一株蝙蝠輪狀病毒的分離和基因組分析

柴薩薩，馬曉華，趙 靜，宋敬東，李金松，李利利，裴銀輝，段招軍

A組輪狀病毒(RVA)是引起全球<5歲兒童重度胃腸炎以及重癥腹瀉的最主要的病原。RVA感染導(dǎo)致的幼兒死亡人數(shù)每年達(dá)到128 500～215 000[1]。輪狀病毒屬于呼腸病毒目(Reovirales)平滑呼腸病毒科(Sedoreoviridea)輪狀病毒屬，是無包膜二十面體病毒，其基因組由11個(gè)雙鏈RNA片段組成，編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(VP1～4、VP6和VP7)和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1～6)。編碼外層衣殼蛋白的VP7和VP4基因可以獨(dú)立地刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，同時(shí)也決定RVA的G/P型[2]。GP分型是輪狀病毒常用的分型系統(tǒng)，但由于輪狀病毒包含11個(gè)節(jié)段，因此基于VP4和VP7的分型對擁有11個(gè)節(jié)段的RVA不夠完整，輪狀病毒分類小組(Rotavirus Classification Working Group，RCWG)建立了基于11個(gè)基因片段的RVA最新分類和命名系統(tǒng)，RVA的11個(gè)節(jié)段VP7-VP4-VP6-VP1-VP2-VP3-NSP1-NSP2-NSP3-NSP4-NSP5分別對應(yīng)Gx-Px-Ix-Rx-Cx-Mx-Ax-Nx-Tx-Ex-Hx基因型[3]。由于輪狀病毒分節(jié)段的基因組特點(diǎn)，易發(fā)生重配(Reassortment)。當(dāng)來自不同宿主的RV同時(shí)感染同一宿主時(shí)，則可能將RV的11個(gè)節(jié)段包裝為1個(gè)病毒顆粒，則發(fā)生重配。重配的發(fā)生在輪狀病毒的進(jìn)化和多樣性中發(fā)揮重要作用[4]。

蝙蝠是重要的病毒儲(chǔ)存庫，具有豐富的病毒多樣性，其中包含許多對人類具有高致病性的病毒，包括埃博拉病毒、尼帕病毒和狂犬病毒等[5]。隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，病毒宏基因組學(xué)已廣泛用于蝙蝠病毒組的分析，并發(fā)現(xiàn)了大量新病毒[6]。近10多年來，多個(gè)研究報(bào)道了在蝙蝠中檢出輪狀病毒，其中以A組輪狀病毒最為常見，目前已鑒定出20多株蝙蝠RVA毒株[7]，其中包括一些重配毒株。本研究從中國云南省的中華菊頭蝠中分離并鑒定了1株RVA毒株，通過全基因組分析確定其基因型，并對病毒株進(jìn)行了同源性和系統(tǒng)進(jìn)化分析，提示該病毒可能為多宿主來源的重配株。

1 材料與方法

1.1 樣本采集 2016年7月至9月，在中國云南省普洱市江城縣捕獲了84只蝙蝠。解剖蝙蝠并收集肝、肺、脾和腸道內(nèi)容物，用干冰運(yùn)回中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所，儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱待用。本研究遵循相關(guān)法律和根據(jù)中國疾控中心病毒病預(yù)防控制所動(dòng)物倫理相關(guān)規(guī)定。

1.2 樣本處理 剪取0.1 g左右的腸道組織，放入裝有預(yù)冷鋼珠的1.5 mL離心管中，加入1 mL DMEM培養(yǎng)基后用組織研磨儀(信儀-24)研磨3 min，然后7 155×g離心10 min后取上清液；將84份腸道內(nèi)容物按照每個(gè)樣本庫20～30份樣本混合為3個(gè)樣本庫；采用0.22 μm針頭濾器(Millipore，美國)過濾以去除宿主細(xì)胞和細(xì)菌等顆粒物；每個(gè)樣本庫取173 μL懸液加入7 μL的DNase I (Thermo Fisher，美國)和20 μL的10×DNase buffer于37 ℃水浴消化1 h，去除樣本中游離的核酸后立即進(jìn)行核酸提取。

