超聲檢查聯(lián)合γ-干擾素酶聯(lián)免疫斑點法在附睪結(jié)核診斷中的價值

尹 航，范正超，黃天浩，朱曉黎，劉建震，李崇斌

(河北省胸科醫(yī)院泌尿外科，河北石家莊 050041)

附睪結(jié)核是能夠引起男性不育的生殖系統(tǒng)結(jié)核疾病，也是肺結(jié)核或泌尿系統(tǒng)結(jié)核疾病的常見并發(fā)癥，由于其具有隱匿性、缺乏特異性實驗室血清指標，因此早期診斷困難，嚴重影響患者治療[1-3]。近年來超聲顯像已用于陰囊疾病診斷。高興福[4]認為，彩色多普勒超聲對陰囊疾病有重要的診斷價值，可作為陰囊疾病常規(guī)檢查方法之一。γ-干擾素(interferon γ， IFN-γ)酶聯(lián)免疫斑點法(enzyme-linked immunosorbent spot，ELISPOT)是一種新的檢測結(jié)核診斷方法，臨床已用于結(jié)核病的診斷[5]。劉建華等[6]研究顯示，IFN-γ ELISPOT對附睪結(jié)核的早期診斷具有一定的敏感度和特異性。本研究擬納入46例附睪結(jié)核患者，探討超聲檢查及IFN-γ ELISPOT在附睪結(jié)核診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入本院2018年6月-2019年2月經(jīng)手術(shù)病理確診的附睪結(jié)核男性患者46例為研究對象，年齡20～71歲，平均(45.92±12.42)歲。同期納入因附睪隱痛或陰囊墜脹不適來本院就醫(yī)的非附睪結(jié)核男性患者20例，年齡20～68歲，平均(45.27±12.61)歲。納入標準：①附睪結(jié)核患者經(jīng)結(jié)核抗體檢測及結(jié)核感染T細胞、尿結(jié)核涂片檢測，結(jié)果為陽性；②附睪結(jié)核患者術(shù)后病理檢測證實為附睪結(jié)核；③患者經(jīng)超聲診斷后又接受IFN-γ ELISPOT檢測。排除標準：①男性存在染色體異常者；②患惡性腫瘤者；③肝、腎功能不全者；④合并先天免疫性疾病、生殖器畸形者。本研究受試者知曉，經(jīng)本院倫理委員會討論批準。

1.2 超聲檢查采用Philips iU22超聲檢查儀，設置探頭頻率為7.5～10 MHz，囑咐患者取仰臥位，充分暴露陰囊，然后對患者附睪進行觀察，探查附睪內(nèi)是否有病灶，結(jié)合彩色多普勒超聲檢查，觀察病灶形狀、大小及內(nèi)部回聲特點。

1.3 ELISPOT檢測方法收集入組患者8 mL靜脈血裝于乙二胺四乙酸(EDTAK2)采血管中，在2 h內(nèi)分離出單個核細胞。在ELISPOT培養(yǎng)板中預包被IFN-γ抗體，再注入細胞懸液，懸浮細胞密度為2.5×105，體積為100 μL。設置陽性對照孔和陰性對照孔，其分別加入等體積的植物血凝物和細胞懸浮液。在實驗孔中分別加入PoolB、ESAT-6、PoolA，各溶液濃度均為5 μg/mL。置于培養(yǎng)箱中培訓16～24 h，2 h后加入生物素化抗IFN-γ，孵育1 h，再加入二抗，溫育1 h，加物液顯色。再加入水終止反應，然后分析斑點數(shù)量。

結(jié)果判定：依據(jù)斑點數(shù)量判定，每孔中排除陰性孔中斑點數(shù)，斑點數(shù)≥30為陽性結(jié)果。若 PoolA、PoolB、ESAT-6抗原，至少有1種抗原的檢測結(jié)果是陽性，判定為陽性；若3種抗原的測試結(jié)果都顯示陰性，判定為陰性。

2 結(jié) 果

2.1 附睪結(jié)核超聲表現(xiàn)病理確診的46例附睪結(jié)核病例中，38例經(jīng)超聲診斷為附睪結(jié)核，尾部附睪結(jié)核有27例，頭部附睪結(jié)核有8例，頭體尾均侵犯的附睪結(jié)核有27例。超聲顯示，25例內(nèi)部回聲減低，有較豐富的血流信號；7例陰囊內(nèi)可見不規(guī)則低回聲，血流信號明顯減少或未見血流信號；6例回聲較強且分布不均，散在斑點狀強回聲，未見明顯血流信號。

2.2 超聲檢查聯(lián)合IFN-γ ELISPOT對附睪結(jié)核的診斷價值超聲檢查在附睪結(jié)核診斷中的準確度為84.85%、靈敏度為82.61%、特異度為90.00%；陽性預測值為95.00%，陰性預測值69.23%。IFN-γ ELISPOT診斷附睪結(jié)核42例，IFN-γ ELISPOT在附睪結(jié)核診斷中準確度為87.88%、靈敏度為91.30%、特異度為80.00%；陽性預測值91.30%，陰性預測值80.00%。超聲檢查聯(lián)合IFN-γ ELISPOT在附睪結(jié)核診斷中準確度為90.91%、靈敏度為97.83%、特異度為75.00%；陽性預測值90.00%，陰性預測值93.75%。見表1。

