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    膽固醇?;D(zhuǎn)移酶-1在泛癌中的預(yù)測作用

    2022-12-20 12:59:36戴龍飛楊文奇
    黑龍江醫(yī)藥 2022年22期
    關(guān)鍵詞:基轉(zhuǎn)移酶檢查點負相關(guān)

    戴龍飛,王 旭,柏 濤,陳 博,楊文奇

    安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科,安徽 合肥 230032

    膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶-1(acyl-coenzyme A:cholesterolacyltransferase-1,ACAT1)是一種將膽固醇轉(zhuǎn)換為膽固醇酯的酶,可導(dǎo)致Warburg效應(yīng)和腫瘤生長[1-2]。通過抑制ACAT1表達可增強T細胞效應(yīng)器功能[3]。早有研究[4-6]表明,ACAT1表達水平與大多數(shù)腫瘤預(yù)后相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)提示,ACAT1可能是泛癌患者潛在的預(yù)后標志物。

    腫瘤微環(huán)境是一個復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng),存在于腫瘤發(fā)生發(fā)展的各個階段[7]。許多“癌癥標志”都與腫瘤微環(huán)境有關(guān),包括誘導(dǎo)增殖和抑制細胞凋亡、抑制免疫系統(tǒng)避免免疫監(jiān)測以及激活免疫細胞等[8]。在腫瘤微環(huán)境中鑒定治療靶標可用于治療癌癥[9]。腫瘤細胞通過激活免疫檢查點通路逃避免疫監(jiān)視,而免疫檢查點抑制劑可恢復(fù)抗腫瘤免疫反應(yīng)[10]。腫瘤新抗原具有高度免疫原性,可激活T細胞產(chǎn)生免疫反應(yīng),影響免疫檢查點抑制劑的療效[11]。錯配修復(fù)機制、腫瘤突變負荷和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性相互關(guān)聯(lián),與免疫檢查點抑制劑的敏感性有關(guān),可以用于預(yù)測免疫檢查點抑制劑的治療效果[12-15]。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,可誘導(dǎo)T細胞吸引并增強免疫檢查點抑制劑的功效[16]。

    這項研究中,我們分析了ACAT1基因在泛癌患者中的預(yù)后及免疫作用。通過TCGA及GTEX數(shù)據(jù)庫下載泛癌患者的基因表達數(shù)據(jù)、突變數(shù)據(jù)和臨床生存數(shù)據(jù),通過K-M生存分析探討ACAT1基因在泛癌中的預(yù)后價值。利用TIMER數(shù)據(jù)庫,研究ACAT1基因與腫瘤免疫浸潤的關(guān)系,尤其是膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BLCA)和腎透明細胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)。最后,運用SangerBox分析ACAT1基因與免疫治療的預(yù)測標志物(包括腫瘤新抗原、腫瘤突變負荷、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、錯配修復(fù)缺陷、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶)之間的關(guān)系。本研究的發(fā)現(xiàn)揭示了ACAT1基因在泛癌預(yù)后和免疫浸潤中的重要作用。

    1 材料與方法

    1.1材料

    通過TCGA及GTEX數(shù)據(jù)庫下載泛癌患者的基因表達數(shù)據(jù)、突變數(shù)據(jù)和臨床生存數(shù)據(jù)。

    1.2 方法

    1.2.1 K-M生存分析 繪制Kaplan-Meier曲線分析泛癌中ACAT1基因表達水平與生存率的關(guān)系,包括總生存率(overall survival,OS),疾病特異生存率(disease free survival,DSS),無病生存率(disease-free interval,DFI)和無進展生存率(progression free survival,PFI)。閾值設(shè)置為Cox P值<0.05。探討ACAT1基因表達水平對泛癌的OS、DSS、DFI和PFI的影響。在急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia,LAML)、嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤(pheochromocytoma and paraganglioma,PCPG)、結(jié)腸腺癌(colon adenocarcinoma,COAD)、BLCA、頭頸鱗狀細胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSC)、肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)、肝細胞癌(liver hepatocellular carcinoma,LIHC)、直腸癌(Rectum adenocarcinoma,READ)、KIRC、腎乳頭狀細胞癌(kidney renal papillary cell carcinoma,KIRP)和腦低級別膠質(zhì)瘤(brain lower grade glioma,LGG)中分析ACAT1基因表達與OS、DSS、DFI和PFI的相關(guān)性。計算95%CI的危險比(HR)和對數(shù)秩P值。

