‘鳳丹’牡丹PoERF113基因的克隆及表達(dá)分析

魏禎禎，宋程威，郭麗麗，郭琪，侯小改

‘鳳丹’牡丹基因的克隆及表達(dá)分析

魏禎禎，宋程威，郭麗麗，郭琪，侯小改*

(河南科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471023)

為克隆‘鳳丹’()花瓣衰老相關(guān)基因的序列，分析其編碼蛋白性質(zhì)，探索其在不同發(fā)育時(shí)期花瓣、不同組織和不同品種的表達(dá)模式及對(duì)乙烯的響應(yīng)，采用RT–PCR技術(shù)，從‘鳳丹’牡丹中克隆到花瓣衰老相關(guān)基因。該基因?qū)儆贏P2/ERF家族，其開(kāi)放閱讀框(ORF)為636 bp，編碼1個(gè)由211個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白，含有1個(gè)AP2保守結(jié)構(gòu)域，不包含跨膜結(jié)構(gòu)，蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為53 000，理論等電點(diǎn)(pI)為5.13，為不穩(wěn)定蛋白，具有親水性；qRT–PCR分析結(jié)果表明，基因在露色期、初開(kāi)期、半開(kāi)期、盛開(kāi)期、始衰期、衰敗期均有表達(dá)，主要在‘鳳丹’露色期的花瓣和葉片中表達(dá)；在早花‘鳳丹’突變株系中表達(dá)量最高；基因在早花‘鳳丹’突變株系與‘鳳丹’中的序列相同，不存在堿基差異；基因?qū)σ蚁┯许憫?yīng)，其表達(dá)量隨處理時(shí)間和生育進(jìn)程的延長(zhǎng)呈逐漸升高的趨勢(shì)，推測(cè)該基因可能與乙烯誘導(dǎo)后導(dǎo)致花衰老進(jìn)程相關(guān)。

‘鳳丹’牡丹；；基因克??；表達(dá)分析

基因?qū)儆贏P2/ERF轉(zhuǎn)錄因子家族ERF亞家族的B4類，編碼的蛋白含有1個(gè)由58個(gè)基因組成的保守AP2結(jié)構(gòu)域，在抵抗大豆疫霉、抵御非生物脅迫、調(diào)節(jié)花衰老、促進(jìn)愈傷組織形成和根生長(zhǎng)等植物發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[1–3]。KHASKHELI等[4]在玫瑰中發(fā)現(xiàn)基因的表達(dá)受乙烯誘導(dǎo)，在萼片、花瓣、雄蕊和雌蕊等大多數(shù)花器官的衰老過(guò)程中表達(dá)量上調(diào)，采用VIGS技術(shù)使基因沉默，加速了玫瑰花的衰老，并且在花衰老過(guò)程中細(xì)胞分裂素含量呈降低的趨勢(shì)，與細(xì)胞分裂素有關(guān)9個(gè)基因()，()，，()，，()，，()和的表達(dá)水平也隨之降低，但這種衰老過(guò)程可以通過(guò)外源細(xì)胞分裂素處理得到恢復(fù)。

牡丹(Andr.)是芍藥科(Paeoniaceae)芍藥屬()植物，原產(chǎn)于中國(guó)，是傳統(tǒng)觀賞植物，被廣泛栽植，觀賞價(jià)值高，市場(chǎng)需求量大[5–6]。目前關(guān)于牡丹花期調(diào)控的研究多注重于通過(guò)栽培、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等手段延長(zhǎng)花期，對(duì)其分子機(jī)制的研究不多[7–10]。本研究以‘鳳丹’花瓣為試驗(yàn)材料，克隆獲得‘鳳丹’基因序列，采用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)PoERF113蛋白的理化性質(zhì)、保守結(jié)構(gòu)域、磷酸化位點(diǎn)、蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)等進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)研究基因的時(shí)空表達(dá)模式與不同花期、不同組織和不同品種的相關(guān)性及對(duì)乙烯的響應(yīng)，并對(duì)基因在早花‘鳳丹’突變株系與‘鳳丹’中的基因序列進(jìn)行比對(duì)，以期為后續(xù)基因的相關(guān)功能研究提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　植物材料