1.4 通過擴(kuò)增蝙蝠的細(xì)胞色素b基因部分片段進(jìn)行蝙蝠種類鑒定 按照上述樣本處理方法研磨肌肉組織后離心取上清直接進(jìn)行提取核酸。采用TAKARA的Premix Taq擴(kuò)增553 bp的片段，并將PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定后送至北京天一輝遠(yuǎn)公司進(jìn)行Sanger測序，測序結(jié)果通過BLAST比對確認(rèn)蝙蝠種類。擴(kuò)增引物：上游引物CytS：ATGACCAACATYCGIAAATCHCAYCC，下游引物CytA：GGAGGAAGTGCAGGGCRAAR-AATCG。反應(yīng)條件：98 ℃ 2 min；98 ℃ 15 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。

1.5 全基因組序列擴(kuò)增 根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果，所獲得的拼接序列設(shè)計(jì)引物對拼接序列進(jìn)行驗(yàn)證和擴(kuò)增，將上述制備的腸道內(nèi)容物懸液提取核酸首先采用SuperScript II Reverse Transcriptase試劑盒(invitrogen，美國)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后采用Premix TaqTM(TaKaRa)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并采用RACE方法擴(kuò)增11個(gè)節(jié)段的末端序列，PCR產(chǎn)物通過1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，將含有目的條帶的PCR產(chǎn)物送至北京天一輝遠(yuǎn)公司進(jìn)行測序。

1.6 序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建 使用DNAStar軟件包中SeqMan子程序?qū)y得的序列進(jìn)行拼接，采用BLAST在線比對工具將序列與GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，使用 RVA 自動(dòng)分型工具(https://www.viprbrc.org/brc/rvaGenotyper.spg?method=ShowCleanInputPage&decorator=reo)對全基因組11個(gè)節(jié)段進(jìn)行分型。在GenBank數(shù)據(jù)庫分別下載11個(gè)節(jié)段的相關(guān)參考序列。利用MEGA10.0軟件對該毒株序列和參考株序列進(jìn)行比對，之后用DNASTAR中MegAlign進(jìn)行序列同源性分析。使用MEGA10.0軟件采用最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，Bootstrap設(shè)置為1 000個(gè)重復(fù)。

1.7 病毒的分離培養(yǎng) 取MA104細(xì)胞鋪于6孔板，細(xì)胞密度為3×105/孔，培養(yǎng)24 h后細(xì)胞達(dá)到70%左右單層細(xì)胞時(shí)接種病毒樣本，首先將上述陽性樣本上清采用0.22 μm濾器過濾，經(jīng)無EDTA的胰蛋白酶(15 μg/mL)和CaCl2(800 μg/mL)活化處理后，接種至鋪好MA104細(xì)胞的6孔板中，吸附2 h，期間每20 min搖晃板子，以使病毒重新分配，棄去液體并用PBS清洗2次，再加入DMEM 2 mL，并加入終濃度為5 μg/mL的無EDTA的胰蛋白酶，放入5% CO2培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，當(dāng)CPE達(dá)80%時(shí)，收集培養(yǎng)的病變細(xì)胞，凍融3次，離心取上清。

1.8 電鏡觀察 收集第3代病變細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，凍融3次，2 000×g離心10 min，取上層清液；取普通碳支持膜銅網(wǎng)(400目)，輝光放電30 s，吸附上清液，磷鎢酸染色，置于Tecnai12透射電子顯微鏡(FEI，荷蘭)中觀察。

1.9 PAGE電泳鑒定 為了表征該病毒株的電泳型，從分離的第5代病毒中提取RNA，取20 μL的RNA樣品加5 μL的RNA上樣緩沖液(非變性)混勻，在10%聚丙烯酰胺凝膠上電泳(PAGE)首先80V的電壓電泳30 min后，調(diào)為70 V電泳6 h，電泳結(jié)束后，取下膠塊，使用碧云天的快速銀染試劑盒進(jìn)行銀染并拍照。