    1.2.2 TIMER中ACAT1表達與泛癌免疫浸潤的關(guān)系 TIMER是一個全面的資源數(shù)據(jù)庫,用于系統(tǒng)分析不同癌癥類型的免疫浸潤。用TIMER數(shù)據(jù)庫測定ACAT1基因表達與免疫浸潤的關(guān)系,是系統(tǒng)分析不同癌癥類型免疫浸潤的理想資源。TIMER應(yīng)用統(tǒng)計反褶積方法,從基因表達譜推斷腫瘤浸潤免疫細胞的豐度。TIMER數(shù)據(jù)庫包含了來自TCGA的32種癌癥類型的10 897個樣本,用于評估免疫浸潤的豐度。從TIMER數(shù)據(jù)庫中下載泛癌的6種免疫浸潤細胞的得分數(shù)據(jù),分析基因表達與免疫細胞得分的相關(guān)性。分析ACAT1基因的表達與6種免疫浸潤細胞之間的關(guān)系,包括B細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、中性粒細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞。使用R軟件包estimate分析各個腫瘤樣本的免疫評分和基質(zhì)評分,同時測定ACAT1基因的表達水平與腫瘤純度的關(guān)系。

    1.2.3 Sanger Box Sanger Box工具盒(http://sangerbox.com/)是一款具有多種生物信息分析,可視化作圖和便捷數(shù)據(jù)下載功能的工具。本研究收集了常見的四十多個免疫檢查點基因,利用Sanger Box分析ACAT1基因表達與免疫檢查點基因的關(guān)系,同時分別提取這些免疫檢查點基因,計算與ACAT1基因表達水平的相關(guān)性。此外,本研究還利用Sanger Box分析了ACAT1基因與泛癌患者免疫檢查點抑制劑的預(yù)測標志物(包括腫瘤新抗原、腫瘤突變負荷、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、錯配修復(fù)基因突變、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶)的相關(guān)性。

    1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 利用Kaplan-Meier生存曲線探討ACAT1表達水平與泛癌的預(yù)后的關(guān)系。此外,利用Sanger Box分析ACAT1基因表達與免疫治療的預(yù)測標志物之間的關(guān)系?;虮磉_的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 ACAT1基因在腫瘤組織和正常組織中的差異表達

    通過收集TCGA及GTEX數(shù)據(jù)庫中泛癌組織和正常組織的標本,分析ACAT1基因在不同腫瘤和鄰近正常組織中的差異表達。結(jié)果顯示:在大部分癌癥中ACAT1基因表達水平明顯低于鄰近正常組織,而在多形性膠質(zhì)母細胞瘤(glioblastomamultiforme,GBM)、腦低級別膠質(zhì)瘤(brain lower grade glioma,LGG)和腎嫌色細胞癌(kidney Chromophobe,KICH)中明顯高于臨近正常組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 ACAT1基因在腫瘤組織和正常組織中的差異表達 個

    2.2 ACAT1基因在泛癌中的預(yù)后分析

    利用K-M生存分析進一步評估ACAT1基因與預(yù)后的關(guān)系。ACAT1基因低表達顯著提高了HNSC的OS、DSS、DFI和PFI。ACAT1基因低表達顯著提高了LAML的OS。在PCPG和COAD中,ACAT1基因低表達對其DFI具有保護作用。而在BLCA中,ACAT1基因低表達顯著提高其OS和DSS,但是在KIRP患者中,低ACAT1基因表達對其OS和DSS不利。另外,ACAT1基因顯著降低了READ中的PFI。在KIRC和LGG中,ACAT1基因?qū)S、DSS和PFI均不利。最后研究還發(fā)現(xiàn),ACAT1基因低表達顯著降低了LUAD的DSS和PFI。考慮到以上結(jié)果中HR值僅為0.98,0.99和1.02等,我們對以上腫瘤的ACAT1表達量進行l(wèi)og2轉(zhuǎn)換,轉(zhuǎn)換后發(fā)現(xiàn),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表2 ACAT1基因在泛癌中的預(yù)后分析

    2.3 ACAT1基因與免疫浸潤的關(guān)系

    本研究進一步評估了泛癌中ACAT1基因表達與免疫浸潤水平的相關(guān)性,確定不同腫瘤組織中ACAT1基因的表達是否與6種免疫浸潤細胞(B細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、中性粒細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞)相關(guān)。結(jié)果顯示:與免疫浸潤細胞最顯著相關(guān)的3種腫瘤分別為BLCA、LGG和肉瘤(sarcoma,SARC)。

