高效液相色譜法測定保健食品中非法添加紅地那非等化學藥物

寧 煒

（山西省檢驗檢測中心，山西太原 030000）

近年來，隨著社會快速發(fā)展，廣大人民群眾的生活水平有了很大的提高，對許多中成藥和保健品的需求量越來越大[1-4]。保健食品是適宜于特定人群食用，具有調(diào)節(jié)機體功能，不以治療疾病為目的的食品[5-6]。某些不法商家受利益驅(qū)使，在保健食品中添加化學藥物，消費者在不知情的情況下服用，會對人體健康造成嚴重危害[7-8]。國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2009030 詳細規(guī)定了抗疲勞、增強免疫力類保健食品中非法添加紅地那非等11 種化學藥物的檢測方法[9-10]。試驗以此為依據(jù)，以綠源程海螺旋藻片為樣品進行了分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

綠源程海螺旋藻片，麗江格林斯通食品有限公司提供（批號：20130102）；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純），DikmaPure 提供；三乙胺，天津市光復精細化工研究所提供；磷酸（分析純），北京化工廠提供；實驗室用水為超純水；其他化學試劑均為分析純，廣州化學試劑廠提供。

11 種非法添加物：伐地那非鹽酸鹽（純度99.2%）、偽伐地那非（純度99.5%）、豪莫西地那非（純度99.2%）、氨基他達拉非（純度99.9%）、那莫西地那非（純度99.9%）、西地那非鹽酸鹽（純度100%）、他達拉非（純度99.7%）、那紅地那非（純度99.8%）、紅地那非（純度99.7%）、羥基豪莫西地那非（純度99.8%）、硫代艾地那非（純度99.5%），均由TLC Pharmachem.Inc 提供。

1.2 儀器與設(shè)備

儀器：Waterse 2695 高效液相色譜儀HPLCBSP-01；檢測器：二極管陣列檢測器，波長230 nm；色譜柱：C18色譜柱250 mm×4.6 mm，5 μm；流動相：A：磷酸三乙胺溶液；B：甲醇-乙腈=1∶7；C：磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈=8∶46∶46；流速1.0 mL/min ；柱溫35 ℃。

儀器條件見表1。

表1 儀器條件

1.3 試驗方法

1.3.1 混合標準溶液的制備

（1）伐地那非鹽酸鹽標準儲備液。準確稱取0.011 67 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（2）偽伐地那非標準儲備液。稱取0.013 52 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（3）豪莫西地那非標準儲備液。稱取0.014 73 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（4）氨基他達拉非標準儲備液。稱取0.017 43 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（5）那莫西地那非標準儲備液。稱取0.013 45 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（6）西地那非鹽酸鹽標準儲備液。稱取0.014 85 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（7）他達拉非標準儲備液。稱取0.014 48 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（8）那紅地那非標準儲備液。稱取0.014 45 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（9）紅地那非標準儲備液。稱取0.014 25 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（10）羥基豪莫西地那非標準儲備液。稱取0.014 21 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（11）硫代艾地那非標準儲備液。稱取0.012 24 g，置于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

混合標準溶液：分別吸取上述溶液各1 mL置于25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。

分別準確吸取不同體積的混合標準溶液，將其稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.2，0.5，1.0，2.0，10.0 μg/mL的混合標準溶液，作為標準系列溶液。

1.3.2 標準曲線的繪制

在上述色譜條件下，取混合標準溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，并繪制標準曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線繪制

在1.2 和1.3.1 條件下，依次進樣10 μL 進行分析，在1.0～50.0 ng/mL 線性范圍內(nèi)，以目標化合物的峰面積為縱坐標（Y），以質(zhì)量濃度（X，ng/mL）為橫坐標，通過Multiquant 軟件進行標準曲線的繪制。

11 種非法添加違禁藥物的標準曲線見表2。

表2 11 種非法添加違禁藥物的標準曲線

由表2 可知，在1.0～50.0 ng/mL 線性范圍內(nèi)，各物質(zhì)標準曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。

2.2 方法學驗證

2.2.1 精密度試驗

對經(jīng)檢測不含非法添加化學藥物的空白樣品（紅牛維生素功能飲料）進行精密度試驗，取適量樣品，置于50 mL 量瓶中，加入適量標準溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。

精密度試驗結(jié)果見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果

由表3 可知，該方法精密度良好。

2.2.2 重復性試驗

取適量樣品研細，稱取2 g 樣品6 份，分別置于50 mL 量瓶中，加入適量標準溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取上述溶液各10 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

重復性試驗結(jié)果見表4。

表4 重復性試驗結(jié)果

結(jié)果表明該方法重復性良好。

2.2.3 加標回收率試驗及檢出限和定量限的測定

取適量樣品研細，稱取2 g 樣品9 份，分別置于50 mL 量瓶中，加入適量標準溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。

加標回收率試驗及檢出限和定量限的測定見表5。

表5 加標回收率試驗及檢出限和定量限的測定

結(jié)果表明11 種非法添加化學藥物的回收率介于87.16%～116.91%，相對標準標準偏差（RSD）為0.02%～2.10%（n=6），滿足日常檢測的要求。

2.3 樣品檢測

取適量樣品研細，稱取2 g，樣品3 份，分別置于50 mL 量瓶中，加入適量標準溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。按照1.3 所示試驗方法進行檢測，未發(fā)現(xiàn)樣品中有試驗所選的11 種非法添加物存在。

3 結(jié)論

對選取的保健食品樣品進行了包括線性、精密度、重復性、回收率、檢出限、定量限在內(nèi)的方法學驗證。驗證結(jié)果均符合要求，證明該方法適用于抗疲勞、增強免疫力類保健食品中非法紅地那非等11 種化學藥品的篩查和定量檢測，樣品中未檢出非法添加物成分。雖然試驗所選樣品中未檢出非法添加物，但不能保證市售其他中成藥及保健食品中不存在化學藥物的非法添加情況，廣大患者需謹慎使用保健產(chǎn)品，建議購買正規(guī)知名廠家產(chǎn)品，對于服后立即見效的產(chǎn)品需警惕化學藥物的加入，同時相關(guān)執(zhí)法部門需加大、加重對非法添加行為的打擊力度，凈化市場環(huán)境，促進中藥類等保健品行業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展，保證老百姓安全。