• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    分子生物學檢測技術在我國進出境植物檢疫中的應用及展望

    2017-07-13 05:21金光耀莊黎萍
    安徽農業(yè)科學 2017年2期
    關鍵詞:植物檢疫展望應用

    金光耀 莊黎萍

    摘要 綜述了目前國際植物檢疫上常用的實時熒光定量PCR技術、DNA條形碼技術的發(fā)展和技術特點,分析了這2種技術在進出境植物檢疫中的應用現(xiàn)狀、存在不足以及技術局限性,并對分子生物學檢測技術在我國進出境植物檢疫中的應用前景做了展望。

    關鍵詞 植物檢疫;分子生物學技術; 應用; 展望

    中圖分類號 S41-3 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611(2017)02-0100-03

    Abstract Development,technical features of realtime fluorescent quantitative PCR and DNA barcode in the entryexit plant quarantine inspection were reviewed.We analyzed the present situation of the application,shortcomings and limitations of those two technologies in entryexit plant quarantine of China.The application of molecular biological technique in entryexit plant quarantine of China were prospected.

    Key words Plant quarantine;Molecular biology technology;Application;Prospect

    隨著現(xiàn)代生物技術的不斷進步,特別是分子生物學檢測技術的發(fā)展,植物檢疫技術得到了極大提升,在病蟲害檢測方面尤為突出。隨著我國國際貿易不斷擴大,特別是加入WTO以來,大量外來有害生物隨貨物流入我國國境,我國進出境植物檢疫面臨著前所未有的巨大挑戰(zhàn)。有害生物檢測鑒定是植物檢疫執(zhí)法中一個重要的環(huán)節(jié),形態(tài)學鑒定作為傳統(tǒng)植物檢疫檢測手段雖發(fā)揮著主導作用,但由于其自身存在諸多缺陷,越來越不適應當前我國進出境植物檢疫執(zhí)法對病蟲害快速、精準鑒定的需求。筆者就目前主流的實時熒光定量PCR技術、DNA條形碼技術在我國進出境植物檢疫中的應用及其對未來植物病蟲害檢測發(fā)展方向產生的影響進行了綜述和分析。

    1 分子生物學檢測技術的發(fā)展

    目前酶聯(lián)免疫吸附技術(EnzymeLinked Immunsorbent Assay, ELISA)已被廣泛應用于植物病毒、真菌、類菌質體等的檢測中[1-2]。隨著生物檢測技術的不斷發(fā)展,從免疫學技術到核酸技術,從核酸探針、RFLP技術到PCR技術,植物檢疫檢測技術正在不斷優(yōu)化,以適應科技進步發(fā)展的需要[3]。以PCR技術、DNA條形碼技術為代表的生物檢測技術已被廣泛應用于農業(yè)、醫(yī)學等領域。

    1.1 實時熒光定量PCR技術

    1985年美國Perkin-Elmer Cetus 公司人類遺傳研究室研究人員發(fā)明了具有劃時代意義的聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR),使體外無限擴增核酸片段成為現(xiàn)實[4]。自PCR技術發(fā)明以來,該技術已被廣泛應用于醫(yī)學診斷、新型農業(yè)、檢驗檢疫、國防軍事、基因工程等領域。隨著PCR技術的不斷推新,傳統(tǒng)的PCR技術由于步驟繁瑣、耗時長、非特異性、致癌物質使用等原因,其應用受到很大限制。1992年提出來一種新型PCR技術——實時熒光定量PCR技術。1996年美國Applied Biosystems公司成功推出該技術[5]。與傳統(tǒng)PCR技術相比,它具有快速、靈敏、特異性強、自動化程度高、重復性好、定量準確等特點。隨著應用的推廣,該技術正在被各行業(yè)認可,特別是在檢驗檢疫系統(tǒng)中,實時熒光定量PCR技術已經被廣泛用于檢測植物病害、蟲害,不僅有效遏制了外來有害生物的入侵,而且在破除對外貿易技術壁壘、解決國際貿易糾紛上發(fā)揮了重要作用。