    本研究還分析了在泛癌中ACAT1基因表達與免疫評分、基質(zhì)評分和綜合評分的關(guān)系。結(jié)果顯示:與免疫評分最顯著相關(guān)的為BLCA、甲狀腺癌(thyroid carcinoma,THCA)和KIRC,與基質(zhì)評分最顯著相關(guān)為LIHC、THCA和KIRC,與綜合評分最顯著相關(guān)為胰腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAAD)、THCA和KIRC?;谝陨习l(fā)現(xiàn),我們選擇KIRC代表當ACAT1基因低表達水平時生存率低的癌癥,而BLCA代表生存率良好的癌癥。對于KIRC,ACAT1基因表達水平與免疫評分(R=-0.319,P=6.21e-14)呈顯著負相關(guān),而對于BLCA,與免疫評分(R=0.336,P=4.04e-12)呈顯著正相關(guān),并且與CD4+T細胞、 CD8+T細胞、巨噬細胞及中性粒細胞的浸潤水平呈顯著正相關(guān)。此外,KIRC中的ACAT1基因表達水平與腫瘤純度呈正相關(guān),而在BLCA中無相關(guān)性。這些發(fā)現(xiàn)有力地表明,在KIRC和BLCA中,ACAT1基因通過與免疫浸潤相互作用而影響患者生存,見表3。

    表3 ACAT1基因與免疫浸潤的關(guān)系 分

    另外,本研究還分析了ACAT1基因與免疫檢查點基因的表達關(guān)系。在乳腺癌(breast invasive carcinoma,BRCA)、 LIHC、 KIRC、 THCA、 KIRP及LUAD中,ACAT1與免疫檢查點基因顯著負相關(guān)。

    2.4 ACAT1基因表達水平與腫瘤新抗原、腫瘤突變負荷(tumormutationalburden,TMB)、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability,MSI)的關(guān)系

    本研究分析了ACAT1基因表達水平與腫瘤新抗原數(shù)量、TMB及MSI的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn),在BRCA中,ACAT1基因表達水平與新抗原數(shù)量顯著負相關(guān)(R=-0.133,P=0.000 31);在BRCA中ACAT1基因表達水平與TMB顯著負相關(guān)(-0.36<R<0,P=8.5e-13),在PAAD中ACAT1基因表達水平與TMB顯著負相關(guān)(-0.36<R<0,P=1.4e-06);在BRCA中ACAT1基因表達水平與MSI顯著負相關(guān)(-0.27<R<0,P=0.006 7),在THCA中ACAT1基因表達水平與MSI顯著負相關(guān)(-0.27<R<0,P=0.003 5)。

    2.5 ACAT1基因表達水平與錯配修復(fù)缺陷(different mismatch Repair,dMMR)及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的關(guān)系

    評估錯配修復(fù)基因MLH1、MSH2、MSH6、PMS2及EPCAM突變與ACAT1表達的關(guān)系。結(jié)果表明,當ACAT1基因低表達時,LIHC錯配修復(fù)基因的MSH2(-0.25<R<0,P<0.001)及MSH6(-0.25<R<0,P<0.05)突變率高,容易出現(xiàn)dMMR。

    我們進一步分析了ACAT1表達與四個甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT1,DNMT2,DNMT3A,DNMT3B)的關(guān)系。結(jié)果顯示:ACAT1基因表達水平與LIHC中的甲基轉(zhuǎn)移酶顯著負相關(guān),與葡萄膜黑色素瘤(Uveal Melanoma,UVM)及PAAD顯著正相關(guān),見表4。

    表4 ACAT1基因表達水平與dMMR及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的關(guān)系

    3 討論

    ACAT1是CD8+T細胞中膽固醇酯化的主要酶,抑制ACAT1活性可顯著增強CD8+T淋巴細胞的效應(yīng)器功能,促進CD8+T細胞的增殖。這是由于CD8+T細胞質(zhì)膜膽固醇水平的增加,增強了T細胞受體聚集和信號傳遞以及更有效地形成免疫突觸[17]。這些證據(jù)表明,抑制ACAT1活性可提高機體的免疫力,同時為腫瘤的預(yù)后和免疫治療提供新方向。

    ACAT1基因被證實與多種癌癥的增殖相關(guān)[18-20]。因此我們推測,ACAT1基因可能通過促進腫瘤細胞增殖影響患者的生存。與正常組織相比,ACAT1基因在大部分腫瘤組織中表達水平較低。在LAML、PCPG、COAD、BLCA、HNSC中,ACAT1基因低表達與較好的預(yù)后相關(guān),而在LUAD、READ、KIRC、KIRP、LGG中預(yù)后較差。