1.10 生長曲線 將MA104細(xì)胞以細(xì)胞密度1×105/孔鋪于48孔板中，培養(yǎng)1 d后，采用上述方法接種病毒，每間隔12 h收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清。參照本實(shí)驗(yàn)室建立的方法合成RotaA-NSP3的引物(RVA-F：5′-ACCATCTACACATGACCCTC-3′；RVA-R：5′-GGTCACATAACGCCCC-3′)和探針(RVAP FAM：ATGAGCACAATAGTTAAAAG-CTAACACTGTCAA)，按照AgPath-IDTM One-step RT-PCR Kit說明書擴(kuò)增，反應(yīng)條件：45 ℃ 20 min；95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)。計(jì)算各時(shí)相病毒的基因組拷貝數(shù)，并繪制生長動(dòng)力學(xué)曲線。

2 結(jié) 果

2.1 全基因組分析和基因型 對采集的84只蝙蝠的肌肉組織中細(xì)胞色素B基因(cytochromeB，Cytb)進(jìn)行PCR鑒定，84只蝙蝠分別屬于2種，包括中華菊頭蝠(Rhinolophusaffinis，R.affinis)17只，小蹄蝠(HipposiderosPomona，H.Pomona)67只。通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，1個(gè)樣本庫中存在11 437條reads與RVA高度同源，拼接序列中包含全部11個(gè)節(jié)段的幾乎全長的輪狀病毒相關(guān)序列，根據(jù)拼接序列設(shè)計(jì)了VP1、VP2和VP3三對特異性引物，采用特異性半巢式RT-PCR篩查所有84份蝙蝠腸道內(nèi)容物樣本，僅1只中華菊頭蝠中檢測到RVA，陽性率為1.19%。采用RT-PCR和RACE方法獲得了該病毒11條基因的全長或幾乎全長序列，其中VP1(3 286 bp)、VP2(2 676 bp)、VP3(2 551 bp)、NSP1(1 580 bp)、NSP2(997 bp)和NSP3(990 bp)獲得全長序列，VP4(2 315 bp)、VP6(1 331 bp)、VP7(1 007 bp)、NSP4(716 bp)和NSP5(614 bp)獲得幾乎全長序列。依據(jù)RCWG建立的基于11個(gè)基因片段的GARV 最新分類和命名系統(tǒng)，該輪狀病毒基因型為：G3-P[3]-I8-R3-C3-M3-A9-N3-T3-E3-H6。將其命名為CHYNC82，規(guī)范化的命名為：RVA/Bat-tc/CHN/CHYNC82/2016/G3P[3]。CHYNC82的11條基因組序列均已上傳至GenBank數(shù)據(jù)庫，序列號(hào)為ON221571-ON221581。

分型結(jié)果顯示，CHYNC82的基因型與我國云南省菊頭蝠發(fā)現(xiàn)的RVA毒株MSLH14的全部11個(gè)節(jié)段的基因型完全相同，而與我國云南省蝙蝠發(fā)現(xiàn)的輪狀病毒MYAS33毒株和泰國腹瀉病人中發(fā)現(xiàn)的THA/MS2015-1-0001毒株除VP4的基因型不同外(MYAS33和THA/MS2015-1-0001均為P[10])，其余10個(gè)節(jié)段的基因型相同；此外，CHYNC82與阿根廷發(fā)現(xiàn)的1株馬的輪狀病毒ARG/E3198毒株除VP6基因型不同外(ARG/E3198的VP6基因型為I3)，其它10個(gè)節(jié)段的基因型也完全相同。到目前為止，這類輪狀病毒基因型的組合報(bào)道較少(表1)。

表1 CHYNC82的基因型及其與其他代表性RVA株的核苷酸序列同源性Tab.1 Genotype of CHYNC82 and its nucleotide sequence homology with other representative RVA strains

2.2 同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析 與相近的其他參考RVA毒株進(jìn)行同源性比較，CHYNC82的11個(gè)節(jié)段同源性為83.3%～98.1%，多數(shù)節(jié)段與蝙蝠來源的輪狀病毒株MYAS33和MSLH14同源性最高，但部分節(jié)段與來源于人和靈長類的輪狀病毒株同源性最高。見表1。