    1.2 DNA條形碼技術

    DNA條形碼技術是通過對一段標準化基因DNA序列的分析來實現(xiàn)對生物物種準確、快速鑒定的技術。該技術自2003年誕生以來,備受科學界關注,特別是在生物分類學領域已被廣泛采用,并改變了生物分類學的發(fā)展方向。Taulz等于2002年首先提出了DNA分類概念,即以DNA序列為基礎建立物種鑒定體系。隨后在2003年,Hebert等提出建立以線粒體細胞色素氧化酶亞基I(COI)基因5端648 bp的序列多樣性為基礎的條形碼鑒定系統(tǒng),運用COI基因的序列多樣性對全球動物進行編碼,由此形成了成熟的DNA條形碼技術[4]。2004年,國際性合作組織生命條形碼聯(lián)盟建立,旨在開發(fā)出一套完整的條形碼標準流程和構建一個全面的條形碼數(shù)據(jù)庫。DNA條形碼技術很快在植物檢疫中得到應用,如應用DNA條形碼技術對新西蘭邊境截獲的毒蛾和果蠅標本進行重新分析,發(fā)現(xiàn)其與傳統(tǒng)PCR技術相比,具有靈活性、預測價值等優(yōu)勢[6]。國內學者魏書軍等[7]和張桂芬等[8]分別應用DNA條形碼技術對美洲棘薊馬(Echinothrips americanus Morgan)和西花薊馬(Frankliniella occidentalis Pergande)2種入侵性害蟲進行鑒定,均取得了很好的結果,充分展示了DNA條形碼技術在植物檢疫,特別是在外來有害生物物種鑒定方面廣闊的應用前景。

    目前,DNA條形碼技術已在動物、植物、微生物物種鑒定方面得到了應用。雖然該技術具備眾多優(yōu)點,但由于生物物種的多樣性和物種基因間差異等因素,該技術仍有許多不足之處,如假基因的存在、線粒體基因遺傳的固有風險、COI進化速率的差異、種內差異和種間差異的重疊等因素都會對最終結果產生影響,從而造成誤判。另外,基因庫的建立是一個長期過程,同時還涉及基因庫數(shù)據(jù)共享的知識產權專利問題,因此,DNA條形碼技術尚處于開發(fā)階段,離大規(guī)模應用還有段距離。

    2 我國進出境植物檢疫主要檢測技術特點及應用現(xiàn)狀

    2.1 傳統(tǒng)植物檢疫檢測技術

    我國進出境植物檢疫工作涉及植物及其產品或其他檢疫物的現(xiàn)場查驗、實驗室檢測、預防消毒與檢疫處理、疫情監(jiān)測與控制,其中實驗室檢測是植物檢疫過程中的重要環(huán)節(jié),檢測結果的準確與否直接影響到植物檢疫人員的結果判定,其中病蟲草害鑒定是植物檢疫實驗室最主要的檢測項目。形態(tài)學鑒定、免疫學技術是有害生物傳統(tǒng)檢測方法。

    形態(tài)學鑒定一直以來都是最常用的一種植物檢疫檢測技術,形態(tài)學鑒定方法雖然簡便、快速,但也存在以下缺陷:

    ①被用作鑒定的特征如果存在表型可塑性和遺傳可變性將會導致錯誤的鑒定結果。此類情況在進出境植物檢疫中經常遇到,截獲的昆蟲等有害生物由于生存環(huán)境、個體發(fā)育等原因使得個體間產生差異,例如在體色、體長以及其他局部細微特征(如復眼間距、2種特征長度間的數(shù)學關系等)上與鑒定資料描述有出入,導致鑒定人員無法做出正確的判斷。②形態(tài)學鑒定通常是針對生物某一特定發(fā)育階段或者性別才能識別。近年來,在進出境植物檢疫查驗中,截獲了大量外來有害生物樣本,但由于貨物種類、地理差異、運輸方式、除害處理等原因,多數(shù)只能截獲到昆蟲卵塊、幼蟲、蛹,甚至是殘體,利用形態(tài)學鑒定無法進行精確定種,只能分到大類,這樣就會造成在檢疫執(zhí)法中由于判斷依據(jù)不足而無法實施正確檢疫處理的后果,如果其中存在檢疫性有害生物,后果將不堪設想。③形態(tài)學鑒定方法忽略了許多類群中普遍存在的隱存分類單元,如昆蟲分類中對某些分類階元仍存在學術爭議。④形態(tài)學鑒定需要鑒定人員具備扎實的專業(yè)知識?!叭龣z合一”以來,我國進出境植物檢疫有了長足進步,人員隊伍不斷壯大,技術力量持續(xù)提升,但隨著業(yè)務量的快速增加、檢測難度的迅速提升、檢測方法的日益復雜、管理制度的規(guī)范完善,植物檢疫實驗室傳統(tǒng)的工作模式難以適應對植物檢疫檢測技術的更高需求,檢疫人員既要應對繁雜的業(yè)務查驗,又要耗費大量時間、精力從事以形態(tài)學鑒定為主的實驗室檢測工作,致使其難以專心從事、研究實驗室檢測工作[9],這個已成為制約基層進出境植物檢疫實驗室發(fā)展的核心問題。

