食品行業(yè)真菌毒素快速檢測(cè)方法研究進(jìn)展分析

□ 胡松楠 珠海出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心

食品行業(yè)真菌毒素快速檢測(cè)方法研究進(jìn)展分析

□ 胡松楠 珠海出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心

近年來(lái)，隨著人們健康意識(shí)的不斷加強(qiáng)，食品安全問(wèn)題備受我國(guó)居民的關(guān)注，并得到我國(guó)政府部門(mén)的重視，尤其是食品行業(yè)容易致病的真菌霉素，其作為食品安全問(wèn)題引發(fā)的重要源頭之一，及時(shí)被檢測(cè)出才能有效避免食品安全問(wèn)題，故研究食品行業(yè)真菌毒素快速檢測(cè)方法尤為必要。本文分別闡述了免疫學(xué)快速檢測(cè)方法、分子生物學(xué)快速檢測(cè)方法以及生物傳感器快速檢測(cè)方法，以期為食品行業(yè)檢測(cè)人員提供參考。

食品行業(yè)；真菌毒素；快速檢測(cè)方法；進(jìn)展

隨著全球經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，經(jīng)濟(jì)全球化趨勢(shì)日益明顯，食品行業(yè)在全球化經(jīng)濟(jì)的影響下獲得全面發(fā)展，同時(shí)，人們對(duì)于食品行業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量也提出了更高的要求。食品安全問(wèn)題作為全球各國(guó)關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題，得到各個(gè)國(guó)家的重視。相關(guān)資料顯示，近年來(lái)世界各國(guó)發(fā)生的食物導(dǎo)致的疾病，大部分是食品中包含的真菌毒素引發(fā)的，故食品行業(yè)真菌毒素的防控成為控制食源疾病的關(guān)鍵點(diǎn)。目前，我國(guó)已將食品安全置于重要的位置，因而選擇出適宜的快速檢測(cè)方法至關(guān)重要[1]。

1 免疫學(xué)快速檢測(cè)法

1.1 酶聯(lián)免疫吸附快速檢測(cè)法

酶聯(lián)免疫吸附快速檢測(cè)法重在標(biāo)記選定的酶物質(zhì)，借助標(biāo)記酶的催化效能，將底物進(jìn)行全面催化，在最大程度上放大信號(hào)源，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)快速靈活檢測(cè)食品中真菌毒素的目的。在食品行業(yè)真菌毒素整個(gè)快速檢測(cè)過(guò)程中，積極利用抗體與抗原之間的不同特質(zhì)，將酶置于抗體與抗原之間，并確保待測(cè)真菌毒素量與引入酶量達(dá)到一定比例，當(dāng)?shù)孜镌诿傅拇呋饔孟芦@得產(chǎn)生物的量與待測(cè)菌形成一定的關(guān)系時(shí)，只需要對(duì)產(chǎn)生物的量進(jìn)行檢測(cè)，便能定量定性地檢測(cè)出待測(cè)食品中的真菌毒素。該快速檢測(cè)法具備靈敏度高、操作便捷等特點(diǎn)，因此經(jīng)常被用于食品行業(yè)真菌毒素的檢測(cè)工作中，并能夠獲得較為精準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果[2]。

1.2 熒光免疫快速檢測(cè)法

熒光免疫快速檢測(cè)法起源較早，其經(jīng)歷了較長(zhǎng)的發(fā)展與完善期間，且日益趨向于成熟。該快速檢測(cè)法重在依托熒光活性分子作為標(biāo)記物，將標(biāo)記物置于抗體與抗原等標(biāo)記對(duì)象上，在免疫現(xiàn)象形成后，借助標(biāo)記物特有的熒光信號(hào)反映出待測(cè)物的真菌毒素含量。該快速檢測(cè)法具有直觀可視、效果準(zhǔn)確等特點(diǎn)，其具備較為廣闊的應(yīng)用前景。

1.3 免疫膠體金標(biāo)記快速檢測(cè)法

免疫膠體金標(biāo)記快速檢測(cè)法，其利用抗體與抗原之間存在的不同特性作為檢測(cè)原理，通過(guò)抗體與抗原作用使得膠體金變色，進(jìn)而獲得待測(cè)真菌毒素類(lèi)型與數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果。目前，免疫膠體金標(biāo)記快速檢測(cè)法主要包括膠體金免疫層析法及光鏡染色法以及斑點(diǎn)金免疫滲透法。該快速檢測(cè)法將標(biāo)記、層析與免疫檢測(cè)有機(jī)結(jié)合于一體，形成了更為全面科學(xué)的新型快速檢測(cè)方法。