九年生早花‘鳳丹’種植于河南科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)園區(qū)內(nèi)；早花‘鳳丹’突變株系種植于洛陽(yáng)隋唐植物園；晚花‘蓮鶴’種植于洛陽(yáng)國(guó)際牡丹園。

1.2　試驗(yàn)方法

1.2.1總RNA提取及cDNA的合成

取‘鳳丹’葉片、莖、花萼和不同時(shí)期(露色期、初開(kāi)期、半開(kāi)期、盛開(kāi)期、始衰期、衰敗期)的花瓣和用10 mg/L外源乙烯整株噴施圓桃期‘鳳丹’后第1、2、4、8天的花瓣以及早花‘鳳丹’突變株系、‘蓮鶴’半開(kāi)期的花瓣，采用天根RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒(離心柱型)完成總RNA的提取；采用PrimeScript? II 1st Strand cDNA Synthesis Kit獲取cDNA。

1.2.2‘鳳丹’基因的克隆

從前期得到的‘鳳丹’三代全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出基因序列，利用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)基因克隆及實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性引物(表1)。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。50 μL PCR擴(kuò)增體系包括2 μL cDNA模板、1 μL TransStart FastPfu DNA Polymerase、10 μL 5×Trans Start FastPfu Buffer、4 μL dNTP Mixture(2.5 mmol/L)、2 μL 引物–F和2 μL–R(10 μmol/L)、29 μL ddH2O。反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，33個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸7 min。基因PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，采用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒回收目的條帶，與pMD18–T Vector載體連接后轉(zhuǎn)至大腸埃希菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，利用M13引物進(jìn)行普通PCR檢測(cè)，篩選出陽(yáng)性單克隆送至生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。

表1　PoERF113基因克隆及qRT–PCR分析引物

1.2.3‘鳳丹’基因生物信息學(xué)分析

利用Translate(http://web.expasy.org/translate/)對(duì)基因推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行分析；根據(jù)基因的開(kāi)放閱讀框(open reading frame，ORF)，運(yùn)用ProtParam(https://web.expasy.org/ protparam/)分析PoERF113蛋白特性理化性質(zhì)；運(yùn)用在線軟件(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/ cdd/wrpsb.cgi)分析PoERF113蛋白保守結(jié)構(gòu)域；運(yùn)用Protscale(https://web.expasy.org/protscale/)分析PoERF113蛋白親疏水性；運(yùn)用NetPhos(http://www. cbs.dtu.dk/services/NetPhos/)分析PoERF113蛋白磷酸化位點(diǎn)；運(yùn)用TMHHMM(http://www.cbs.dtu. dk/services/TMHMM–2.0/)分析PoERF113蛋白跨膜結(jié)構(gòu)；運(yùn)用SPOMA(https://npsa–prabi.ibcp.fr/cgi– bin/secpred_sopma.pl)和SWISS–MODEL(https:// www.swissmodel.expasy.org/interactive)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。

1.2.4基因的表達(dá)模式分析

根據(jù)測(cè)序所得的基因的ORF序列，通過(guò)Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)行qRT–PCR試驗(yàn)。以基因?yàn)閮?nèi)參基因，使用寶生物工程(大連)有限公司的實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒(TB GreenTM Premix Ex Taq II) 檢測(cè)基因的表達(dá)量，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。

1.2.5數(shù)據(jù)分析

采用2–ΔΔCt法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量[11]；運(yùn)用Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理與分析；運(yùn)用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；運(yùn)用Origin 8.0繪圖。