    自20世紀70年代酶聯(lián)免疫吸附技術發(fā)明以來,免疫學技術作為一項新型分子生物學檢測技術已被廣泛應用于植物病害檢測中,之后相繼衍生出免疫熒光技術、斑點免疫技術、免疫電鏡技術等檢測方法。免疫學技術雖然為植物病害檢測提供了相對準確的檢測結果,但由于檢測周期長、工作量大、試劑盒成本高、抗干擾能力不強等不利因素較多,在植物檢疫檢測領域,免疫學技術正逐漸被PCR技術、DNA條形碼技術所代替。

    2.2 實時熒光定量PCR技術

    隨著我國外向型經濟的發(fā)展,“質量興國、科技興檢”戰(zhàn)略持續(xù)深入推進,基層植物檢疫實驗室有了長足發(fā)展,有害生物鑒定方法也有了較大改變,從傳統(tǒng)的單一形態(tài)學鑒定方法逐漸變成以形態(tài)學鑒定為主,血清學技術、PCR技術等其他新型物種檢測技術為輔的多元化結構方向發(fā)展,其中以實時熒光定量PCR技術為代表的新型有害生物鑒定方法,已經在部分植物檢疫實驗室得到應用,并取得了初步成果。2009年,為應對北美植物保護組織(NAPPO)正式通過的《來自亞洲舞毒蛾疫區(qū)船舶及貨物操作管理指南》(NAPPO植物衛(wèi)生措施區(qū)域標準第33號)對我國對外貿易的嚴重影響,我國檢驗檢疫科研人員運用分子標記技術進行了地理種群分析,最終證明北美種群與亞洲種群明顯分為2支,支持率達100%,成功化解了此次貿易壁壘。2010年,江蘇檢疫局植物檢疫實驗室運用 PCR 方法首次從加拿大輸華油菜籽中檢出十字花科小球腔菌(Leptosphaeriq maculans),并連續(xù)檢測出 5批次,病原菌的檢出率達80%。同年,江蘇檢驗檢疫局植物檢疫實驗室使用特異性引物擴增的方法,從美國進境紫花苜蓿干草中,檢疫出我國禁止進境的檢疫性真菌病害苜蓿黃萎病(Verticillium wilt)。可見, 實時熒光定量PCR技術是我國進出境植物檢疫中不可或缺的高端檢測技術。

    雖然實時熒光定量PCR技術已趨成熟,但在植物檢疫領域的應用還不夠多,主要是由于:①地方經濟、口岸條件、植檢業(yè)務不一,許多口岸植物檢疫實驗室基礎差異較大,具備PCR檢測能力的實驗室較少;②傳統(tǒng)形態(tài)學鑒定較為簡單便捷、易于上手,在植物檢疫檢測中仍是最常用的檢測方法;③相對繁瑣的PCR操作流程無法滿足大量的外來有害生物樣品檢測任務;④我國尚未建立外來有害生物基因庫,對該技術的推廣應用造成了一定影響。

