羔羊大腸桿菌病的診斷要點(diǎn)及防治措施

司天桃，張夢(mèng)圓，李文彩，王克文，李 文

新疆維吾爾自治區(qū)哈密市畜牧工作站（哈密市農(nóng)村生態(tài)工作站），新疆哈密 839000

大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌感染而引起的一種急性細(xì)菌性傳染病[1]，羔羊感染后臨床特征主要表現(xiàn)為腹瀉、敗血癥。成年羊感染后，大多呈局部性感染，給養(yǎng)殖者造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

1 羔羊大腸桿菌病的發(fā)生和傳播

大腸桿菌是一種中等大小的革蘭氏陰性桿菌，屬于腸桿菌科埃希氏菌屬，該菌對(duì)外界環(huán)境的抵抗力較弱，一般常用的消毒藥劑或55 ℃加熱15 min 均可將其殺死[3]。此病原菌大量存在于外界環(huán)境中，此病的發(fā)生與氣候環(huán)境驟變、營(yíng)養(yǎng)短缺、圈舍潮濕、臟亂等有關(guān)。大腸桿菌是條件性致病菌，一般不顯示致病性，只在氣候驟變、忽冷忽熱等環(huán)境條件刺激下，該病原菌在機(jī)體內(nèi)大量繁殖，加之羊只抵抗力下降，引起內(nèi)源性傳染。大腸桿菌病也可經(jīng)過(guò)消化道、產(chǎn)道或臍帶感染[4]。大腸桿菌菌型復(fù)雜多樣，一種動(dòng)物可以感染不同血清型的大腸桿菌，不同地區(qū)的同一品種的羊只感染的菌型也有所差異，大多數(shù)動(dòng)物的特定疾病都是由1個(gè)至多個(gè)主要血清型的大腸桿菌所致，因其復(fù)雜多樣，又具傳染性，若得不到及時(shí)防控，會(huì)給養(yǎng)殖戶造成巨大的損失[5]。

2 診斷要點(diǎn)

2.1 臨床診斷

根據(jù)臨床特征，該病分為敗血型和腸型。

1）敗血型主要是大腸桿菌侵入血液中，并大量繁殖，引發(fā)菌血癥，繼而又產(chǎn)生大量毒素，毒素隨血液至全身組織器官，對(duì)臟器、器官功能造成損害，引發(fā)敗血癥。敗血型主要發(fā)生于2～6 周齡的羔羊，潛伏期可長(zhǎng)可短，主要取決于羔羊的單次感染量和實(shí)際抵抗力。感染后的羔羊主要表現(xiàn)為體溫升高，達(dá)41～42 ℃，精神萎靡，視力倒退，頭常向一側(cè)傾斜，喜獨(dú)臥，磨牙，口吐白沫，關(guān)節(jié)疼痛，呼吸困難，進(jìn)而導(dǎo)致昏迷，通常發(fā)病后24 h 內(nèi)死亡[6]。

2）腸型主要為大腸桿菌在消化道內(nèi)大量繁殖，腸道微生物菌群平衡失調(diào)，產(chǎn)生毒素，腸黏膜破損脫落，出現(xiàn)炎癥[2]。該型多發(fā)于2～8日齡的新生羔羊。發(fā)病初期，病羊體溫可升高至40～41 ℃，食欲下降，隨之出現(xiàn)腹瀉，呈灰白色稀糊狀，并夾帶有氣泡，偶見混有血液。隨疾病的變化發(fā)展，腸壁較薄，腸黏膜脫落，血管極易破裂，糞便中帶血液。病羊表現(xiàn)為腹痛、精神萎靡，嚴(yán)重虛弱脫水、喜臥、有時(shí)出現(xiàn)痙攣，不能站立。如未得到及時(shí)救治，可在發(fā)病后24～48 h 內(nèi)死亡，死亡率高達(dá)50%[7]。

2.2 病檢特點(diǎn)

敗血型主要在羔羊的胸、腹腔和心包內(nèi)出現(xiàn)大量纖維素性滲出液[8]，肘、腕關(guān)節(jié)腫大，且內(nèi)有纖維素性膿性絮片和混濁的滑液；腦膜充血且伴有少許出血，常有腦溝膿性滲出物。腸型主要病因在消化道，真胃內(nèi)乳凝塊發(fā)酵，腸黏膜水腫充血、出血，小腸黏膜內(nèi)混有血液和氣泡，腸系膜淋巴結(jié)切面腫脹充血，伴有出血?？梢娎w維素化膿性關(guān)節(jié)炎，肺瘀血或有輕度炎癥。

2.3 實(shí)驗(yàn)室診斷

1）樣品采集處理。在無(wú)菌條件下，采集病亡或發(fā)病羔羊的臟器、糞便組織，儲(chǔ)藏備用。挑取適量采集的樣品組織，分別進(jìn)行分離培養(yǎng)，觀察菌落生長(zhǎng)情況及其特征。一般培養(yǎng)基平板上會(huì)出現(xiàn)表面光滑、濕潤(rùn)，呈半透明狀、明顯凸起的黃色或者白色的圓形菌落。再次挑取培養(yǎng)生長(zhǎng)的單個(gè)菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，備用。