2.2.1 結(jié)構(gòu)蛋白的同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析 VP7糖蛋白和VP4刺突蛋白具有特異的抗原表位，均可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生中和抗體，決定輪狀病毒的G/P基因分型。同源性分析結(jié)果顯示，CHYNC82的VP7與猿猴的RRV株、泰國清邁分離的人罕見CMH222株和蝙蝠MSLH14株具有類似的同源性，分別為90.2%、90.1%和90.0%；系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，CHYNC82作為外源支與3株人的RVA(CMH222株、CMH079株和QUI-140-F1株)處于同一進(jìn)化分支，核苷酸序列同源性為89.0%～90.4%(表1，圖1)。CHYNC82的VP4基因與人CMH222株的同源性最高，為94.6%；系統(tǒng)發(fā)育樹也顯示CHYNC82與CMH222株聚在一起，處于同一進(jìn)化支的還有山羊GRV株和蜜袋鼯SG33株(同源性87.4%～90.5%)(表1，圖1)。

RVA的中間層由VP6基因組成。同源性分析顯示，CHYNC82的VP6與狗和貓的RVA同源性最高，分別為83.3%和83.1%，其次為人的CMH222和泰國腹瀉病人的MS2015-1-0001株相近，同源性分別為82.0%和81.1%。系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示，CHYNC82的VP6基因作為外源支與人CMH222株、FRNM株、MS2015-1-0001株以及蝙蝠MSLH14株聚為同一進(jìn)化分支(表1，圖1)。

RVA的核心層由VP1、VP2和VP3三個(gè)基因節(jié)段共同組成。同源性分析顯示CHYNC82的VP1基因與蝙蝠MYAS33株同源性最高，為98.1%，其次是猿猴TUCH株，同源性為92.2%；系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，CHYNC82的VP1基因與蝙蝠MYAS33聚為一支。而VP2基因與猿猴TUCH株和人09US7118株親緣關(guān)系近，同源性均為91.5%，且系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示作為外源支與這兩株病毒聚為一簇；VP3基因與人MS2015-1-0001株同源性最高，為92.8%，系統(tǒng)發(fā)育樹也顯示CHYNC82與人MS2015-1-0001株聚為同一分支，然后與蝙蝠MSLH14株和MYAS33株聚為一個(gè)大的分支(核苷酸序列同源性91.2%～91.6%)(表1，圖1)。

注：●標(biāo)注為本研究發(fā)現(xiàn)的病毒株；黑色方框?yàn)榕cCHYNC82處于同一進(jìn)化支同源性最高的毒株。圖1 CHYNC82結(jié)構(gòu)蛋白基因組的進(jìn)化分析Fig.1 Evolutionary analysis of the CHYNC82 structural protein genome

2.2.2 非結(jié)構(gòu)蛋白的同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析 RVA的5個(gè)基因片段編碼5～6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1～5/6)。同源性分析顯示CHYNC82的NSP1基因與人MS2015-1-0001株及蝙蝠LZHP2和MSLH14株具有相近的核苷酸同源性，為87.9%、87.3%和87.1%。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，NSP1基因與蝙蝠MYAS33、YSSK5、MSLH14株處于同一分支，然后與人MS2015-1-0001株和猿猴TUCH株聚為一個(gè)大的分支。NSP2、NSP3和NSP4基因均與MYAS33株同源性最高，分別為94.4%、93.1%和88.3%；系統(tǒng)發(fā)育樹也顯示這3個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白與蝙蝠來源輪狀病毒聚在一起。NSP5基因與人MS2015-1-0001株同源性最高，為92.8%；系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，CHYNC82與人MS2015-1-0001株和蝙蝠MSLH14株聚為一個(gè)分支(表1，圖2)。

注：●標(biāo)注為本研究發(fā)現(xiàn)的病毒株；黑色方框?yàn)榕cCHYNC82處于同一進(jìn)化支同源性最高的毒株。圖2 CHYNC82非結(jié)構(gòu)蛋白基因組的進(jìn)化分析Fig.2 Evolutionary analysis of the CHYNC82 nonstructural protein genome