    2.3 DNA條形碼技術

    DNA條形碼是利用基因組中一段公認標準的、相對較短的DNA片段來進行物種鑒定的分子診斷新技術,是近年來生物分類和鑒定的研究熱點。該技術在鑒定物種、發(fā)現(xiàn)新種和隱存種,重建物種和高級階元的系統(tǒng)演化關系等領域具有廣泛的應用前景。 近年來,DNA條形碼技術在我國植物檢驗檢疫中得到普遍應用,取得了不少成果。如昆蟲DNA條形碼試劑盒檢測技術針對我國出入境植物檢疫性及危險性昆蟲的主要類群,選擇合適的目標基因片段,設計通用引物,提高了擴增效率。將目標基因序列上的多態(tài)位點規(guī)律作為物種的鑒定特征(基因條碼特征),為檢疫性物種建立身份證,構建昆蟲基因條碼數(shù)據(jù)庫,用于檢疫性及危險性昆蟲的鑒定。通過比對數(shù)據(jù)庫中的基因條碼特征,可以確定未知昆蟲樣品的分類地位,并準確將其與近似種區(qū)分開來,有效避免了誤判,實現(xiàn)了精準鑒定。

    2.4 分子生物學檢測技術對傳統(tǒng)形態(tài)學鑒定方法仍有依賴性

    形態(tài)學鑒定方法以生物遺傳規(guī)律為標準,對世界生物物種庫的建立起到了決定性作用。雖然近年來實時熒光定量PCR技術等分子生物學檢測技術在有害生物鑒定方面的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn),但形態(tài)學鑒定技術仍具有不可替代性和自身優(yōu)勢。首先,分子生物學檢測技術的基本原理是采用DNA序列比較法,比較的前提是先采用形態(tài)學鑒定方法確定模式標本,因此,分子生物學檢測技術是建立在形態(tài)學鑒定的基礎之上的;其次,相比分子生物學技術,形態(tài)學鑒定仍是快速、簡便的檢測方法,也是我國進出境植物檢疫常用的檢測方法之一。

    2.5 實時熒光定量PCR技術、DNA條形碼技術應用具備的優(yōu)勢及存在問題

    實時熒光定量PCR技術、DNA條形碼技術通過分析物種條形碼序列,不僅可以實現(xiàn)快速、直接地為基于形態(tài)的分類系統(tǒng)提供必要信息,而且可以根據(jù)已知基因條碼進行精確定種,與傳統(tǒng)形態(tài)學鑒定相比具有定位誤差小、人為干擾少、依據(jù)充分可靠、檢測范圍大等優(yōu)勢,非常適合應用于進出境植物檢疫工作,尤其是在有害生物風險分析、處置外來有害生物突發(fā)事件、研究對外貿易技術壁壘、建立檢疫性有害生物基因數(shù)據(jù)庫、開展形態(tài)學鑒定能力驗證、活體非成蟲態(tài)有害生物的物種確認等方面有著不可估量的應用價值。雖然這2種技術已趨成熟,但現(xiàn)階段對于我國進出境植物檢疫工作來說仍存在以下不足:①外來有害生物特別是檢疫性有害生物基因條碼數(shù)據(jù)庫的建立尚處于初始階段,目前只有江蘇檢驗檢疫局植物檢疫實驗室等少數(shù)實驗室開展了相關研究工作,從全國范圍來講尚未形成合力,因此對其應用開展有一定制約性;②實時熒光定量PCR技術、DNA條形碼技術對設施設備要求高、專一性強,投入高且無收益,加上全國各口岸基礎條件不一,全面推廣尚有難度;③分子生物學檢測雖然解決了對專家的依賴性,但由于該技術對操作者的要求較高,需配置相應的專職人員才能開展;④由于此類技術的局限性,假陽性、檢測偏差等問題仍然存在。