2）鏡檢涂片。在無(wú)菌條件下，分別挑取適量采集的樣品組織，分別制成涂片，并進(jìn)行革蘭氏染色，然后鏡檢觀察涂片，可發(fā)現(xiàn)病死和發(fā)病羔羊的臟器、糞便組織涂片中存在大量革蘭氏陰性桿菌。

3）病菌16S rRNA 序列分析。對(duì)分離培養(yǎng)備用的病菌進(jìn)行DNA 提取，并將分離菌株DNA 作為模板，設(shè)計(jì)引物和序列，確定PCR 反應(yīng)體系，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物后，送生物工程有限公司進(jìn)行測(cè)序。然后，利用BLAST 分析測(cè)序結(jié)果，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，并對(duì)該病原菌的同源性進(jìn)行比對(duì)。

4）LAMP 技術(shù)。蔡樹東等[9]發(fā)現(xiàn)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）是一種恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)[10]，它與傳統(tǒng)的PCR 技術(shù)相比，具有時(shí)間短、靈敏性高、特異性強(qiáng)、產(chǎn)物易檢等特點(diǎn)。該技術(shù)可通過(guò)2 對(duì)特異性引物對(duì)目的序列的6 個(gè)區(qū)域退火雜交，利用BstDNA聚合酶的催化作用，在恒溫（60～65 ℃）條件下，溫育30～60 min，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)序列的批量擴(kuò)增[11]。該技術(shù)可直接通過(guò)肉眼觀察其是否有白色焦磷酸鎂沉淀產(chǎn)生來(lái)判斷該病菌，也可通過(guò)添加羥溴化乙淀（EB）、基萘酚藍(lán)（HNB）、鈣黃綠素或SYBRGreenI 等熒光染料進(jìn)行顯色觀察來(lái)判斷。

3 防治措施

3.1 加強(qiáng)科學(xué)飼養(yǎng)管理

科學(xué)的飼養(yǎng)管理技術(shù)是防治大腸桿菌病的有效方法。根據(jù)羔羊的營(yíng)養(yǎng)需求，合理喂養(yǎng)，制定科學(xué)的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和方法，以促進(jìn)羔羊健康和正常發(fā)育，防止因營(yíng)養(yǎng)缺乏而發(fā)病。加強(qiáng)飼養(yǎng)衛(wèi)生，建立良好的生長(zhǎng)環(huán)境，做好圈舍清潔衛(wèi)生。圈舍內(nèi)溫度過(guò)低過(guò)高，潮濕，氨氣、二氧化碳濃度過(guò)高，都能降低羔羊皮膚黏膜的抵抗力而誘發(fā)此病，因此圈舍內(nèi)一定要做到通風(fēng)良好、空氣清爽，光照充足，冬季保溫防寒，夏季涼爽防暑，防止此病發(fā)生。飼養(yǎng)初生羔羊，除應(yīng)保證圈舍有適當(dāng)?shù)臏囟韧猓M早使其吃到初乳，提高幼羔羊母源抗體和免疫球蛋白的水平，增強(qiáng)幼羔羊抗病能力[12]。

3.2 做好引進(jìn)種羊的檢疫、防疫工作

自繁自養(yǎng)不僅可以避免購(gòu)買帶病羊只，也有利于羔羊的飼養(yǎng)，引進(jìn)種羊不能從疫區(qū)購(gòu)買，確實(shí)需要引入種羊時(shí)，要對(duì)買入的羊只進(jìn)行隔離檢疫1～2個(gè)月，確定健康無(wú)病后，才能與原來(lái)的羊只進(jìn)行混養(yǎng)；隔離檢疫期間，應(yīng)針對(duì)此病進(jìn)行預(yù)防接種，以提高羊只免疫力。

3.3 建立合理的防疫制度

羊場(chǎng)（羊圈）應(yīng)建設(shè)在遠(yuǎn)離公路、村鎮(zhèn)、工廠、學(xué)校的地方；羊場(chǎng)內(nèi)的生產(chǎn)區(qū)和生活區(qū)應(yīng)分開；入口應(yīng)設(shè)消毒池和更衣室，羊場(chǎng)工作人員和飼養(yǎng)員需更換工作服和鞋后才可進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)。飼養(yǎng)員要使用固定的用具和設(shè)備，不能混用。工作服、鞋和用具要經(jīng)常消毒清洗，保持清潔。工作人員要定期及時(shí)更換消毒池內(nèi)的消毒藥水，保證有效消毒濃度。禁止在生產(chǎn)區(qū)屠宰、解剖病羊，隨意亂扔、亂放死亡病羊。