2.3 抗原位點(diǎn)分析 輪狀病毒VP8*是與宿主受體結(jié)合的區(qū)域，對VP8*序列比對分析發(fā)現(xiàn)，在9個(gè)重要的抗原結(jié)合位點(diǎn)(R101、V144、K146、Y155、G187、Y188、Y189、S190、T191)中，CHYNC82與人CMH122病毒株的全部9個(gè)位點(diǎn)均相同，而與來自泰國腹瀉病人的MS2015病毒株只有5個(gè)位點(diǎn)(R101、K146、Y189、S190、T191)相同。研究表明VP8*的第189位氨基酸是唾液酸受體結(jié)合至關(guān)重要的位點(diǎn)。當(dāng)蝙蝠的LZHP2病毒株的189位點(diǎn)為半胱氨酸(C189)時(shí)則不能結(jié)合唾液酸，而突變?yōu)椤癈189Y”后，則可以與唾液酸結(jié)合[9]。本研究發(fā)現(xiàn)CHYNC82的189位點(diǎn)為“Y”，且人輪狀病毒和部分蝙蝠輪狀病毒相同。見圖3。

圖3 CHYNC82與相關(guān)病毒VP8*重要抗原結(jié)合位點(diǎn)分析Fig.3 Analysis of important VP8* antigen binding sites between CHYNC82 and related viruses

2.4 病毒的分離、培養(yǎng)與鑒定 將陽性樣本接種至輪狀病毒易感MA104細(xì)胞，初次傳代，48 h后觀察到輕微的CPE，細(xì)胞變圓，胞內(nèi)顆粒增加，細(xì)胞變暗、脫落。在72 h至96 h細(xì)胞完全脫落(圖4A、C)。采用針對輪狀病毒VP6抗原的膠體金進(jìn)行定性檢測，結(jié)果為陽性。

注：A為病毒培養(yǎng)72 h的細(xì)胞對照；C為病毒培養(yǎng)72 h的CPE；B和D為電鏡下觀察的RVA顆粒；E為毒株RVA/Bat-tc/CHN/CHYNC82/2016/G3P[3]的PAGE分析。圖4 CHYNC82感染的細(xì)胞培養(yǎng)及在電鏡下觀察到的典型RVA顆粒Fig.4 Cell culture of CHYNC82 infection and typical RVA particles observed under an electron microscope

將CHYNC82病毒株接種至MA104細(xì)胞后，每12 h收取細(xì)胞培養(yǎng)液上清測定病毒生長動(dòng)力學(xué)，使用TaqMan real-time qPCR進(jìn)行病毒定量。結(jié)果表明病毒由12 h的4×103copies/μL增殖至60 h的3×106copies/μL(圖5)。

圖5 CHYNC82毒株的生長動(dòng)力學(xué)Fig.5 Growth kinetics of the CHYNC82 strain

為觀察該毒株的形態(tài)學(xué)，收取MA104細(xì)胞感染的第3代細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行電鏡觀察，可見典型的輪狀病毒顆粒(圖4B、D)。從MA104細(xì)胞培養(yǎng)物中提取該病毒RNA，然后進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和銀染，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該病毒具有A組輪狀病毒典型的4-2-3-2基因遷移模式(圖4E)。

3 討 論

輪狀病毒是重要的胃腸道病原體，主要通過糞口途經(jīng)傳播，是引起全世界嬰幼兒急性重癥胃腸炎和腹瀉的主要原因，目前尚無特效治療藥物[1]。輪狀病毒是一類人獸共患病原體，其中A組輪狀病毒具有廣泛的宿主分布，可以感染包括人類和許多動(dòng)物的幼崽，包括馬、貓、狗、猴子、老鼠、牛、豬、蝙蝠和鳥類等[10]。據(jù)報(bào)道，2010年在肯尼亞的果蝠中首次發(fā)現(xiàn)蝙蝠輪狀病毒，該病毒與已知病毒差別較大[11]。此后，我國科學(xué)家在云南蝙蝠中發(fā)現(xiàn)1株重配株MSLH14，而且證實(shí)該病毒能夠跨種傳播，且可能經(jīng)歷了多次重配[10]。迄今為止，已檢測并報(bào)告了超過20種蝙蝠RVA株，至少存在7種不同的基因型[7],其中重配在基因多樣性中扮演重要角色。在本研究中，我們從中國云南省的1只中華菊頭蝠的腸道組織中分離了1株RVA毒株，并對該病毒的進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行了研究。