    3 分子生物學技術在進出境植物檢疫中的應用前景展望

    分子生物學技術的發(fā)展為進出境植物檢疫檢測技術的進步創(chuàng)造了廣闊的空間,同時也為提高疫情疫病檢出率、有效防控外來有害生物入侵、研究對外貿易技術壁壘談判依據(jù)提供了強有力的技術支撐。隨著我國對外貿易的不斷擴大,進口小麥、油菜籽、大豆、木材等大宗農產品大量涌入我國,跨境電商等新興產業(yè)大行其道。在保障國門生物安全的前提下,進一步提高口岸通關速率,這些對我國進出境植物檢疫工作提出了新的挑戰(zhàn)和要求。實驗室檢測工作作為植物檢疫中必不可少的重要環(huán)節(jié),承擔著重要使命,同時也面臨著巨大挑戰(zhàn)。實時熒光定量PCR技術、DNA條形碼技術作為目前分子生物學檢測常用的2種技術,基本實現(xiàn)了對有害生物的快速、簡便、準確檢測,但分子生物學檢測仍然依賴于傳統(tǒng)形態(tài)學鑒定技術,而形態(tài)學鑒定作為目前我國進出境植物檢疫最主要的檢測方法,仍將是今后我國進出境植物檢疫工作中常用實驗室檢測方法之一。運用實時熒光定量PCR技術、DNA條形碼技術建立完整的外來有害生物物種基因數(shù)據(jù)庫、建立口岸植物檢疫PCR實驗室、完善有害生物檢測技術將成為今后一段時間內我國進出境植物檢疫的重要工作內容之一。隨著技術的不斷進步和試驗程序的持續(xù)優(yōu)化,在不久的將來,分子生物學檢測技術將成為我國進出境植物檢疫中最重要、最常用的技術手段。

    參考文獻

    [1] MONETTE P.葡萄莖尖組培苗中扇葉病毒的酶聯(lián)(ELISA)檢測[J].植物檢疫,1991,5(1):20,21.

    [2] 張成良,張作芳.酶聯(lián)免疫吸附技術:Ⅲ酶聯(lián)免疫吸附法在檢測植物病毒上的應用[J].植物檢疫,1982(3):15-33.

    [3] CHUNG H W.Reverse transcriptase PCR (RTPCR) and quantitativecompetitive PCR (QCPCR)[J].Experimental & molecular medicine,2001,33(S1):85-97.

    [4] 趙光宇,李虎,楊梅林 等.DNA條形碼技術在昆蟲學中的應用[J].植物保護學報,2014,41(2):129-141.

    [5] ARMSTRONG K F,BALL S L. DNA barcodes for biosecurity:Invasive species identification[J].Philosophical transactions of the royal society B,2005,360:1813-1823.

    [6] 黃海泉.實時熒光定量PCR技術在植物檢疫中應用的研究進展[J].湖北農業(yè)科學,2012,51(1):5-8.

    [7] 魏書軍,馬吉德,石寶才,等.我國新入侵外來害蟲美洲棘薊馬的外部形態(tài)和分子鑒定[J].昆蟲學報,2010,53(6):715-720.

    [8] 張桂芬,孟祥欽,萬方浩.西花薊馬檢測鑒定技術研究進展[J].生物安全學報,2011,20(1):81-88.

    [9] 詹國輝,樊新華,顧忠盈.基層動植物檢疫實驗室發(fā)展的思考[J].植物檢疫,2009,23(S1):67-70.