2　結(jié)果與分析

2.1　‘鳳丹’PoERF113基因的克隆及推導(dǎo)的氨基酸序列

提取‘鳳丹’花瓣的總RNA，經(jīng)凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示條帶明亮、清晰，28S帶的亮度約為18S帶亮度的1.5～2.0倍，RNA質(zhì)量較好(圖1)。

M　DL2000 DNA Marker；1　總RNA。

以‘鳳丹’花瓣為材料提取花瓣組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄后獲得cDNA，利用特異性引物PoERF113–F和PoERF113–R進(jìn)行擴(kuò)增，凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果(圖2)顯示：在約750 bp處發(fā)現(xiàn)1條清晰的特異性條帶，與目的片段預(yù)測(cè)條帶大小一致，該基因長(zhǎng)706 bp。通過(guò)NCBI(National Center for Biotechnology Information)在線工具對(duì)其包含的開(kāi)放閱讀框進(jìn)行分析，ORF為636 bp，編碼211個(gè)氨基酸殘基，ORF序列及推導(dǎo)的氨基酸序列如圖3所示。

M　DL2000 DNA Marker；1　PoERF113基因。

圖3　‘鳳丹’PoERF113基因推導(dǎo)的氨基酸序列

2.2　‘鳳丹’PoERF113蛋白的預(yù)測(cè)分析

2.2.1‘鳳丹’PoERF113蛋白特性分析及保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

利用ProtParam對(duì)候選基因進(jìn)行蛋白特性分析，結(jié)果表明該蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量為53 000，理論等電點(diǎn)(pI)為5.13，脂肪系數(shù)為28.93，不穩(wěn)定系數(shù)為52.83，大于40，表明該蛋白為不穩(wěn)定蛋白。

利用NCBI中CDD(cyclic delay diversity，循環(huán)延遲分集)保守結(jié)構(gòu)域數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)PoERF113蛋白進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)。結(jié)果(圖4)表明，該基因編碼的蛋白具有AP2超家族結(jié)構(gòu)域和特殊的DNA結(jié)合位點(diǎn)，屬于AP2家族一員。

圖4　PoERF113基因編碼蛋白保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果

2.2.2‘鳳丹’PoERF113蛋白親/疏水性預(yù)測(cè)和跨膜結(jié)構(gòu)域分析

運(yùn)用Protscale對(duì)PoERF113蛋白進(jìn)行親疏水性分析，結(jié)果(圖5)顯示，疏水氨基酸(正值)少于親水氨基酸(負(fù)值)，表明該蛋白為親水性蛋白。

圖5　PoERF113蛋白親疏水性預(yù)測(cè)分析結(jié)果

通過(guò)TMHMM對(duì)基因進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)域分析，結(jié)果(圖6)表明，該基因編碼蛋白的1～231位氨基酸定位于細(xì)胞膜表面，推測(cè)PoERF113蛋白可能不包含跨膜結(jié)構(gòu)。

圖6　PoERF113蛋白跨膜結(jié)構(gòu)分析結(jié)果

2.2.3‘鳳丹’PoERF113蛋白磷酸化位點(diǎn)分析

磷酸化主要集中在Tyr(酪氨酸)、Ser(絲氨酸)、Thr(蘇氨酸)殘基上，這些殘基上具有游離的羥基，且本身不帶電荷，磷酸化后的蛋白質(zhì)具有電荷，引起結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)活性的變化。NetPhos預(yù)測(cè)結(jié)果(圖7)表明，基因編碼的氨基酸序列中有19個(gè)Ser位點(diǎn)、10個(gè)Thr位點(diǎn)、4個(gè)Tyr位點(diǎn)。

圖7　PoERF113蛋白磷酸化位點(diǎn)分析結(jié)果

2.2.4‘鳳丹’PoERF113蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析

運(yùn)用SOPMA預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果(圖8)顯示，PoERF113蛋白序列的二級(jí)結(jié)構(gòu)中α–螺旋包含54個(gè)氨基酸，延伸鏈包含29個(gè)氨基酸，β–轉(zhuǎn)角包含12個(gè)氨基酸，無(wú)規(guī)則卷曲包含116個(gè)氨基酸。如圖9所示，PoERF113蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)與二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)結(jié)果保持一致。

