食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白的表達(dá)與病理學(xué)特征的關(guān)系

劉曉麗 宋偉偉 吳梅珍

（莆田學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，福建 莆田 350000）

食管癌是來源于食管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，我國食管癌的患病率和死亡率占全球55%左右；該病常用治療方法包括手術(shù)治療、內(nèi)鏡下切除術(shù)、放化療等[1]。人體內(nèi)的許多原癌基因可以成為腫瘤的治療靶點(diǎn)（EGFR、HER-2等），針對這些基因突變可以使用生物靶向藥物進(jìn)行治療，故對原癌基因與食管鱗癌的關(guān)系進(jìn)行深入研究，有助于食管鱗癌的診斷、治療和預(yù)后[1]。

L型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體-1（Large neutral amino acid transporter-1 ，LAT-1）是鈉離子非依賴型、主要轉(zhuǎn)運(yùn)大分子的中性氨基酸，是非糖基化的膜蛋白質(zhì)，在大腦、肝臟、骨髓等組織和癌細(xì)胞中大量表達(dá)[2]。受體酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase，RTK）又稱為巨噬細(xì)胞刺激蛋白受體（Recepteur d’origine nanta，RON），它是MET原癌基因家族的一員，其唯一配體是巨噬細(xì)胞刺激蛋白（Macrophage Stimulation Protein，MSP），主要表達(dá)于上皮組織，在傳遞細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外信號方面發(fā)揮生物學(xué)作用[3]。

研究表明，RON的異常表達(dá)是導(dǎo)致胃腸道上皮細(xì)胞惡變的致病因素[3]。因此，本文主要探究食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白的表達(dá)與病理學(xué)特征的關(guān)系，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2020年7月至2022年7月本院收治的食管鱗癌患者113例為研究對象。

納入標(biāo)準(zhǔn)：一般資料完整；所有病例經(jīng)病理確診；符合食管鱗癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會同意批準(zhǔn)；患者同意參加本研究；排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重造血系統(tǒng)疾病和傳染病者；合并心、肺、肝、腎等其他臟器并發(fā)癥者；合并惡性腫瘤和全身感染者；存在認(rèn)知功能障礙和心理問題者。

113例食管鱗癌患者中，女55例，男58例，年齡42-75歲，平均年齡56.25±8.23歲；疾病程度：輕度非典型增生35例，中度非典型增生37例，重度非典型增生41例；組織分化程度：低分化49例，高分化64例；臨床分期：I期22例，II期42例，III期44例，IV期5例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移67例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例。

1.2 方法

1.2.1 LAT-1、RON表達(dá)的檢測

均采用免疫組織化學(xué)染色法對LAT-1、RON表達(dá)進(jìn)行檢測。選取經(jīng)HE染色證實(shí)的癌旁正常組織和食管鱗癌組織的石蠟塊。蠟塊標(biāo)本行5 μ m連續(xù)切片，60℃烤片4 h，切片脫蠟和水化，加0.01 mol·L-1枸櫞酸緩沖液（pH6.4）于高壓鍋中，加熱至噴氣，持續(xù)兩min，室溫冷卻后，蒸餾水沖洗，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，用新鮮配置的3% 雙氧水室溫處理15 min，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，室溫封閉30 min，甩去多余液體，并用吸水紙吸干，滴加兔抗人LAT-1、RON多克

1.2.2 LAT-1、RON陽性表達(dá)的判定 隆抗體，覆蓋全部標(biāo)本，將切片放入濕盒中孵育，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，滴加Envision試劑，覆蓋全部標(biāo)本，37℃保溫箱內(nèi)孵育1 h，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，室溫下顯色，復(fù)染，充分水洗，脫水透明，重型快干膠封片，在高倍顯微鏡下，PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照采用試劑公司提供的陽性切片（試劑盒均購自上海莼試生物技術(shù)有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行）。

陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上可見棕黃或棕褐色顆粒。100×光鏡下取腫瘤實(shí)質(zhì)區(qū)，400×光鏡下隨機(jī)取5個視野。