對該病毒11個(gè)節(jié)段的序列分析發(fā)現(xiàn)，CHYNC82的VP1、NSP2、NSP3和NSP4與蝙蝠RVA的MYAS33和MSLH14株同源性最高且聚為一支，MYAS33株具有罕見的P[10]基因型[12]。CHYNC82的VP6和NSP1與已知病毒同源性較低，僅為83.3%和87.9%，但與蝙蝠和人來源輪狀病毒具有共同進(jìn)化起源，而CHYNC82的VP2與人09US7118株和猿猴TUCH株親緣關(guān)系最為相近。研究指出，人09US7118株是一株猿猴來源并通過跨種傳播而感染人類的[13]。猿猴TUCH株被認(rèn)為是由人和不明來源的基因重配而產(chǎn)生的非典型猿猴RVA毒株，且其VP2基因被認(rèn)為與人DS-1樣輪狀病毒起源于共同祖先[14]。

值得注意的是，CHYNC82的VP7、VP4、VP3和NSP5均與人類病毒株，包括CMH222株和MS2015-1-0001株具有最近的親緣關(guān)系。研究指出，CMH222株被認(rèn)為是山羊GRV株和猿猴RRV株跨種傳播后基因重配產(chǎn)生[15]，而CHYNC82的VP4基因與山羊GRV株也處于同一進(jìn)化樹枝，同源性僅次于CMH222，且GRV也屬于G3P[3]基因型，而MS2015-1-0001的每一個(gè)基因節(jié)段都似乎起源于蝙蝠，可能是由蝙蝠直接向人類進(jìn)行種間傳播[16]。上述結(jié)果提示CHYNC82可能已發(fā)生跨種傳播到人和猿猴，亦或可能是由人、猿猴、蝙蝠來源或跨種的RVA多重重配產(chǎn)生的重配株。CHYNC82的多個(gè)節(jié)段與不同宿主來源的輪狀病毒均有高度同源性，這類現(xiàn)象可能是由于跨種傳播產(chǎn)生，但也可能是由于趨同進(jìn)化產(chǎn)生。而本研究中最為相近的宿主來源主要為人、猿猴和蝙蝠，因此更趨于跨種傳播后的重組導(dǎo)致。

輪狀病毒VP4刺突蛋白在感染過程中，首先要將VP4蛋白通過胰酶作用切割為VP5*和VP8*，進(jìn)而激活輪狀病毒的感染，VP8*是與宿主受體結(jié)合的關(guān)鍵區(qū)域。輪狀病毒是否具有跨種傳播的能力，與受體的跨種結(jié)合能力有關(guān)。前期研究表明突變VP8*的重要抗原結(jié)合位點(diǎn)可以導(dǎo)致蝙蝠輪狀病毒獲得人的受體結(jié)合能力，而人的第189位氨基酸突變則導(dǎo)致病毒失去受體結(jié)合能力，而不發(fā)生紅細(xì)胞凝集[9]。本研究將CHYNC82陽性樣品用濃度為15 μg/mL胰蛋白酶進(jìn)行活化后，接種至MA104細(xì)胞。初次傳代后細(xì)胞出現(xiàn)輕微病變，隨著傳代次數(shù)的增加，病變越來越明顯。另外，有研究在Marc145和BFK細(xì)胞中也成功分離蝙蝠A組輪狀病毒[17]。CHYNC82是否具有感染人類的能力需要近一步的研究確定。

重配的發(fā)生有助于輪狀病毒的高度遺傳多樣性。與已知的蝙蝠RVA相比，CHYNC82基因組包含的片段與人和其他哺乳動(dòng)物RVA病毒株的片段密切相關(guān)，這表明CHYNC82可能是因種間傳播而產(chǎn)生的一株源自人和其他哺乳動(dòng)物RVA株的重配RVA株。因此，為了更好地控制和預(yù)防人類RVA感染，對動(dòng)物(包括野生動(dòng)物)中的RVA進(jìn)行調(diào)查和監(jiān)測是有必要的，這也有助于我們了解RVA在自然界的進(jìn)化。

利益沖突：無