毒PRV經(jīng)典株為對照組的有4篇，不接種PRV疫苗+攻毒PRV變異株為對照組的有15篇，接種其他PRV疫苗+攻毒PRV變異株為對照組的有9篇；研究類型均為RCT，研究對象均為健康斷奶仔豬；根據(jù)Jadad評(píng)分量表的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，納入的15篇文獻(xiàn)沒有提及隨機(jī)分組的方法，也沒有提及分配隱藏、盲法、退出與失訪，均屬于低質(zhì)量文獻(xiàn)，見表1。

表1 納入文獻(xiàn)基本特征和質(zhì)量評(píng)價(jià)Table 1 Basic characteristics and quality evaluation of included references

續(xù)表

2.3 對PRV變異株免疫效果的Meta分析 對于連續(xù)變量的結(jié)局指標(biāo)，如日增重、日排毒量，大多文獻(xiàn)中沒有提及試驗(yàn)組和對照組的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，故選擇二分類變量(攻毒保護(hù)率)為結(jié)局指標(biāo)，進(jìn)行Bartha-K61活疫苗對PRV變異株免疫效果評(píng)價(jià)的Meta分析。由于納入研究的4篇提及以接種Bartha-K61疫苗+攻毒PRV經(jīng)典株為對照組的文獻(xiàn)和9篇提及以接種其他PRV疫苗+攻毒PRV變異株為對照組的文獻(xiàn)中，試驗(yàn)組和對照組攻毒后的存活數(shù)大多一致，故不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，將在討論中詳細(xì)分析。15篇提及以不接種PRV疫苗+攻毒PRV變異株為對照組的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，全部納入研究。根據(jù)森林圖(圖2)，I2檢驗(yàn)結(jié)果顯示：各研究間同質(zhì)(P=0.91>0.1，I2=0<50%)；逐一剔除每個(gè)研究后，剩余文獻(xiàn)的合并效應(yīng)值變化不大，研究結(jié)果穩(wěn)定性較好；黑色實(shí)心菱形在無效線右側(cè)，與無效線不相交，不僅表明該結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，還說明了接種Bartha-K61試驗(yàn)組比不接種只攻毒PRV變異株對照組的保護(hù)率高，即Bartha-K61疫苗對PRV變異株的攻擊可以提供免疫保護(hù)(合并OR=22.77，95%CI=9.91～52.28)。根據(jù)漏斗圖(圖3)，右下角出現(xiàn)缺角，且各研究未均勻分布在豎線兩側(cè)，對稱性較差，說明存在發(fā)表偏倚。

圖2 接種和不接種Bartha-K61疫苗對攻毒PRV變異株保護(hù)率比較的森林圖Fig.2 Forest plot comparing the protection rate of challenged PRV variants with and without Bartha-K61 vaccine

圖3 接種和不接種Bartha-K61疫苗對攻毒PRV變異株保護(hù)率比較的漏斗圖Fig.3 Funnel plot comparing the protection rate of challenged PRV variants with and without Bartha-K61 vaccine

3 討論

從2011年P(guān)RV變異株出現(xiàn)至今，研究人員關(guān)注最多的是經(jīng)典疫苗Bartha-K61對PRV變異株的免疫保護(hù)情況。本試驗(yàn)為獲得可靠的結(jié)論，收集已報(bào)道的關(guān)于經(jīng)典疫苗Bartha-K61對PRV變異株免疫效果的試驗(yàn)進(jìn)行系統(tǒng)的分析評(píng)價(jià)。15篇納入Meta分析的文獻(xiàn)以不接種PRV疫苗+攻毒PRV變異株為對照組，從攻毒保護(hù)率來看，接種了Bartha-K61疫苗的試驗(yàn)組，除3篇攻毒保護(hù)率只有80%以上外，其余均為100%；不接種疫苗的對照組中有5篇的試驗(yàn)動(dòng)物全部死亡，有10篇的耐過率為20%～60%，說明Bartha-K61疫苗對PRV變異株可以提供比較好的免疫保護(hù)。有4篇文獻(xiàn)以接種Bartha-K61疫苗+攻毒PRV經(jīng)典株為對照組，從攻毒保護(hù)率來看，對照組均為100%，表明Bartha-K61疫苗可以100%的抵抗PRV經(jīng)典株的攻擊；其中有3篇試驗(yàn)組攻毒保護(hù)率為100%，只有1篇試驗(yàn)組攻毒保護(hù)率為80%，表明Bartha-K61疫苗對變異株的攻擊也可以提供較好的保護(hù)。有9篇文獻(xiàn)以接種其他PRV疫苗+攻毒PRV變異株為對照組，從攻毒保護(hù)率來看，其中7篇試驗(yàn)組和對照組攻毒保護(hù)率均為100%，只有2篇試驗(yàn)組攻毒保護(hù)率分別為80.0%和87.5%，表明Bartha-K61疫苗對變異株也能提供較大程度的保護(hù)，但比起以變異株為親本毒株研制的疫苗來說，保護(hù)效果略差。

