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    金花葵化學(xué)成分的研究

    2022-12-17 08:02:53劉巨釗付玉杰
    中成藥 2022年7期
    關(guān)鍵詞:分子式柱層析金花

    崔 琦, 劉巨釗, 付玉杰

    (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,浙江 杭州 310053;2.東北林業(yè)大學(xué)化學(xué)化工與資源利用學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150040)

    金花葵HibiscusmanihotL.為錦葵科秋葵屬植物,是20世紀(jì)80年代末農(nóng)業(yè)資源普查時(shí)的瀕于滅絕的珍稀植物[1],具有清利濕熱、消炎鎮(zhèn)痛等功效,內(nèi)服主治五淋、水腫,外用治療湯水燙傷等[2],但目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者主要集中于研究同屬植物黃蜀葵的化學(xué)成分及生物活性,而對(duì)該植物的相關(guān)報(bào)道較少[3-4]。為了合理開(kāi)發(fā)利用金花葵,本研究采用柱色譜法對(duì)其進(jìn)行分離純化,利用現(xiàn)代波譜分析技術(shù)得到16個(gè)化合物,分別鑒定為β-谷甾醇(1)、胡蘿卜苷(2)、十六烷酸(3)、十七烷酸乙酯(4)、二十六碳酸(5)、槲皮素(6)、槲皮素-3′-O-β-D-葡萄糖苷(7)、楊梅素(8)、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(9)、金絲桃苷(10)、異槲皮苷(11)、蘆丁(12)、綠原酸(13)、新綠原酸(14)、咖啡酸(15)、槲皮素-3-O-洋槐糖苷(16),其中化合物1~2、4、6~7、9、12~16為首次從該植物中分離得到。

    1 材料

    Bruker-500 MHz超導(dǎo)核磁共振儀(瑞士Bruker公司);Agilent 1290超高效液相色譜、Agilent 6460三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀(美國(guó)Agilent公司);柱層析硅膠(青島美高集團(tuán)有限公司);Sephadex LH-20柱(瑞典Pharmacia公司);ODS-C18柱(日本YMC公司);AB-8樹(shù)脂(天津南開(kāi)和成科技有限公司)。色譜純?cè)噭?北京百靈威科技有限公司)。分析純?cè)噭?天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)。金花葵采于黑龍江哈爾濱,經(jīng)東北林業(yè)大學(xué)毛子軍教授鑒定為錦葵科秋葵屬植物金花葵HibiscusmanihotL.。

    2 提取與分離

    金花葵粉末(4.2 kg)用80%乙醇浸泡提取2次,提取液合并后減壓濃縮至無(wú)乙醇蒸出,凍干后得到粗提物,混懸于蒸餾水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,其中乙酸乙酯層(45.8 g)經(jīng)正相硅膠柱層析,石油醚-乙酸乙酯(100∶0~0∶100)、乙酸乙酯-甲醇(100∶0~0∶100)梯度洗脫,合并相似組分,得流分Fr.2~Fr.10。Fr.2經(jīng)硅膠柱層析,石油醚-乙酸乙酯(100∶0~1∶1)梯度洗脫,得流分Fr.2.1~Fr.2.6,其中Fr.2.2~Fr.2.3合并后重結(jié)晶得化合物1(580 mg);Fr.2.4~Fr.2.6合并后經(jīng)硅膠柱層析,石油醚-乙酸乙酯(100∶0~0∶100)梯度洗脫,重結(jié)晶得化合物2(18 mg)、3(9 mg)、4(13 mg)、5(6 mg)。Fr.4~Fr.7合并后經(jīng)硅膠柱層析,二氯甲烷-甲醇(100∶0~0∶100)梯度洗脫,得流分Fr.4.7~Fr.4.27,經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜,甲醇-水(含0.1%甲酸)梯度洗脫,重結(jié)晶得化合物6(198 mg)、10(87 mg)、11(64 mg),經(jīng)半制備高效液相(甲醇-水,45∶55~60∶40,4 mL/min,254 nm),重結(jié)晶得化合物7(51 mg,tR=19.1 min)、8(16 mg,tR=15.6 min)、9(30 mg,tR=10.4 min)、12(41 mg,tR=6.3 min)。