按照據(jù)染色強(qiáng)度評分：陰性=0，弱陽性=1，中等陽性=2，強(qiáng)陽性=3。染色陽性細(xì)胞數(shù)分為：≤10%（陰性=0），11%-30%（弱陽性=1），31%-50%（中等陽性=2），＞50% （強(qiáng)陽性=3）。當(dāng)兩者分?jǐn)?shù)之和≥3時判定LAT-1、RON為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）對比食管鱗癌組織與癌旁組織間LAT-1、RON蛋白表達(dá)水平；（2）對比不同臨床特征食管鱗癌組織間LAT-1、RON蛋白表達(dá)情況；（3）分析食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達(dá)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 28.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，n（%）表示，χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearnan秩相關(guān)性分析；以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 食管鱗癌組織與癌旁組織的LAT-1、RON蛋白表達(dá)水平對比

LAT-1在癌旁組織中無陽性表達(dá)，但在食管鱗癌組織中有陽性表達(dá)；且食管鱗癌組織LAT-1、RON蛋白陽性率均顯著高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見表1。

2.2 不同臨床特征食管鱗癌組織間LAT-1、RON蛋白表達(dá)情況

食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達(dá)在不同分化程度、臨床TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)均有差異（P＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床特征LAT-1、RON蛋白表達(dá)情況比較[n(%)]

2.3 食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達(dá)相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，在食管鱗癌組織中，LAT-1與RON蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，隨著LAT-1水平上調(diào)，RON水平也與之一起上調(diào)（r=0.364，P＜0.05）。見表3。

表3 食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達(dá)相關(guān)性

3 討論

食管癌是常見的消化系統(tǒng)腫瘤之一，其發(fā)生是一個涉及多個基因異常表達(dá)的多因素、多階段、復(fù)雜的生物學(xué)過程[1]。原癌基因可以成為腫瘤的治療靶點(diǎn)，故對原癌基因與食管鱗癌的關(guān)系進(jìn)行深入研究，有助于食管鱗癌診斷、治療和預(yù)后[1]。

L型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體-1（LAT-1）是非糖基化的膜蛋白質(zhì)，在大腦、肝臟、骨髓等組織和癌細(xì)胞中大量表達(dá)[2,5]。巨噬細(xì)胞刺激蛋白受體（RON）是MET原癌基因家族的一員，其唯一配體是巨噬細(xì)胞刺激蛋白（Macrophage Stimulation Protein，MSP），在傳遞細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外信號方面發(fā)揮生物學(xué)作用[3]。有研究表明，RON的異常表達(dá)是導(dǎo)致胃腸道上皮細(xì)胞惡變的致病因素[6]。

本次研究結(jié)果中LAT-1在癌旁組織中無陽性表達(dá)，但在食管鱗癌組織中有陽性表達(dá)；且食管鱗癌組織LAT-1、RON蛋白陽性率均顯著高于癌旁正常組織。提示LAT-1、RON蛋白的異常表達(dá)在食管鱗癌惡性轉(zhuǎn)變的過程中起著重要作用。另一方面，食管鱗癌組織中LAT-1、RON蛋白表達(dá)在不同分化程度、臨床TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)均有差異。說明LAT-1、RON蛋白的異常表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征顯著相關(guān)。有研究表明，LAT-1在腫瘤細(xì)胞中大量表達(dá)，可能是其提供給這些細(xì)胞快速增殖所需要的必需氨基酸，對惡性腫瘤的不斷增殖起著重要作用[7]。因此，我們猜測LAT-1的高表達(dá)可能是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞快速生長的原因之一。已有研究證實(shí)，RON在人類上皮性腫瘤中，如胃腺癌、食管鱗癌、頭頸部鱗癌及乳腺癌等，有不同程度的高表達(dá)，表達(dá)的陽性率波動于32%-58%之間，這取決于具體的腫瘤類型[8]。本次研究顯示，Spearman軼相關(guān)分析結(jié)果顯示在食管鱗癌組織中，LAT-1與RON蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。提示LAT-1、RON蛋白表達(dá)水平的升高可顯著增加食管鱗癌的增殖能力，進(jìn)一步促進(jìn)了細(xì)胞增殖與分化、抑制凋亡，從而加速了食管鱗癌的發(fā)展進(jìn)程，LAT-1、RON蛋白具有作為食管鱗癌治療特異性靶點(diǎn)的潛力，在食管鱗癌早期診斷、篩選癌前高危個體等方面具有重要的臨床價值。

綜上所述，LAT-1、RON蛋白與食管鱗癌臨床病理特征顯著相關(guān)，并能作為一種新的預(yù)后判斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)，為臨床病情診斷及預(yù)后評估提供參考。