圖8　PoERF113蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果

圖9　PoERF113蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果

2.3　‘鳳丹’PoERF113蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析

將基因的氨基酸序列上傳至NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中，采用bBLAST x算法，選擇10條同源性較高的氨基酸序列進(jìn)行多序列比對(duì)分析并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，這10條序列分別為美國(guó)山核桃(，KAG2678378.1)，楊梅(，KAB1217539.1)，大葉櫟(，XP 030937739.1)，蘋(píng)果(，XP 017183622.1)，非洲相思子(，XP 027360534.1)，葡萄(，CBI15759.3)，藤堤(，XP 034672620.1)，南瓜(，XP 021622666.1)，菠菜(，XP 021844726.1)，藜麥(，XP 021731943.1)，利用MEGA X軟件分析‘鳳丹’牡丹基因與其他物種的進(jìn)化關(guān)系，比對(duì)結(jié)果如圖10所示。從圖10可以看出，‘鳳丹’基因與南瓜、菠菜、葡萄的親緣關(guān)系較近，與美國(guó)山核桃、楊梅等植物親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

圖10　‘鳳丹’PoERF113蛋白構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果

2.4　‘鳳丹’PoERF113基因表達(dá)模式分析

為確定基因在‘鳳丹’牡丹花發(fā)育不同時(shí)期花瓣中的表達(dá)情況，利用熒光定量PCR技術(shù)，以基因?yàn)閮?nèi)參基因，測(cè)定其在露色期、初開(kāi)期、半開(kāi)期、盛開(kāi)期、始衰期、衰敗期花瓣的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果(圖11)表明，基因在‘鳳丹’牡丹各個(gè)花發(fā)育階段中均有表達(dá)，且不同花期的相對(duì)表達(dá)量存在差異。在露色期花瓣的相對(duì)表達(dá)量最高，初開(kāi)期花瓣中的相對(duì)表達(dá)量最低。

柱上不同字母示處理間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

為分析基因在組織中的表達(dá)模式，選取同時(shí)期葉片、莖、花萼和花瓣進(jìn)行qRT–PCR，以‘鳳丹’牡丹的花瓣為對(duì)照。結(jié)果(圖12)表明，基因在‘鳳丹’葉片、莖、花萼和花瓣中均有表達(dá)，在 ‘鳳丹’葉片的基因的表達(dá)量極顯著高于莖、花萼和花瓣中的表達(dá)量，說(shuō)明基因主要在葉片中表達(dá)。

柱上不同字母示處理間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

為明確基因的表達(dá)特性，利用qRT–PCR技術(shù)對(duì)早花‘鳳丹’突變株系、早花‘鳳丹’和晚花‘蓮鶴’中基因的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果(圖13)表明，基因在早花‘鳳丹’、晚花‘蓮鶴’的花瓣中均有表達(dá)。在早花‘鳳丹’突變株系的相對(duì)表達(dá)量最高，約為‘鳳丹’的相對(duì)表達(dá)量的4.88倍，約為‘蓮鶴’的相對(duì)表達(dá)量的6.54倍。

柱上不同字母示處理間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

采用10 mg/L的外源乙烯處理‘鳳丹’牡丹花瓣，發(fā)現(xiàn)基因的表達(dá)量隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸上升(圖14)，且表達(dá)量存在顯著差異性?；蛟谔幚淼?天時(shí)相對(duì)表達(dá)量最高，約為處理第1天的10倍，表明基因能被乙烯誘導(dǎo)表達(dá)，推測(cè)基因可能參與了乙烯信號(hào)傳導(dǎo)途徑。