    正丁醇層(273.7 g)經(jīng)AB-8大孔吸附樹(shù)脂富集,30%乙醇洗脫部位經(jīng)正相硅膠柱層析,二氯甲烷-甲醇(100∶0~0∶100)梯度洗脫,合并相似組分,得流分Fr.1~Fr.40,其中Fr.4、Fr.7~Fr.8、Fr.10、Fr.21經(jīng)ODS-C18柱色譜分離,甲醇-水梯度洗脫,重結(jié)晶得化合物10(142 mg)、11(107 mg)、8(34 mg)、12(58 mg)、16(32 mg);Fr.31~Fr.36經(jīng)半制備高效液相(甲醇-水,15∶85~50∶50,2 mL/min,330 nm),重結(jié)晶得化合物13(17 mg,tR=13.2 min)、14(14 mg,tR=10.1 min)、15(12 mg,tR=18.4 min)。70%乙醇洗脫部位經(jīng)正相硅膠柱,二氯甲烷-甲醇(100∶0~0∶100)梯度洗脫,合并相似組分,經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜,甲醇-水(含0.1%甲酸)梯度洗脫,合并相似組分,重結(jié)晶得化合物8(13 mg)、9(67 mg)、10(49 mg)。

    3 結(jié)構(gòu)鑒定

    化合物1:白色針狀結(jié)晶,分子式C29H50O,ESI-MSm/z:413.2[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:5.35(1H,dt,J=4.8,2.0 Hz),3.53(1H,tt,J=11.0,4.7 Hz),2.34~2.18(2H,m),2.05~1.90(2H,m),1.84(3H,dddd,J=16.4,9.6,7.3,4.0 Hz),1.73~1.31(11H,m),1.31~1.21(3H,m),1.21~1.13(3H,m),1.07(5H,dtd,J=24.1,13.2,11.5,6.1 Hz),1.01~0.88(8H,m),0.88~0.74(9H,m),0.68(3H,s)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]基本一致,故鑒定為β-谷甾醇。

    化合物2:白色粉末,分子式C35H60O6,ESI-MSm/z:575.0[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,Pyridine-d5)δ:10.19(2H,s),9.04(1H,s),8.66(3H,d,J=9.1 Hz),8.60(1H,s),7.93(1H,s),6.85~6.80(1H,m),6.53(1H,d,J=7.8 Hz),6.44(1H,s),6.04(1H,d,J=11.8 Hz),5.90(1H,dt,J=11.3,5.0 Hz),5.77(2H,dd,J=7.3,3.9 Hz),5.54(1H,d,J=8.0 Hz),5.50~5.38(2H,m),4.21(1H,ddd,J=13.4,5.0,2.3 Hz),3.99~3.90(1H,m),3.64~3.56(1H,m),3.45(1H,dt,J=12.7,3.5 Hz),3.41~3.27(2H,m),3.27~3.11(3H,m),3.02(2H,p,J=10.1,9.3 Hz),2.96~2.90(1H,m),2.90~2.66(9H,m),2.55(4H,dq,J=20.1,8.1,6.2 Hz),2.47(6H,dd,J=10.9,6.0 Hz),2.42~2.26(14H,m),2.13(3H,s);13C-NMR(125 MHz,Pyridine-d5)δ:151.4,136.9(J=24.7 Hz),124.9(J=25.1 Hz)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致,故鑒定為胡蘿卜苷。

    化合物3:白色粉末,分子式C16H32O2,ESI-MSm/z:567.5[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.19(2H,t,J=7.5 Hz,CH2COOH),1.51(2H,m,-CH2CH2COOH),1.19(brs,-CH2×12),0.81(3H,t,J=7.0 Hz,-CH3);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:33.6(C-2),31.7(C-14),29.3~28.8(C-6~C-11),24.7(C-3),22.3(C-15),13.0(C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]基本一致,故鑒定為十六烷酸。