    猜你喜歡
    植物檢疫展望應用
    大寧縣:開展農業(yè)“植物檢疫宣傳月”活動
    陽泉市 開展農業(yè)植物檢疫知識培訓
    新增農業(yè)植物檢疫性有害生物——馬鈴薯金線蟲
    國內外森林生物量碳儲量估測現(xiàn)狀存在問題及展望
    國內延續(xù)性護理現(xiàn)狀及展望
    “展望” ——阿倫德
    av福利片在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美性感艳星| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产在线免费精品| 三级国产精品片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 日韩一区二区三区影片| 性高湖久久久久久久久免费观看| 99热6这里只有精品| 色视频在线一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 美女内射精品一级片tv| 一本大道久久a久久精品| 一区二区三区四区激情视频| 久久6这里有精品| 性色avwww在线观看| 久久久久久久精品精品| 亚洲av福利一区| 欧美日韩精品成人综合77777| 91久久精品电影网| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲久久久国产精品| 99久久精品一区二区三区| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美丝袜亚洲另类| 久久久久久久久久久免费av| 国产毛片在线视频| 在线播放无遮挡| 另类亚洲欧美激情| 国产午夜精品一二区理论片| 人人妻人人看人人澡| 人妻一区二区av| 高清视频免费观看一区二区| 色5月婷婷丁香| 久久av网站| 夫妻性生交免费视频一级片| 22中文网久久字幕| 午夜av观看不卡| 三级经典国产精品| 免费看光身美女| 91精品一卡2卡3卡4卡| 中国美白少妇内射xxxbb| 十八禁网站网址无遮挡 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品.久久久| 精品酒店卫生间| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久久国产精品麻豆| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲成色77777| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| h日本视频在线播放| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品国产露脸久久av麻豆| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲欧美精品自产自拍| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日本黄大片高清| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 少妇人妻一区二区三区视频| 成人国产麻豆网| 女人精品久久久久毛片| 一级毛片 在线播放| 精品久久久久久久久av| 欧美3d第一页| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品久久久久成人av| 丰满少妇做爰视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 下体分泌物呈黄色| 国产视频内射| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲国产精品国产精品| 国产成人精品一,二区| 久久婷婷青草| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产毛片在线视频| 波野结衣二区三区在线| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 成年人免费黄色播放视频 | 日本色播在线视频| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日本午夜av视频| 草草在线视频免费看| 精品午夜福利在线看| 色视频在线一区二区三区| 黄色视频在线播放观看不卡| 中文字幕免费在线视频6| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 久久久久久久久久成人| 如何舔出高潮| 国产在视频线精品| 精品一区二区免费观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久久国产一区二区| 一级毛片 在线播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| av播播在线观看一区| 久久热精品热| 成人毛片60女人毛片免费| 大陆偷拍与自拍| 国产精品.久久久| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 婷婷色麻豆天堂久久| 在线看a的网站| 精品国产露脸久久av麻豆| 性高湖久久久久久久久免费观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 伦精品一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 精品视频人人做人人爽| 一个人免费看片子| 日日啪夜夜爽| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲av日韩在线播放| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 大香蕉久久网| 亚洲在久久综合| 国产毛片在线视频| 麻豆成人av视频| 在线播放无遮挡| 尾随美女入室| 国产精品久久久久久久电影| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 色94色欧美一区二区| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 观看美女的网站| 久久ye,这里只有精品| 色哟哟·www| 高清av免费在线| 精品久久久久久久久av| 国产精品三级大全| 日韩av免费高清视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 一级片'在线观看视频| 精品午夜福利在线看| 男男h啪啪无遮挡| 99久久精品国产国产毛片| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 亚洲成人一二三区av| 少妇熟女欧美另类| 国产精品国产三级国产专区5o| 女性被躁到高潮视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 午夜老司机福利剧场| 男男h啪啪无遮挡| 性色avwww在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 女性被躁到高潮视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人妻系列 视频| 久热久热在线精品观看| 三级国产精品片| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产亚洲一区二区精品| 超碰97精品在线观看| 在线观看www视频免费| 亚洲av综合色区一区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 在线观看www视频免费| 极品教师在线视频| 国产91av在线免费观看| 少妇精品久久久久久久| 亚洲,欧美,日韩| 国产真实伦视频高清在线观看| av播播在线观看一区| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产精品福利在线免费观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲精品视频女| 男人舔奶头视频| 国产黄频视频在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 久久精品国产自在天天线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品自拍成人| 黄片无遮挡物在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 少妇丰满av| www.