柱上不同字母示處理間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.5　早花‘鳳丹’突變株系及‘鳳丹’PoERF113基因序列比對(duì)

為進(jìn)一步探究基因在花期調(diào)控中的功能，以早花‘鳳丹’突變體花瓣cDNA為模板，采用相同的引物與擴(kuò)增條件進(jìn)行RT–PCR擴(kuò)增，利用DNAMAN 6.0對(duì)基因在自然狀態(tài)下‘鳳丹’和早花‘鳳丹’突變株系中的序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果表明，早花‘鳳丹’突變株系基因與‘鳳丹’的序列不存在差異，2條序列的ORF框完全相同。

3　結(jié)論與討論

APETALA2/ERF(Apetala2/Ethylene–responsive factor，AP2/ERF)轉(zhuǎn)錄因子家族作為最早被鑒定與乙烯響應(yīng)基因相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子，具有高度保守的AP2/ERF結(jié)構(gòu)域，且在植物生長(zhǎng)和發(fā)育中發(fā)揮著不同的功能[12–14]。研究人員在擬南芥、桃、蘋(píng)果等多種植物進(jìn)行了全基因組的鑒定及相應(yīng)功能的研究，在擬南芥中鑒定出122個(gè)AP2/ERF家族成員[15]，在桃中鑒定出131個(gè)AP2/ERF家族成員[16]，在蘋(píng)果中鑒定出259個(gè)AP2/ERF家族成員[17]，在柑橘中鑒定出126個(gè)AP2/ERF家族成員[18]。

本研究通過(guò)克隆得到‘鳳丹’牡丹基因，并對(duì)該基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行了一系列生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)該基因?qū)儆贏P2/ERF家族，編碼蛋白含有1個(gè)AP2保守結(jié)構(gòu)域，不包含跨膜結(jié)構(gòu)，為不穩(wěn)定蛋白，與易萍等[19]鑒定出的芒果基因特征相符?；蛟诼渡凇⒊蹰_(kāi)期、半開(kāi)期、盛開(kāi)期、始衰期、衰敗期均有表達(dá)，但主要在露色期的花瓣中表達(dá)，與玫瑰基因在開(kāi)花的第五個(gè)階段(花朵完全綻放)表達(dá)量達(dá)到高峰的表達(dá)模式不同[4]。前人研究結(jié)果表明，同源基因在不同物種中的時(shí)空表達(dá)既有共性又有差異。蜻蜓鳳梨基因在外葉、心葉、莖、根中均有表達(dá)，但表達(dá)量較低，成熟的根中的表達(dá)量高于幼根，在花器官中表達(dá)量維持在較低水平[20]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，基因在‘鳳丹’的葉片、花瓣、莖、萼片中均有表達(dá)，在葉片中的相對(duì)表達(dá)量最高，在莖中的相對(duì)表達(dá)量最低，這暗示基因可能主要調(diào)控葉片的生長(zhǎng)發(fā)育。