    化合物4:白色蠟狀物,分子式C19H38O2,ESI-MSm/z:299.3[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:4.05(2H,t,J=6.6 Hz,-OCH2CH3),2.29(2H,t,J=7.2 Hz,-OCOCH2CH3),1.61(28H,s,-CH2×14),0.88(6H,t,J=7.2 Hz,-OCH2CH3,-CH2CH3);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:174.2(C-1),64.2(-OCH2CH3),34.5(C-2),32.0(C-16),30.2(C-5),29.7(C-6),29.7(C-7),29.7(C-8),29.7(C-9),29.5(C-10),29.4(C-11),29.4(C-12),29.3(C-13),29.2(C-14),28.6(C-4),25.1(C-3),22.7(C-16),14.2(C-18),13.9(-OCH2CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]基本一致,故鑒定為十七烷酸乙酯。

    化合物5:無(wú)色結(jié)晶,分子式C26H52O2,ESI-MSm/z:396.9[M+H]+。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.36(1H,d,J=7.5 Hz,H-2a),2.33(1H,d,J=7.5 Hz,H-2b),1.63(2H,m,H-3),1.25(44H,brs,-CH2×22),0.89(3H,t,J=7.0 Hz,H-26);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:180.0(C-1),34.1(C-3),32.0(C-4),29.8(-CH2×10),29.8(-CH2×4),29.6(CH2),29.5(CH2),29.5(CH2),29.3(CH2),29.2(CH2),24.7(CH2),22.9(C-25),14.2(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致,故鑒定為二十六碳酸。

    化合物6:黃色針狀結(jié)晶,分子式C15H10O7,ESI-MSm/z:300.9[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.18(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.38(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.89(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),7.62(1H,dd,J=8.5,2.0 Hz,H-6′),7.64(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:175.9(C-4),164.2(C-7),161.1(C-5),156.8(C-9),147.4(C-2),146.6(C-4′),144.8(C-3′),135.8(C-3),122.7(C-6′),120.3(C-1′),114.8(C-2′),114.6(C-5′),103.1(C-10),97.8(C-6),93.0(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]基本一致,故鑒定為槲皮素。

    化合物7:黃色針狀結(jié)晶,分子式C21H20O12,ESI-MSm/z:463.1[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.08(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.35(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.88(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),7.79(1H,dd,J=8.5,2.0 Hz,H-6′),8.05(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:97.9(C-6),93.2(C-8),164.3(C-7),161.1(C-5),156.9(C-9),149.0(C-2),145.9(C-4′),145.3(C-3′),123.7(C-6′),123.0(C-1′),116.8(C-2′),115.7(C-5′),103.0(C-1″),77.0(C-5″),76.3(C-3″),73.5(C-2″),69.8(C-4″),61.0(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致,故鑒定為槲皮素-3′-O-β-D-葡萄糖苷。

    化合物8:黃色針狀結(jié)晶,分子式C15H10O8,ESI-MSm/z:463.1[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:12.51(1H,s,5-OH),7.32(2H,s,H-2′,6′),6.37(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.18(1H,d,J=2.0 Hz,H-6);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:175.9(C-4),164.2(C-7),161.1(C-5),156.8(C-9),146.8(C-2),145.6(C-3′,C-5′),135.8(C-3,C-4′),120.7(C-1′),107.1(C-2′,C-6′),103.2(C-10),98.5(C-6),93.2(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致,故鑒定為楊梅素。

    化合物9:黃色粉末,分子式C21H18O14,ESI-MSm/z:492.9[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.25(1H,s,H-6),6.93(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),7.87(1H,dd,J=8.0 Hz,H-6′),7.98(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:179.5(C-4),157.2(C-5),156.6(C-9),147.5(C-2),147.2(C-4′),144.4(C-3′),125.2(C-8),122.7(C-6′),121.1(C-1′),115.3(C-2′),115.2(C-5′),106.7(C-1″),103.1(C-10),98.0(C-6),76.0(C-5″),75.9(C-3″),73.8(C-2″),71.7(C-4″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致,故鑒定為棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