色视频.com| 久久久久视频综合| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲国产最新在线播放| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久精品久久精品一区二区三区| 我要看日韩黄色一级片| 大码成人一级视频| 久久久久久伊人网av| 极品人妻少妇av视频| 国产一区二区在线观看日韩| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 日日撸夜夜添| 少妇的逼好多水| 18禁在线播放成人免费| 久久久久网色| 丝袜喷水一区| 亚洲av二区三区四区| 国产 一区精品| 亚洲欧洲日产国产| 一级a做视频免费观看| 亚洲内射少妇av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 午夜影院在线不卡| 男人添女人高潮全过程视频| 国产深夜福利视频在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 久久久久久久大尺度免费视频| 美女视频免费永久观看网站| 嘟嘟电影网在线观看| 精品久久久精品久久久| 久久影院123| 欧美精品一区二区免费开放| 国产 一区精品| 大码成人一级视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 成人国产麻豆网| 高清av免费在线| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产中年淑女户外野战色| 麻豆成人午夜福利视频| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲不卡免费看| 久久这里有精品视频免费| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 观看av在线不卡| 777米奇影视久久| 亚洲欧洲日产国产| 午夜福利视频精品| 亚洲av免费高清在线观看| 一级黄片播放器| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲在久久综合| 久久99一区二区三区| 国产精品无大码| 亚洲国产欧美在线一区| 日本黄色日本黄色录像| 国产免费福利视频在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 日韩三级伦理在线观看| 日本av手机在线免费观看| 老司机影院成人| 国产一级毛片在线| 免费人成在线观看视频色| 在线精品无人区一区二区三| 日本黄大片高清| 欧美日韩在线观看h| 欧美精品国产亚洲| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 欧美丝袜亚洲另类| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av日韩在线播放| 精品国产乱码久久久久久小说| 男女边吃奶边做爰视频| 91精品国产九色| 精品国产露脸久久av麻豆| 一级毛片电影观看| 99热6这里只有精品| www.av在线官网国产| 婷婷色综合大香蕉| 国产亚洲最大av| 丝袜脚勾引网站| 丝袜喷水一区| 色94色欧美一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲综合精品二区| 亚洲图色成人| 久久久欧美国产精品| 久久人妻熟女aⅴ| 美女国产视频在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 国产 精品1| 在线观看人妻少妇| 久久久久国产网址| 亚洲真实伦在线观看| 午夜久久久在线观看| 一级毛片我不卡| 九九爱精品视频在线观看| 内射极品少妇av片p| 久久99精品国语久久久| 午夜久久久在线观看| 春色校园在线视频观看| 亚洲不卡免费看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 美女大奶头黄色视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 在线观看免费高清a一片| 久久久久久久国产电影| 欧美高清成人免费视频www| 男的添女的下面高潮视频| 精品午夜福利在线看| 国产亚洲精品久久久com| av黄色大香蕉| av有码第一页| 日日啪夜夜撸| 精品一区在线观看国产| 午夜激情福利司机影院| 久久久国产欧美日韩av| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 天美传媒精品一区二区| 久久精品国产亚洲网站| 欧美变态另类bdsm刘玥| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 在线观看三级黄色| 精品少妇内射三级| 久久久久久久国产电影| 伦理电影大哥的女人| 欧美日韩视频精品一区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| a级片在线免费高清观看视频| 欧美xxⅹ黑人| 女人精品久久久久毛片| 在现免费观看毛片| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 97超视频在线观看视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 丝袜喷水一区| 国产成人精品久久久久久| 精品久久国产蜜桃| 在现免费观看毛片| 精品视频人人做人人爽| 91久久精品电影网| 欧美国产精品一级二级三级 | 黄色配什么色好看| av播播在线观看一区| 综合色丁香网| 亚洲人成网站在线播| 欧美最新免费一区二区三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久婷婷青草| 亚洲av成人精品一二三区| 在线 av 中文字幕| 精品人妻熟女av久视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 一级,二级,三级黄色视频| 精品一区在线观看国产| 成人二区视频| 亚洲成人av在线免费| 久久久国产一区二区| 亚洲精品第二区| 久久久久国产网址| 日本av免费视频播放| 国模一区二区三区四区视频| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品福利在线免费观看| 黄色毛片三级朝国网站 | 两个人的视频大全免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 一级毛片久久久久久久久女| 自线自在国产av| 男女免费视频国产| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美xxⅹ黑人| 免费av中文字幕在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩av不卡免费在线播放| 91久久精品国产一区二区三区| 中文字幕免费在线视频6| 欧美三级亚洲精品| 日韩强制内射视频| 三上悠亚av全集在线观看 | a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲美女搞黄在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 黄色怎么调成土黄色| 老女人水多毛片| 久久热精品热| 人人澡人人妻人| 亚洲精品国产av蜜桃| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产欧美亚洲国产| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲国产最新在线播放| 99国产精品免费福利视频| 中国三级夫妇交换| 99热6这里只有精品| 久久久久久久久久久免费av| 大码成人一级视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久国产精品麻豆| 国产精品免费大片| a 毛片基地| 伦精品一区二区三区| 久久久久精品久久久久真实原创| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久久国产欧美日韩av| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲国产精品999| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| a 