    BLCA和KIRC在免疫浸潤和ACAT1基因表達之間的相關(guān)性方面有不同的模式,這些發(fā)現(xiàn)目前為止尚屬首次。在BLCA和KIRC中,ACAT1基因表達具有不一致的預(yù)后價值。ACAT1基因低表達與BLCA的良好預(yù)后相關(guān),而KIRC則相反,這與Chen L等[21]的研究結(jié)果一致。我們還發(fā)現(xiàn)ACAT1基因表達與免疫細胞浸潤之間存在顯著相關(guān)性,尤其在BLCA和KIRC中,ACAT1基因的表達與不同的免疫浸潤水平相關(guān)。我們發(fā)現(xiàn),ACAT1基因的表達與BLCA中免疫細胞評分顯著正相關(guān),而與KIRC顯著負相關(guān)。BLCA的免疫浸潤與ACAT1基因的表達水平呈正相關(guān),而KIRC呈負相關(guān)。這一結(jié)果提示,ACAT1基因表達與某些免疫細胞標志物之間的關(guān)系并不總是與整體趨勢相同,ACAT1與某些免疫細胞亞型之間可能具有某種特定的相互作用,這種特定的相互作用目前尚未可知,需要更多的研究去證實。更加有趣的是,在BLCA中ACAT1基因的表達水平與腫瘤的純度無關(guān),而在KIRC中與腫瘤純度呈顯著正相關(guān)。這一證據(jù)提示,ACAT1在BLCA腫瘤細胞和腫瘤微環(huán)境中同樣表達,而僅在KIRC腫瘤細胞中相對富集,這種差異可能與腫瘤微環(huán)境中不同的ACAT1基因富集方式有關(guān)。作為重要的抗原提呈細胞,CD8+T細胞和巨噬細胞是BLCA中與ACAT1表達最顯著相關(guān)的細胞類型,然而在KIRC中則不是。因此,我們推測腫瘤在向腫瘤微環(huán)境招募抗原提呈細胞時存在異質(zhì)性,這一結(jié)果與Patente TA等[22]的研究結(jié)果相似。ACAT1基因在腫瘤中免疫浸潤細胞的募集和調(diào)節(jié)中起著重要作用,最終可能影響患者的生存。

    當免疫檢查點基因高表達時,免疫檢查點活躍,使抗原不能被提呈至T細胞,抑制T細胞的免疫功能,腫瘤得以逃脫生存。Hu F F等[23]的研究表明,在癌癥樣本中上調(diào)免疫檢查點基因的數(shù)量越多,越適用于免疫治療。我們發(fā)現(xiàn),當ACAT1低表達時,BRCA、LIHC、KIRC、THCA、KIRP及LUAD中的免疫檢查點基因顯著高表達,這說明這些腫瘤適用于免疫治療。研究表明,腫瘤新抗原數(shù)目多、高TMB、高微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability high, MSI-H)、錯配修復(fù)缺陷及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制,腫瘤免疫治療效果越好。我們發(fā)現(xiàn),當ACAT1基因低表達時:BRCA的新抗原數(shù)量多、高TMB、MSI-H,這與Bianchini G等[24]的研究結(jié)果一致;THCA患者具有MSI-H,這與Ferrari SM等[25]的研究結(jié)果一致;PAAD具有高TMB及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶受到抑制,Schizas D等[26]發(fā)現(xiàn)免疫治療聯(lián)合其他治療可協(xié)同作用于PAAD; UVM的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶受到抑制,Heppt M V等[27]發(fā)現(xiàn)免疫檢查點阻斷聯(lián)合CTLA-4和PD-1抑制是迄今為止UVM最有效的治療方法;LIHC錯配修復(fù)缺陷及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶高表達,錯配修復(fù)基因高突變時可增強免疫檢查點抑制劑療效,而DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性強時會降低免疫檢查點抑制劑療效,這說明免疫治療僅對某些LIHC患者有益,免疫治療在LIHC中的免疫反應(yīng)差異很大,這一現(xiàn)象可能與以下原因有關(guān),Cao D等[28]發(fā)現(xiàn)LIHC患者的預(yù)后與T細胞浸潤的免疫表型(CD8表達)和適應(yīng)性免疫抵抗基因(B7-H3或CD47)的表達有關(guān),B7-H3患者低/CD8高或CD47低/CD8高的存活率最高,而B7-H3高/CD8低或CD47高/CD8低的存活率最差。

    綜上所述,BRCA、LIHC、KIRC、THCA、KIRP、LUAD、PAAD及UVM的免疫治療效果好,而ACAT1基因低表達可作為泛癌的免疫治療預(yù)測標志物。

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