在利用免疫膠體金標(biāo)記快速檢測(cè)法檢測(cè)食品行業(yè)真菌毒素時(shí)，首先將抗原物質(zhì)置于樣膜上，使得抗原物質(zhì)與膠體金標(biāo)記抗體相結(jié)合，在吸水材質(zhì)的作用下沿著試條推進(jìn)，行至檢測(cè)線時(shí)由于抗原與抗體的特異性形成膠體金顆粒下沉，致使檢測(cè)線呈現(xiàn)紅色狀態(tài)。為與抗原結(jié)合的抗體繼續(xù)沿著試條展開(kāi)直至對(duì)照線處，與對(duì)照線上的抗體結(jié)合并形成膠體金顆粒沉積，致使對(duì)照線呈現(xiàn)紅色狀態(tài)，此時(shí)出現(xiàn)雙紅線現(xiàn)象，說(shuō)明待檢測(cè)的食品樣品含有膠體金標(biāo)記的抗原真菌毒素。如果檢測(cè)試條上只顯示一條紅色，則說(shuō)明食品樣品不含有目標(biāo)真菌毒素。

1.4 免疫磁珠快速檢測(cè)法

免疫磁珠快速檢測(cè)法，其運(yùn)用免疫反應(yīng)與磁性分離相結(jié)合的原理，構(gòu)建出免疫學(xué)快速檢測(cè)體系。該快速檢測(cè)法將抗體周?chē)洗胖椋瑢蟮目贵w與抗原進(jìn)行特異性反應(yīng)，進(jìn)而識(shí)別分離出目標(biāo)真菌毒素。該類(lèi)快速檢測(cè)法具備歷時(shí)短、靈敏性強(qiáng)、特異性高等特點(diǎn)，全面縮短了食品真菌毒素的檢測(cè)時(shí)間，精簡(jiǎn)了傳統(tǒng)繁瑣的檢測(cè)程序，因而在食品行業(yè)真菌毒素檢測(cè)工作中得到廣泛應(yīng)用[3]。

2 分子生物學(xué)快速檢測(cè)法

2.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)快速檢測(cè)法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)最早發(fā)明于20世紀(jì)中后期，該技術(shù)經(jīng)過(guò)不斷發(fā)展現(xiàn)已日趨完善。該快速檢測(cè)技術(shù)在反復(fù)應(yīng)用中突顯出操作便捷、特異性強(qiáng)、重復(fù)方便、靈敏性高等優(yōu)點(diǎn)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)屬于染色體體外復(fù)制技術(shù)，其依靠放大復(fù)制的染色體，獲得大量目標(biāo)互補(bǔ)的染色體片段，從而實(shí)現(xiàn)染色體的批量復(fù)制。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)快速檢測(cè)法基本原理分為三個(gè)部分：首先，將確定的染色體模板進(jìn)行加熱；其次，將染色體模板冷卻，并將其與引物互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；最后，給予適宜溫度讓引物延展。通過(guò)這一系列過(guò)程的重復(fù)操作，基因獲得快速擴(kuò)增。該快速檢測(cè)法在食品行業(yè)真菌毒素檢測(cè)中應(yīng)用非常廣泛，效果較理想。

2.2 連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)快速檢測(cè)法

連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)最早研發(fā)于20世紀(jì)末，該技術(shù)經(jīng)過(guò)反復(fù)研究試驗(yàn)逐漸投入各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用中，并獲得相應(yīng)的成效。該快速檢測(cè)法充分依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理，借助染色體連接酶的催化鏈接作用，將確定的模板染色體互補(bǔ)的相鄰兩個(gè)寡核苷酸鏈進(jìn)行鏈接，使得染色體片段迅速增加，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)染色體的大量復(fù)制，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)食品樣品中目標(biāo)真菌毒素的快速檢測(cè)。

