肅南奶牛乳房炎主要致病菌的分離與鑒定

王婭波

（甘肅省肅南縣牧業(yè)區(qū)劃辦公室，甘肅 肅南 734400）

奶牛乳房炎（bovine mastitis,BM）是一種因機(jī)械性刺激、病原微生物侵入及化學(xué)物理性損傷等因素引起的奶牛乳房實(shí)質(zhì)和間質(zhì)的炎癥綜合性疾病[1-2]。不同國家和地區(qū)奶牛乳房炎的發(fā)病率不同。在我國，因不同地區(qū)飼養(yǎng)管理水平差異，導(dǎo)致奶牛隱性乳房炎的發(fā)病率為13.41%～71.67%[3-4]。奶牛乳房炎根據(jù)奶牛乳汁可否檢出病原菌和乳汁有無肉眼可見變化情況分為臨床型乳房炎和亞臨床型乳房炎（又名隱性乳房炎），同時(shí)，也可根據(jù)奶牛感染的細(xì)菌類型將其分為傳染性乳房炎和環(huán)境性乳房炎[5-6]。

臨床型乳房炎憑借肉眼觀察乳房和乳汁的變化即可判定，其中輕癥乳房炎表現(xiàn)為奶牛乳房腫脹，疼痛或疼痛不明顯，乳汁稀薄、清淡，最初擠出的乳汁有絮狀物，食欲和體溫可能都正常，但產(chǎn)奶量略有下降[1]。患有重癥乳房炎的奶牛則表現(xiàn)為一個(gè)或多個(gè)乳區(qū)患病，患病乳區(qū)呈不同程度充血、腫脹、溫?zé)岷吞弁?，有的還會(huì)出現(xiàn)乳頭皮膚塊狀和大片壞死，產(chǎn)乳量減少或停止，乳汁稀薄并混有膿塊，同時(shí)還會(huì)出現(xiàn)精神不振、食欲減退、心跳加快及全身寒戰(zhàn)，體溫最高可上升到41℃以上，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)眼球下陷、水瀉、大便惡臭、體力衰竭以及臥地不起，直至因敗血癥而亡[1]。亞臨床型乳房炎因癥狀輕微，常被人們忽視，但是該病不僅影響患病牛的產(chǎn)奶量和乳品質(zhì)，還會(huì)延長產(chǎn)后發(fā)情和妊娠時(shí)間，而且容易在牛群中傳播，給奶牛業(yè)造成的損失比顯性乳房炎更大。亞臨床型乳房炎病牛的乳腺組織眼觀上和正常組織雖無明顯差別，但是其奶樣中的許多營養(yǎng)成分和理化性質(zhì)卻已經(jīng)發(fā)生了改變，必須借助外界設(shè)備加以確診[7]。通常以奶樣中體細(xì)胞數(shù)量上升作為確診的主要依據(jù)，當(dāng)牛奶奶樣中的體細(xì)胞數(shù)超過30萬/mL時(shí)就可以判斷為隱性乳房炎[8]，或者在奶樣中分離出細(xì)菌也可以作為確診依據(jù)。

奶牛乳房炎的誘發(fā)原因復(fù)雜，包括機(jī)械組織損傷、奶牛自身原因、飼養(yǎng)環(huán)境管理和病原微生物感染等，其中病原微生物是誘發(fā)該病最主要的原因，也是長期影響奶牛場經(jīng)濟(jì)效益、導(dǎo)致奶牛淘汰率居高不下的主要原因。大部分微生物均能導(dǎo)致奶牛乳房炎，其中細(xì)菌侵入奶牛機(jī)體是引起奶牛乳房炎發(fā)生的主要原因[9-10]，主要致病菌包括金黃色葡萄球菌、鏈球菌及大腸桿菌等。為了解甘肅肅南縣奶牛乳房炎的主要病原菌，本試驗(yàn)從肅南縣奶牛養(yǎng)殖場及農(nóng)戶家中采集奶樣，用北京奶牛乳房炎診斷液（BMT）檢測出陽性樣品進(jìn)行致病菌的分離和鑒定，以便更好地為當(dāng)?shù)啬膛Ｈ榉垦椎姆揽刂委熖峁┽槍?duì)性依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 奶樣的采集與檢測