3.4 進(jìn)行圈舍消毒制

羊圈消毒的目的是為了殺滅外界環(huán)境中存在的各種病原體，也是切斷病原菌傳播途徑的一項(xiàng)有效措施。因此，在進(jìn)行羊圈消毒時(shí)，要根據(jù)圈舍的大小、墻壁、地面的結(jié)構(gòu)、病原體的種類及其對(duì)外界環(huán)境的抵抗力，選擇適用的消毒藥物種類、消毒方法及消毒藥的劑量，然后均勻地噴灑羊圈的墻壁、護(hù)欄、地面等。消毒完畢后要用清水清洗飼料槽，以除去消毒藥味。

3.5 按時(shí)預(yù)防接種疫苗

在母羊懷孕期或羔羊出生后，按接種程序接種相關(guān)疫苗，間接或直接使羔羊獲得免疫抗體，從而防止病菌的感染和傳播。

3.6 做好檢疫

掌握羊群健康水平、了解羊群疫情動(dòng)態(tài)和防治是檢疫工作的主要目的。檢疫人員要對(duì)原有羊只進(jìn)行定期檢疫，從外地引進(jìn)羊只時(shí)應(yīng)進(jìn)行臨時(shí)檢疫（變態(tài)反應(yīng)、血清學(xué)試驗(yàn)及臨床觀察等）。及時(shí)調(diào)查本地民間或牧場(chǎng)羊只中的疫情，有助于分析此病的流行趨勢(shì)，這些對(duì)及時(shí)做好大腸桿菌病防疫工作十分重要。

3.7 阻斷傳染源

當(dāng)發(fā)生羔羊大腸桿菌病時(shí)，要及時(shí)阻斷傳染源，創(chuàng)造良好的圈舍環(huán)境條件。首先，應(yīng)做好羊群圈舍環(huán)境消殺工作，勤通風(fēng)、勤打掃，及時(shí)清理圈舍中的糞便，避免糞便等排泄物污染飼料和飲水，所有設(shè)備及羊只的活動(dòng)場(chǎng)所及時(shí)進(jìn)行定期消毒。同時(shí)，為了避免出現(xiàn)病原菌對(duì)消毒劑的抗性，應(yīng)交替使用不同消毒劑。其次，在養(yǎng)殖過(guò)程中要勤觀察，若發(fā)現(xiàn)疑似病例，應(yīng)將其隔離并對(duì)其給予治療，及時(shí)對(duì)圈舍進(jìn)行徹底消毒，避免擴(kuò)大疫情。

3.8 病羊的尸體處理

掩埋、焚燒、加工利用等是處置病羊尸體的有效方法，可根據(jù)其各自優(yōu)缺點(diǎn)、具體情況和處置條件進(jìn)行選擇。

3.9 病羊糞便的處理

病羊的糞便中通常含有大量病原體，必須妥善處理。病羊糞便的處理方法主要有燒毀、化學(xué)藥品處理和堆積發(fā)酵。其中，經(jīng)過(guò)數(shù)個(gè)月的堆積發(fā)酵后，可消滅病原體且不損耗肥料，因此，堆積發(fā)酵法最為常用。燒毀或化學(xué)藥品處理，既要花費(fèi)經(jīng)費(fèi)，又會(huì)損失大量有價(jià)值的肥料，并且通常不能消滅病原體，因此很少使用此方法。

4 藥物治療

治療該病要做到早診斷、早治療。常用藥物有：氯霉素15 mg/kg，靜脈或肌肉注射，2 次/d；新霉素0.6 萬(wàn)單位/kg，內(nèi)服或肌注，2～3 次/d；多粘菌素，1 萬(wàn)單位/kg，肌肉注射，2 次/d；黃連素，內(nèi)服0.5～1.0 g，3 次/d；硫酸黏菌素預(yù)混劑，內(nèi)服0.005～0.010 g/kg，2～3 次/d。同時(shí)，應(yīng)注意補(bǔ)充葡萄糖和維生素，保護(hù)胃腸黏膜、調(diào)整胃腸機(jī)能等。此中藥方也可治愈該病：生山藥50 g；白術(shù)15 g；黃連、茯苓、白頭翁、訶子肉、白芍各10 g；秦皮、山萸肉各12 g；甘草6 g；干姜5 g；煎汁300 mL，每只病羔羊灌服10 mL，2 次/d，連用3 d。

5 結(jié) 語(yǔ)

想要有效防治羔羊大腸桿菌病，必須掌握其發(fā)病原因和傳播及診斷要點(diǎn)，根據(jù)臨床診斷或?qū)嶒?yàn)室診斷，準(zhǔn)確診斷該病。結(jié)合實(shí)際情況，采用“綜合防治”措施，加強(qiáng)檢疫和飼養(yǎng)管理、按時(shí)接種疫苗、做好圈舍消毒、做好病羊尸體和糞便的處理等；嚴(yán)禁引進(jìn)病羊，阻斷傳染源，防患于未然。通過(guò)以上防治措施，可有效防治羔羊大腸桿菌病的發(fā)生與傳播。但因此病抗藥性較強(qiáng)，在藥物治療前應(yīng)進(jìn)行病菌藥敏試驗(yàn)，以達(dá)到更高的治療效果。