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    基于量子點(diǎn)技術(shù)的非洲豬瘟抗體現(xiàn)場快速檢測試劑盒(QAIS)研究

    2022-12-30 00:26:04LIJIA-HAO,BAIYUN,LIFANG
    關(guān)鍵詞:紙條豬瘟量子

    非洲豬瘟(African swine feve,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家豬和野豬引起的一種急性、發(fā)熱和高傳染性疾病,死亡率可達(dá)100%,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為需要通報(bào)的動(dòng)物疫病,被我國列為一類動(dòng)物疫病。我國作為世界上生豬養(yǎng)殖與豬肉制品消費(fèi)第一大國,2018 年8 月以來爆發(fā)的非洲豬瘟疫情給我國生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前世界范圍內(nèi)尚無有效疫苗或藥物治療方法,因此早期快速檢測是預(yù)防和控制非洲豬瘟最重要的手段之一。

    目前,基于TaqMan 的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RTqPCR)和酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)是廣泛使用的ASFV 診斷方法,也是歐盟參考實(shí)驗(yàn)室和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)所推薦的診斷方法。這兩種診斷方法的實(shí)施必須借助于實(shí)驗(yàn)室的特殊儀器及專業(yè)技術(shù)人員操作來完成,不能廣泛應(yīng)用于養(yǎng)豬場的現(xiàn)場快速檢測。近年來,隨著非洲豬瘟出現(xiàn)亞急性或慢性感染,基于金納米顆粒、乳膠微球或熒光染料微球的橫向流動(dòng)免疫分析方法等被用于實(shí)時(shí)檢測血清中的ASFV抗體,但其靈敏度和穩(wěn)定性還需要進(jìn)一步提高,而且不能準(zhǔn)確定量血清中ASFV 抗體含量。因此,目前沒有一個(gè)ASFV 血清學(xué)診斷技術(shù)產(chǎn)品能夠滿足早期、敏感、定量現(xiàn)場診斷的需求。

    近日,在《Analytica Chimica Acta》刊登了題為“Rapid and ultra-sensitive detection of African swine fever virus antibody on site using QDM based-ASFV immunosensor (QAIS)”的研究論文,該文章報(bào)道了一種針對ASFV 血清抗體的量子點(diǎn)熒光檢測試紙條,配合手持式熒光免疫分析儀,可實(shí)現(xiàn)對ASFV 抗體進(jìn)行快速、靈敏、特異、簡便、定量的現(xiàn)場檢測。該產(chǎn)品為養(yǎng)殖場提供了快速準(zhǔn)確監(jiān)測非洲豬瘟的解決方案。

    本研究中QDM 與ASFV 抗原P30 和P54 通過化學(xué)反應(yīng)制備的雙重探針經(jīng)過優(yōu)化后顯著提高了ASFV 血清抗體量子點(diǎn)熒光檢測試紙條的檢測敏感性,其檢測限可達(dá)到1∶64 000,高于目前市售的阻斷ELISA 試劑盒和膠體金檢測試紙條50 倍~500 倍。該產(chǎn)品與豬的其他病原,如PRRSV、PRV、PCV2、FMDV、CSFV、HPS(2 型、8 型、10 型)、Mhp、Mhs、Mf、SIV(H3N2)的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清無交叉反應(yīng),具有良好的特異性。本試紙條對151 份臨床樣本(113 份ASF 陰性血清,38 份ASF 陽性血清)的雙盲檢測結(jié)果,其符合率達(dá)到98.7%。該試紙條對ASFV 抗體全程檢測僅需25 min,比常規(guī)ELISA 檢測縮短1 個(gè)多小時(shí),并且在室溫或37 ℃條件下保存4 周后的檢測結(jié)果依舊穩(wěn)定,批內(nèi)和批間重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)(CV 值)均小于8.7%。因此本試紙條具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性,配合手持熒光免疫分析儀可以滿足豬舍現(xiàn)場檢測的要求。

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