    化合物10:黃色針狀結(jié)晶,分子式C21H10O12,ESI-MSm/z:463.1[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.20(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.39(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.87(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),7.59(1H,dd,J=8.5,2.0 Hz,H-6′),7.71(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),12.38(1H,s,5-OH);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:178.1(C-4),164.6(C-7),161.7(C-5),157.6(C-9),157.1(C-2),148.4(C-4′),144.5(C-3′),134.2(C-3),121.8(C-6′),121.7(C-1′),116.2(C-2′),114.6(C-5′),104.3(C-10),102.9(C-1″),98.5(C-6),93.3(C-8),77.0(C-5″),76.7(C-3″),74.3(C-2″),69.8(C-4″),61.2(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致,故鑒定為金絲桃苷。

    化合物11:黃色針狀結(jié)晶,分子式C21H10O12,ESI-MSm/z:463.0[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:7.59(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.58(1H,dd,J=2.0,8.4 Hz,H-6′),6.88(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.39(1H,d,J= 2.0 Hz,H-8),6.20(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.27(1H,d,J=7.7 Hz,H-1″),3.22~3.73(6H,m,H-2″~H-6″);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:178.3(C-4),164.6(C-7),161.7(C-5),156.5(C-9),156.4(C-2),148.5(C-4′),144.9(C-3′),134.3(C-3),122.1(C-6′),121.7(C-1′),116.2(C-2′),115.6(C-5′),105.1(C-10),102.9(C-1″),99.2(C-6),93.3(C-8),78.3(C-5″),76.8(C-3″),74.5(C-2″),70.4(C-4″),61.2(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]基本一致,故鑒定為異槲皮苷。

    化合物12:黃色粉末,分子式C27H30O16,ESI-MSm/z:609.1[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:7.67(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.62(1H,dd,J=2.0,9.0 Hz,H-6′),6.87(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.40(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.14(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.27(1H,d,J=8.0 Hz,H-1″),4.40(1H,d,J=1.5 Hz,H-1?),1.05(3H,d,J=8.0 Hz,5?-CH3);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:178.1(C-4),166.6(C-7),162.8(C-5),157.6(C-2),157.1(C-9),148.5(C-4′),145.3(C-3′),135.2(C-3),123.6(C-6′),122.6(C-1′),116.2(C-5′),114.7(C-2′),104.4(C-10),103.6(C-1″),101.9(C-1?),99.5(C-6),94.3(C-8),77.0(C-3″),76.1(C-2″),75.5(C-5″),73.3(C-4″),72.3(C-6″),71.8(C-4?),71.4(C-2?),69.8(C-3?),68.7(C-5?),18.0(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]基本一致,故鑒定為蘆丁。

    化合物13:白色針晶,分子式C16H18O9,ESI-MSm/z:353.0[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:7.50(1H,d,J=16.0 Hz,H-7′),7.01(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),6.92(1H,dd,J=8.4,2.0 Hz,H-6′),6.75(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.23(1H,d,J=16.0 Hz,H-8′),5.09(1H,m,H-3),4.81(1H,m,H-5),3.66(1H,dd,J=8.4,5.0 Hz),2.11~1.97(4H,m,H-2,H-6);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:175.5(C-7),167.4(C-9),148.9(C-4′),145.6(C-3′),145.3(C-7′),126.3(C-1′),121.6(C-6′),115.1(C-5′),113.9(C-8′),113.6(C-2′),74.4(C-1),71.1(C-4),70.3(C-5),69.7(C-3),37.5(C-2),36.7(C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]基本一致,故鑒定為綠原酸。