毛片基地| h日本视频在线播放| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久6这里有精品| 亚洲国产精品国产精品| 伊人亚洲综合成人网| 国产精品一区二区在线不卡| 日本91视频免费播放| 亚洲精品视频女| 美女福利国产在线| av视频免费观看在线观看| 成人国产麻豆网| 在线 av 中文字幕| 国产淫语在线视频| 一级,二级,三级黄色视频| 高清不卡的av网站| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品偷伦视频观看了| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 尾随美女入室| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久人人爽人人片av| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产亚洲91精品色在线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 免费大片18禁| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲真实伦在线观看| av不卡在线播放| 十八禁网站网址无遮挡 | 乱人伦中国视频| 男人舔奶头视频| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲性久久影院| 午夜激情久久久久久久| 国产视频内射| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲,一卡二卡三卡| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 丝袜脚勾引网站| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品久久久噜噜| 亚洲天堂av无毛| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久精品免费免费高清| 桃花免费在线播放| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久免费观看电影| 国精品久久久久久国模美| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲精品第二区| 国产av精品麻豆| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 又爽又黄a免费视频| 一区二区三区精品91| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产男人的电影天堂91| 中文字幕制服av| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国模一区二区三区四区视频| 日韩成人伦理影院| 日韩中文字幕视频在线看片| 极品教师在线视频| 日韩人妻高清精品专区| av国产久精品久网站免费入址| 久久亚洲国产成人精品v| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产91av在线免费观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| videossex国产| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲国产精品专区欧美| 丝袜在线中文字幕| 男女边摸边吃奶| 老熟女久久久| 日韩av在线免费看完整版不卡| 色视频在线一区二区三区| 夜夜爽夜夜爽视频| 26uuu在线亚洲综合色| 精品人妻熟女av久视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 黄色怎么调成土黄色| 久久久精品免费免费高清| av免费在线看不卡| 韩国高清视频一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 亚洲国产最新在线播放| 久久鲁丝午夜福利片| 国产高清国产精品国产三级| 精品久久久噜噜| 极品人妻少妇av视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 成人毛片60女人毛片免费| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 不卡视频在线观看欧美| 91久久精品国产一区二区三区| 精品久久久噜噜| 99热网站在线观看| 免费看av在线观看网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲精品日本国产第一区| 精品国产露脸久久av麻豆| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲无线观看免费| 97在线视频观看| 99热这里只有是精品50| 少妇丰满av| 亚洲成人一二三区av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产成人aa在线观看| 国产成人精品无人区| 一本大道久久a久久精品| .国产精品久久| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产成人一区二区在线| 成人特级av手机在线观看| 亚洲第一av免费看| 七月丁香在线播放| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美日韩在线观看h| 日韩一区二区三区影片| a级毛片在线看网站| 国产片特级美女逼逼视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产成人免费无遮挡视频| 国产探花极品一区二区| 9色porny在线观看| 在线播放无遮挡| 激情五月婷婷亚洲| 秋霞伦理黄片| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩电影二区| 一级片'在线观看视频| 免费黄频网站在线观看国产| 日本vs欧美在线观看视频 | av在线观看视频网站免费| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产永久视频网站| 简卡轻食公司| 午夜福利网站1000一区二区三区| 一级毛片我不卡| 欧美区成人在线视频| 好男人视频免费观看在线| 黄色一级大片看看| 国产av国产精品国产| 免费看光身美女| 一级毛片久久久久久久久女| 国产精品不卡视频一区二区| 国产视频首页在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 国产亚洲欧美精品永久| 丝袜喷水一区| 久久久久久久久大av| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 高清毛片免费看| 最新中文字幕久久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 人人妻人人澡人人看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 国产乱人偷精品视频| 亚洲国产精品专区欧美| videos熟女内射| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 观看免费一级毛片| 大码成人一级视频| 亚洲三级黄色毛片| 欧美国产精品一级二级三级 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| av黄色大香蕉| 日韩大片免费观看网站| 国产成人精品一,二区| 国产男女内射视频| 国产在线男女| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲久久久国产精品| 国产高清有码在线观看视频| 久久久国产精品麻豆| 丰满少妇做爰视频| 免费观看在线日韩| 女性被躁到高潮视频| 久久热精品热| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲天堂av无毛| 高清毛片免费看| 日韩大片免费观看网站| 久久狼人影院| 久久ye,这里只有精品| 免费看光身美女| 午夜福利视频精品| 最近中文字幕2019免费版|