所有納入研究的文獻(xiàn)中，免疫Bartha-K61疫苗的最低滴度為103TCID50，最高滴度為107TCID50，單從攻毒保護(hù)率來看，高滴度和低滴度的Bartha-K61疫苗對變異株的攻擊均可以起到較好的免疫保護(hù)，但從體溫、體重變化、臨床癥狀、病理變化、中和抗體以及病毒載量來看，高免疫滴度的試驗(yàn)組比低免疫滴度的試驗(yàn)組出現(xiàn)的臨床癥狀少，認(rèn)為高免疫滴度比低免疫滴度的Bartha-K61疫苗更能抵抗變異株的攻擊。從文獻(xiàn)的研究結(jié)果來看，PRV變異株的毒力明顯強(qiáng)于經(jīng)典株，這可能是經(jīng)典疫苗無法100%抵抗變異株攻擊的原因；各個(gè)研究所攻毒的PRV變異株大多不一樣，加上攻毒滴度也不相同，雖然同為變異株，但彼此之間毒力有差異，這可能是影響經(jīng)典疫苗免疫效果評(píng)價(jià)的原因之一；所有以接種其他PRV疫苗+攻毒PRV變異株為對照組的文獻(xiàn)的試驗(yàn)結(jié)果，均是以變異株為親本毒株研制的疫苗免疫效果比Bartha-K61疫苗優(yōu)，但在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中使用的疫苗株和攻毒株均為同一株毒株，這可能也是影響經(jīng)典疫苗免疫效果評(píng)價(jià)的原因之一。

Meta分析作為二次研究最好的方法之一，能科學(xué)地反映同一問題的研究結(jié)果，但對于單個(gè)研究的質(zhì)量要求較高，高水平文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)對于Meta分析來說無疑是最可靠的。在本試驗(yàn)納入的文獻(xiàn)中，雖然提及隨機(jī)分組，但并沒有說明是如何隨機(jī)分組的，也沒有提及分配隱藏、盲法、退出與失訪，均屬于低質(zhì)量文獻(xiàn)。在文獻(xiàn)中提到的各種結(jié)局指標(biāo)中，只有少部分提供試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，這對于通過多指標(biāo)進(jìn)行Meta分析來評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果來說無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而且，幾乎所有納入的試驗(yàn)研究中均存在一個(gè)同樣的問題，各組中樣本量過少，最少的只有3頭仔豬，最多的也只有15頭，在計(jì)算置信區(qū)間時(shí)，置信水平相同的情況下(95%CI)，樣本量越少，區(qū)間會(huì)越寬，意味著可信度不高。

Meta分析在人用疫苗評(píng)價(jià)方面被廣泛運(yùn)用，在動(dòng)物研究領(lǐng)域目前可見畜牧領(lǐng)域運(yùn)用較多，還未見用于預(yù)防獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的疫苗評(píng)價(jià)。究其原因有3個(gè)：(1)研究少，質(zhì)量低：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)τ谝呙缑庖咝Ч脑囼?yàn)性文獻(xiàn)較少，同時(shí)現(xiàn)有的文獻(xiàn)按照J(rèn)adad評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)來看，幾乎均為低質(zhì)量文獻(xiàn)；(2)單個(gè)試驗(yàn)設(shè)計(jì)無法統(tǒng)一：由于動(dòng)物種類繁多，各物種需要接種疫苗的疫病也很多，所以至今還沒有一個(gè)統(tǒng)一的對照驗(yàn)證試驗(yàn)設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)，這就導(dǎo)致有很多因素對單個(gè)試驗(yàn)研究造成影響，導(dǎo)致結(jié)果數(shù)據(jù)很難整合，這給Meta分析造成很大的困難；(3)對Meta分析認(rèn)識(shí)少：現(xiàn)在Meta分析已經(jīng)逐步被運(yùn)用在動(dòng)物研究領(lǐng)域，相信在不久的將來也會(huì)在預(yù)防獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域大放異彩。

本試驗(yàn)通過15篇臨床對照試驗(yàn)進(jìn)行系統(tǒng)分析評(píng)價(jià)，得到的結(jié)論有4個(gè)：(1)經(jīng)典疫苗Bartha-K61 對PRV變異株可以提供免疫保護(hù)，保護(hù)率達(dá)到80%以上；(2)高滴度的Bartha-K61疫苗對PRV變異株免疫效果更好；(3)Bartha-K61疫苗對PRV經(jīng)典株的免疫保護(hù)可以達(dá)到100%；(4)以PRV變異株為親本研制的疫苗對親本株的攻毒保護(hù)效果優(yōu)于Bartha-K61疫苗。

綜上所述，在針對PRV變異株的疫苗沒有全面普及的情況下，依然可以選擇Bartha-K61進(jìn)行免疫。