    化合物14:白色粉末,分子式C16H18O9,ESI-MSm/z:352.9[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:7.57(1H,d,J=16.0 Hz,H-7′),7.03(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),6.92(1H,dd,J=8.4,2.0 Hz,H-6′),6.75(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.28(1H,d,J=16.0 Hz,H-8′),5.34(1H,m,J=5.0 Hz,H-5),3.66~3.54(1H,m,H-4),2.22~1.95(4H,m,H-2,H-6);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:178.0(C-7),167.5(C-9′),148.6(C-4′),146.4(C-3′,C-7′),126.6(C-1′),121.6(C-6′),115.5(C-5′),114.8(C-8′),114.1(C-2′),74.4(C-1),73.5(C-4),71.8(C-3),67.2(C-5),39.7(C-6),35.1(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]基本一致,故鑒定為新綠原酸。

    化合物15:白色粉末,分子式C9H8O4,ESI-MSm/z:179.0[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:7.47(1H,d,J=16.0 Hz,H-7),7.11(1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.97(1H,d,J=8.4 Hz,H-6),6.80(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),6.23(1H,d,J=16.0 Hz,H-8);13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:167.8(C-9),148.0(C-4),145.4(C-3),144.5(C-7),125.6(C-1),121.1(C-6),115.6(C-5),115.0(C-2),114.4(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]基本一致,故鑒定為咖啡酸。

    化合物16:黃色粉末,分子式C27H30O16,ESI-MSm/z:609.1[M-H]-。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:7.64(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.60(1H,dd,J=2.0,9.0 Hz,H-6′),6.84(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.40(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.13(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.13(1H,d,J=8.0 Hz,H-1″),4.47(1H,d,J=1.5 Hz,H-1?),1.25(1H,d,J=8.0 Hz,5?-CH3);13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:178.1(C-4),166.4(C-7),162.5(C-5),157.7(C-2),156.9(C-9),148.2(C-4′),145.1(C-3′),134.6(C-3),123.4(C-6′),122.3(C-1′),115.9(C-5′),114.4(C-2′),104.2(C-10),104.0(C-1″),102.0(C-1?),99.2(C-6),94.1(C-8),77.3(C-3″),77.1(C-2″),75.9(C-5″),73.7(C-4″),72.6(C-6″),71.9(C-4?),71.5(C-2?),70.0(C-3?),68.8(C-5?),18.1(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]基本一致,故鑒定為槲皮素-3-O-洋槐糖苷。

    4 討論

    本研究從金花葵乙酸乙酯和正丁醇部位分離鑒定得到16個(gè)化合物,包括2個(gè)甾醇(化合物1~2),2個(gè)脂肪酸(化合物3、5),1個(gè)酯類(lèi)(化合物4),8個(gè)黃酮(化合物6~12、16),3個(gè)酚酸(化合物13~15),其中11個(gè)(1、2、4、6、7、9、12~16)為首次從該植物中分離得到。金花葵含有豐富的化合物,如黃酮、有機(jī)酸、揮發(fā)油、脂肪烴等[21],以黃酮為主要活性成分,而且總黃酮含量高于目前黃酮生產(chǎn)用原料銀杏、大豆等數(shù)十倍,具有多重藥理功效。其中,金絲桃苷對(duì)腎炎、心肌損傷、腦缺血損傷等具有良好的治療效果,同時(shí)具有抗氧化、鎮(zhèn)痛、抗乙肝病毒等作用[22];棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷是一種黃酮醇類(lèi)化合物,具有良好的抗炎活性及神經(jīng)保護(hù)作用,可作為治療阿爾茨海默癥等疾病的潛在藥物[23];異槲皮苷在金花葵中含量略低于金絲桃苷與棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷,具有抗氧化、降血壓、抗炎、抗抑郁等作用,應(yīng)用前景廣闊[24]。課題組前期發(fā)現(xiàn),金花葵乙酸乙酯、正丁醇部位具有顯著的抗炎、抗氧化作用,并且由于所含成分的復(fù)雜性與多樣性,有必要進(jìn)行深入研究。本試驗(yàn)結(jié)果將有助于發(fā)現(xiàn)金花葵中結(jié)構(gòu)新穎的化合物,并進(jìn)一步明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其潛在藥用價(jià)值,同時(shí)也促進(jìn)該資源的合理開(kāi)發(fā)利用。

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