選擇甘肅肅南5個(gè)規(guī)模奶牛養(yǎng)殖場和13戶奶牛散養(yǎng)農(nóng)戶進(jìn)行奶樣采集。其中，奶牛場每隔一段時(shí)間會(huì)做隱性乳房炎檢測，并將陽性奶牛單獨(dú)隔離。本試驗(yàn)樣品來源于養(yǎng)殖場隔離區(qū)奶牛。

采集樣品前先對(duì)采集者本人的雙手和采集器械進(jìn)行消毒，然后用1%高錳酸鉀對(duì)奶牛乳頭周圍進(jìn)行擦洗消毒，并用紙巾擦干。采集奶樣時(shí)先將前3把奶棄之，每個(gè)乳區(qū)各取2 mL乳汁，分別加入乳房炎檢驗(yàn)盤中，再分別加入1∶4倍稀釋的BMT診斷液2 mL，輕輕搖晃10～30 s后判定結(jié)果并記錄。將BMT檢測出的陽性奶樣保存至放有冰袋的采樣箱中，迅速送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣品中細(xì)菌的分離鑒定[11]。

1.2 主要致病菌的分離

主要致病菌的分離方法參考文獻(xiàn)[11-12]。

1.3 主要致病菌的藥敏試驗(yàn)

將已經(jīng)純化后的細(xì)菌吸取100 μL接種于3 mL的BHI培養(yǎng)液體中培養(yǎng)12 h，再根據(jù)甘肅肅南奶牛場和基層獸醫(yī)的常用藥品種類選擇相應(yīng)的藥敏試紙片進(jìn)行試驗(yàn)。使用Mueller-Hinton（MH）肉湯培養(yǎng)基配成約4 mm厚的平板，將過夜培養(yǎng)好的細(xì)菌使用生理鹽水稀釋至濃度1.5×108CFU/mL。用棉簽蘸取菌液后均勻涂布在平板上，用鑷子夾取藥敏試紙片貼在平板上，隨后將貼好藥敏試紙片的平板放進(jìn)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24 h。

1.4 結(jié)果判定

BMT檢測判定方法如表1。根據(jù)藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)判斷細(xì)菌的耐藥情況如表2。

表1 BMT法結(jié)果判定

表2 藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑判定標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品細(xì)菌分離結(jié)果

運(yùn)用奶牛隱性乳房炎快速診斷液（BMT）共檢測210份奶樣，得到77份乳房炎陽性奶樣。從77份奶樣當(dāng)中分離出共計(jì)118株菌。由表3可知，其中埃希氏菌屬39株，分離率達(dá)到33.05%（39/118）；葡萄球菌屬34株，分離率 28.81%（34/118）；鏈球菌屬 24株，分離率 20.34%（24/118）；腸球菌屬 12株，分離率 10.17%（12/118）；克雷伯氏菌屬 9 株，分離率 7.63%（9/118）。

表3 樣品中主要病原菌分離株鑒定結(jié)果

2.2 主要致病菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表4為藥敏試驗(yàn)結(jié)果，可見甘肅肅南奶牛乳房炎主要致病菌均存在不同程度的耐藥性。

表4 主要致病菌藥敏結(jié)果

3 討論

奶牛乳房炎是導(dǎo)致甘肅肅南奶牛淘汰率高、經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重的重要因素之一。造成奶牛乳房炎的原因主要是致病菌感染，致病菌種類較多。因此，在治療時(shí)應(yīng)根據(jù)該場奶牛乳房炎中感染細(xì)菌的優(yōu)勢菌群進(jìn)行治療，才可以盡可能減少經(jīng)濟(jì)損失。

本試驗(yàn)通過對(duì)甘肅肅南奶牛乳房炎細(xì)菌的分離和鑒定，發(fā)現(xiàn)該地區(qū)患病奶牛乳房炎的主要致病菌以埃希氏菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬以及克雷伯氏菌屬為主，而且均存在不同程度的耐藥性，其主要原因是抗生素濫用。

4 結(jié)論

在實(shí)際生產(chǎn)生活中，應(yīng)當(dāng)減少頻繁單一地使用廣譜抗生素，以避免細(xì)菌耐藥情況的出現(xiàn)，定期給奶牛做體檢，并對(duì)發(fā)病牛的病原進(jìn)行分離和鑒定。選擇聯(lián)合用藥或運(yùn)用抗生素替代療法（中藥、激素等）治療奶牛乳房炎，不僅能夠減少細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，還能夠提高疾病的治愈率。