花衰老是一個(gè)高度程序化的過(guò)程，由多方面因素共同作用，伴隨著植物體內(nèi)內(nèi)源激素、自由基代謝、細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)解體和膜系統(tǒng)的降解等一系列生理生化過(guò)程[21]。植物激素可以調(diào)節(jié)植物開(kāi)花進(jìn)程，乙烯、茉莉酸和脫落酸作為植物花衰老促進(jìn)劑，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素類激素發(fā)揮抑制花衰老的作用[22]。乙烯在植物生長(zhǎng)和衰老中起重要作用，在花衰老期間，乙烯的積累成為促進(jìn)植物衰老的關(guān)鍵步驟[23]。研究表明，外源乙烯處理‘洛陽(yáng)紅’切花可以促進(jìn)其內(nèi)源乙烯的生成[24]；對(duì)于乙烯依賴型植物，內(nèi)源乙烯的生成將導(dǎo)致植物花衰老[25]；對(duì)于乙烯不依賴型植物，外源乙烯的應(yīng)用不會(huì)引導(dǎo)其產(chǎn)生大量的內(nèi)源乙烯，但也可以促進(jìn)花衰老[26]。研究表明，擬南芥、蜻蜓鳳梨等多個(gè)物種的同源基因均響應(yīng)乙烯處理。外源乙烯處理6～24 h內(nèi)，擬南芥基因表達(dá)量呈逐漸上升的趨勢(shì)[2]。外源乙烯處理1 h后，蜻蜓鳳梨基因在幼株和成株外葉、心葉、莖中表達(dá)量上升，響應(yīng)乙烯誘導(dǎo)[20]。本研究中用乙烯噴施‘鳳丹’植株，基因?qū)σ蚁┯兴憫?yīng)，處理后，基因表達(dá)量升高，這與AGUSTí等[27]在柑橘()中的研究結(jié)果類似。推測(cè)該基因可能與乙烯誘導(dǎo)后導(dǎo)致花衰老進(jìn)程相關(guān)。

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Cloning and expression analysis ofgene in‘Fengdan’

WEI Zhenzhen，SONG Chengwei，GUO Lili，GUO Qi，HOU Xiaogai*

(College of Agriculture, Henan University of Science and Technology, Luoyang, Henan 471023, China)

To investigate the petal senescence-related geneof ‘Fengdan’ () expression patterns in petals, different tissues and different varieties at different flowering stages and their response to ethylene, we did cloning analyzed its coded protein properties in this study. First, we used RT-PCR technology to clone thepetal senescence related genegene from ‘Fengdan’. The gene belongs to AP2/ERF family. Its open reading frame(ORF) is 636 bp, encoding a protein consisting of 211 amino acid residues. It contains one AP2 conservative domain and does not contain transmembrane structure. The molecular weight of the protein is about 53 000, and the theoretical isoelectric point (pI) is 5.13. It is unstable protein and hydrophilic. The results of qRT-PCR analysis showed thatgene was expressed in the open color stage, the first open stage, the half open stage, the full bloom stage, the first decline stage, and the decline stage, mainly in the petals and leaves of ‘Fengdan’ in the open color stage; The highest expression was found in ‘Fengdan’ mutant strain of Zaohua; The sequence ofgene in the ‘Fengdan’ mutant line of Zaohua was the same as that in ‘Fengdan’ and there was no base difference;gene was responsive to ethylene, and its expression level gradually increased with the extension of treatment time and growth process. It was speculated that this gene might be related to the process of flower senescence induced by ethylene. This experiment laid a preliminary foundation for further study on the function ofgene and its molecular mechanism in peony petal senescence and florescence regulation.

‘Fengdan’;; gene cloning; expression analysis

Q786；S685.11

A

1007-1032(2022)06-0659-07

魏禎禎，宋程威，郭麗麗，郭琪，侯小改．‘鳳丹’牡丹基因的克隆及表達(dá)分析[J]．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2022，48(6)：659–665．

WEI Z Z，SONG C W，GUO L L，GUO Q，HOU X G．Cloning and expression analysis ofgene in‘Fengdan’[J]．Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)，2022，48(6)：659–665．

http://xb.hunau.edu.cn

2022–10–27

2022–11–06

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(U1804233)；河南省創(chuàng)新型科技人才隊(duì)伍建設(shè)工程(202101510003)；河南省中藥材產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(2021–24)

魏禎禎(1996—)，女，河南鄭州人，碩士研究生，主要從事牡丹抗旱栽培與分子生物學(xué)研究，z35089658@163.com；*通信作者，侯小改，博士，教授，主要從事牡丹栽培生理生態(tài)與分子生物學(xué)研究，hkdhxg@haust.edu.cn

10.13331/j.cnki.jhau.2022.06.005

責(zé)任編輯：毛友純

英文編輯：柳正