表1 超聲檢查及IFN-γ ELISPOT對附睪結(jié)核診斷價值分析

3 討 論

結(jié)核病是由傳染性病原體引起的疾病，其發(fā)病率逐年增加，中國結(jié)核病每年新增病例占亞洲的55%。肺外結(jié)核以泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核比較常見，泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核是一種較為常見的疾病，可引起泌尿系統(tǒng)器官損傷，臨床表現(xiàn)為尿急、尿頻、尿痛、腰部疼痛、乏力等，由于其癥狀具有非特異性，因此早期診斷困難，易出現(xiàn)誤診，由此延誤最佳治療時機[7]。附睪是與睪丸外側(cè)緊密相連的器官，是一個復雜的管狀網(wǎng)絡，可將睪丸傳出管連接到輸精管。附睪結(jié)核多數(shù)繼發(fā)于泌尿系統(tǒng)結(jié)核，結(jié)核桿菌隨尿液上行感染導致精囊感染、前列腺感染結(jié)核，并沿著輸精管導致附睪頭感染[8]。研究認為，附睪結(jié)核中結(jié)核菌會由腎到前列腺、精阜、輸精管再到附睪，造成附睪有不同程度的結(jié)節(jié)，并導致的附睪結(jié)核多位于附睪尾部，另外經(jīng)肺結(jié)核等其他臟器結(jié)核血行感染傳播引起的附睪結(jié)核患者，不僅要檢查雙腎及肺部，還要檢查其他部位[9]。附睪結(jié)核可造成附睪組織內(nèi)附睪管和附睪外段輸精管完全或部分阻塞，造成患者出現(xiàn)無精或少精的現(xiàn)象，引起男性不育，嚴重時還會引起患者整個附睪壞死，因此附睪結(jié)核在臨床中后遺癥急需重視[10]。在臨床上，有竇道形成、附睪硬結(jié)、皮膚形成粘連、附睪化膿性感染等特異性特征的附睪結(jié)核患者的診斷較為容易；但一些存在非特異性附睪結(jié)節(jié)的患者，早期診斷困難，因此尋找可早期診斷附睪結(jié)節(jié)的臨床方法顯得尤為重要。

ELISPOT及超聲檢查對附睪結(jié)核的早期診斷能提供一定的依據(jù)。ELISPOT是一種新興的結(jié)核檢測方法，操作簡單，具有可重復性。結(jié)核桿菌感染后會激活巨噬細胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子α和白細胞介素6等，活化特異性T淋巴細胞，該細胞再次被結(jié)核桿菌激活后分泌IFN-γ，IFN-γ ELISPOT可用于分析IFN-γ變化情況，并被用于結(jié)核桿菌的篩查工作中[11-12]。ELISPOT檢測原理：特異性抗原刺激T淋巴細胞后分泌的細胞因子會被膜包被的特異性單克隆抗體捕獲后與生物素標記的二抗、堿性磷酸酶的親和素結(jié)合，然后孔底顯示出紫色斑點[6]。ELISPOT也存在不足之處：對檢測條件要求較高，在抗原檢測過程中若有細菌污染，則檢測結(jié)果不準確，且實驗材料費較高，不適合二次操作[13-14]。

附睪結(jié)核的主要病理變化是結(jié)核結(jié)節(jié)形成，組織損壞，損壞的組織形成干酪樣病變；另一個病理變化是附睪結(jié)核鈣化:由于附睪結(jié)核的纖維化導致輸精管道閉塞或狹窄，干酪壞死的附睪組織發(fā)生鈣質(zhì)沉淀，病變部位見斑點狀鈣化灶[15]。附睪結(jié)核超聲診斷具有無創(chuàng)、快速的優(yōu)勢。有研究認為附睪結(jié)核早期血流表現(xiàn)豐富，附睪內(nèi)存在結(jié)核桿菌感染，病變周邊微動脈會出現(xiàn)擴張；隨著病情進展，附睪內(nèi)病灶內(nèi)干酪樣壞死及鈣化形成，病灶區(qū)內(nèi)血流信號表現(xiàn)為減少或無信號[16-17]。有研究顯示，急性期附睪結(jié)核因炎癥反應血流較為豐富，后因附睪內(nèi)出現(xiàn)干酪樣壞死及結(jié)節(jié)鈣化，導致附睪內(nèi)血管組織損傷，引起附睪核內(nèi)血流信號減少[18]。

本研究顯示超聲檢查在附睪結(jié)核診斷中準確度為84.85%、靈敏度為82.61%、特異度為90.00%；ELISPOT在附睪結(jié)核診斷中準確度為87.88%、靈敏度為91.30%、特異度為80.00%；超聲檢查聯(lián)合IFN-γ ELISPOT在附睪結(jié)核診斷中準確度為90.91%、靈敏度為97.83%、特異度為75.00%，提示超聲檢查聯(lián)合IFN-γ ELISPOT對附睪結(jié)核具有一定的診斷價值，可明顯提高單獨超聲檢查對附睪結(jié)核診斷的靈敏度。超聲醫(yī)師雖熟練掌握附睪結(jié)核的聲像圖表現(xiàn)及病理演化過程，但附睪結(jié)核的臨床診斷仍需結(jié)合患者臨床表現(xiàn)及結(jié)核病史，綜合分析，最終診斷需依據(jù)病理結(jié)果。

綜上所述，超聲檢查聯(lián)合IFN-γ ELISPOT對附睪結(jié)核具有較高的診斷價值，能夠為臨床及早治療患者提供依據(jù)。