2.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)法

21世紀(jì)初，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)首次被提出，該技術(shù)依托4種特殊引物，針對(duì)靶序列上6個(gè)獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行特異性識(shí)別，借助染色體聚合酶的鏈接置換活性，經(jīng)過(guò)相應(yīng)的鏈接置換反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)靶序列的迅速增長(zhǎng)。對(duì)于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)法，其在食品行業(yè)真菌毒素檢測(cè)中具備兩個(gè)階段。第一階段，利用外部引物培養(yǎng)出大量的內(nèi)部引物依托的模板；第二階段，利用內(nèi)部引物引導(dǎo)靶基因片段，并形成靶基因片段的有機(jī)合成。該快速檢測(cè)法能夠在較短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)數(shù)以千倍的增幅。同時(shí)，該快速檢測(cè)法顯現(xiàn)出便捷省力、簡(jiǎn)單易操作、特異性較強(qiáng)、反應(yīng)靈敏等優(yōu)點(diǎn)，因而經(jīng)常被應(yīng)用于食品行業(yè)真菌毒素的快速檢測(cè)[4]。

2.4 滾動(dòng)環(huán)式擴(kuò)增快速檢測(cè)法

滾動(dòng)環(huán)式擴(kuò)增技術(shù)屬于新型的恒溫狀態(tài)下核酸增長(zhǎng)技術(shù)，其原理與噬菌體復(fù)制過(guò)程相似，選擇的模板為環(huán)形染色體，選擇與部分模板染色體互補(bǔ)的較短染色體引物，經(jīng)過(guò)酶的催化作用，將脫氧核苷酸轉(zhuǎn)變成為包含大量能與模板互補(bǔ)的單鏈染色體片段，從而實(shí)現(xiàn)靶核酸基因數(shù)量以及型號(hào)的擴(kuò)增。應(yīng)用滾動(dòng)環(huán)式擴(kuò)增快速檢測(cè)法對(duì)食品樣品進(jìn)行真菌毒素檢測(cè)時(shí)，其可以選擇與模板染色體序列完全一致的引物，經(jīng)過(guò)酶的催化作用，實(shí)現(xiàn)染色體序列的復(fù)制延伸，將其產(chǎn)物作為檢測(cè)的模板，進(jìn)而快速有效、準(zhǔn)確可靠地檢測(cè)出食品樣品中是否含有待檢測(cè)的真菌毒素，以及含有真菌毒素的類(lèi)型及數(shù)量。

3 生物傳感器快速檢測(cè)法

生物傳感器技術(shù)，即將抗體、核酸、酶等生物原有的識(shí)別元素轉(zhuǎn)換成光、熱以及電等可感知信號(hào)，從而建構(gòu)出直觀、全方位分析致病菌的檢測(cè)體系，如熒光標(biāo)記抗體結(jié)合流體細(xì)胞技術(shù)、細(xì)胞檢測(cè)傳感器等。該快速檢測(cè)法常用于檢測(cè)沙門(mén)氏菌、大腸桿菌、李斯特菌以及金黃色葡萄球菌等真菌毒素。生物傳感器快速檢測(cè)法較之其他食品行業(yè)真菌毒素檢測(cè)法，其反應(yīng)更加靈敏、選擇面更大、穩(wěn)定性更佳、成本更低，且能夠適應(yīng)復(fù)雜的反應(yīng)體系，能夠進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)活動(dòng)。

4 結(jié)論

傳統(tǒng)的食品行業(yè)真菌毒素檢測(cè)方法現(xiàn)已無(wú)法有效完成檢測(cè)任務(wù)，因此，我們需要掌握先進(jìn)的食品行業(yè)真菌毒素快速檢測(cè)方法。通過(guò)研究分析，不難發(fā)現(xiàn)免疫學(xué)快速檢測(cè)方法、分子生物學(xué)快速檢測(cè)方法以及生物傳感器快速檢測(cè)方法，能夠快捷、簡(jiǎn)便、靈敏、高效地完成檢測(cè)任務(wù)，故具有極大的研究與推廣應(yīng)用價(jià)值。

[1]周思，肖小華，李攻科.食品安全快速檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J].色譜,2011(7):580-586.

[2]梁祈.中成藥和保健食品中添加鹽酸西布曲明的快速檢測(cè)和確證方法研究[D].廣州:南方醫(yī)科大學(xué),2009(5):43-44.

[3]夏春龍.糧食及其制品中真菌毒素快速檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].糧油食品科技, 2013(3):77-79.

[4]袁景,郭小玉,楊天溪,等.基于光譜技術(shù)的食品中常見(jiàn)真菌毒素的快速檢測(cè)研究進(jìn)展[J].上海師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2015(5):571-578.

胡松楠（1982—），男，天津人，碩士，工程師。研究方向：食品安全檢驗(yàn)。