微型種植體支抗治療對(duì)口腔正畸治療患者齦溝液趨化因子和齦下菌群的影響

陳娟娟 黃珠妹 陳昕

中國(guó)人民解放軍陸軍第七十三集團(tuán)軍醫(yī)院口腔科，廈門 361003

口腔正畸主要是通過(guò)各種矯正裝置調(diào)整患者頜面部、面部骨骼以及肌肉等，維持患者的咀嚼功能的同時(shí)平衡患者的口頜系統(tǒng)，作為臨床上治療牙齒畸形的主要治療手段［1］。近年來(lái)，隨著社會(huì)快速發(fā)展，人們的飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了巨大的改變，因此牙列不齊以及擁擠等牙齒問(wèn)題的發(fā)生越來(lái)越多［2］。而正畸治療的效果主要取決于支抗的選擇，因此選擇好的支抗方法能夠有利于患者正畸的治療效果［3］。以往的傳統(tǒng)治療方法所選擇的支抗方法不僅不易控制，患者容易感到不適，難以起到穩(wěn)定的治療作用，且不美觀，因此治療效果較差［4］。微型種植體技術(shù)主要是通過(guò)將微型螺釘植入體植入口腔以支撐口腔從而發(fā)揮治療作用，這種支抗方法不僅能夠加強(qiáng)患者的咀嚼功能，還能夠恢復(fù)正常牙列關(guān)系，較為美觀，目前正廣泛應(yīng)用于臨床治療中［5］。目前已有研究表明，在口腔正畸治療中使用微型種植體支抗能夠取得較為顯著的治療效果，并且可以有效降低患者術(shù)后感染的發(fā)生，具有較高的臨床價(jià)值［6］。趨化因子CX3CL1能夠促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成，導(dǎo)致牙槽骨吸收，從而加重患者的牙周病［7］。趨化因子 CXCL2、CCL4、CCL7 在牙周組織中具有關(guān)鍵作用，而恢復(fù)牙周組織的重生功能是正畸治療效果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)之一［8］。本研究探討口腔正畸中微型種植體支抗對(duì)患者的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

1、一般資料

選取2021年1月至2022年5月于陸軍第七十三集團(tuán)軍醫(yī)院口腔科接受口腔正畸治療的128 例患者進(jìn)行回顧性分析。本研究通過(guò)陸軍第七十三集團(tuán)軍醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。根據(jù)選用支抗不同分為觀察組和對(duì)照組，每組64 例。對(duì)照組男 28 例，女 36 例，年齡 19～28（23.14±4.98）歲，開(kāi)唇露齒 13 例，弓前突 51 例；觀察組男 32 例，女 32 例，年齡18～28（22.97±5.12）歲，開(kāi)唇露齒 14 例，弓前突 50 例。兩組患者的一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)X 線檢查確診，符合口腔正畸的診斷標(biāo)準(zhǔn)［9］；口腔衛(wèi)生良好；無(wú)正畸治療史；無(wú)正畸禁忌證。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：同時(shí)合并有牙周炎、口腔黏膜炎等疾?。粚?duì)口腔植入材料過(guò)敏；合并精神疾病，無(wú)法配合研究；合并有牙外傷史；妊娠以及哺乳期女性。

2、方法

（1）對(duì)照組采用口外弓加強(qiáng)支抗法?；颊呙刻炫宕鞯臅r(shí)間應(yīng)≥8 h，每側(cè)牽引力為300 g。支抗的加力值取決于患者的牙齒移動(dòng)情況，患者第1 個(gè)月每周復(fù)診1 次，第2 個(gè)月起每月復(fù)診1次，治療1年［10］。（2）觀察組采用微型種植體支抗技術(shù)。分開(kāi)需要植入微型種植體的牙齒采用黃銅絲，采用利多卡因進(jìn)行局部浸潤(rùn)麻醉，采用0.02%氯已定進(jìn)行漱口；對(duì)患者的植入部位進(jìn)行標(biāo)記，并詳細(xì)檢查患者牙根的形態(tài)以及位置，檢查患者植入部位相鄰的組織結(jié)構(gòu)。微型種植體需要附著牙齦部位，同時(shí)切開(kāi)患者的牙槽覆膜部位黏膜，以防止植入微型種植體時(shí)有軟組織卷入。手術(shù)后患者需要服用抗生素以預(yù)防術(shù)后感染，并確定支抗與牙根的關(guān)系，拍攝牙尖片。微型種植體在治療1 年后取出，叮囑患者按時(shí)復(fù)診，并且告知患者科學(xué)的口腔清潔方式以防止患者佩戴微型種植體期間發(fā)生感染［11-12］。

3、觀察指標(biāo)

3.1、比較兩組治療效果［13］由2 名口腔科專業(yè)醫(yī)師對(duì)患者治療后的牙齦健康情況、牙齦疼痛程度、牙齦鄰接關(guān)系、顏色是否美觀以及咬合舒適度等情況進(jìn)行評(píng)估，以滿分100 分的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)治療效果，最終取2 名醫(yī)師的均值作為該患者治療效果的評(píng)分，以評(píng)分≥70分作為成功的標(biāo)準(zhǔn)。

3.2、比較兩組的咀嚼效率［14］治療后使患者均咀嚼5 g熟皮花生但是不吞咽，隨后患者用漱口水漱口后吐出，收集患者吐出的漱口水并將其配置成1 L的蒸餾水液，并將其攪拌混勻后靜置5 min，用刻度吸管吸取5 ml 的溶液，監(jiān)測(cè)該溶液的吸光度，其度數(shù)即為咀嚼效率。

3.3、齦溝液趨化因子檢測(cè)［15］采用常規(guī)濾紙條法取所有患者的齦溝液，將濾紙條放置于Eppendorf 管中，于電子天平稱重，取樣后將濾紙條加入原Eppendorf 管中稱重，并記錄齦溝液量。隨后在管中加入200 μl磷酸鹽緩沖液并振蕩，1 h 后取出濾紙條，于-70 ℃的條件下保存，待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)趨化因子CX3CL1（ELISA 試劑盒由上海超驗(yàn)生物科技公司提供）。

3.4、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測(cè)CXCL2、CCL4、CCL7 mRNA 水平［16-17］采用 RT-qPCR 檢測(cè)趨化因子 CXCL2、CCL4、CCL7 的mRNA 水平。引物見(jiàn)表1。擴(kuò)增體系為PCR反應(yīng)包含2 μl cDNA、0.4 μl正向引物、0.4 μl反向引物、7.2 μl H2O2和10 μl SYBR；擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃循環(huán)變性15 s，58 ℃退火15 s，72 ℃延伸30 s。采用2-ΔΔCt法計(jì)算表達(dá)mRNA 的水平，主要方法為先計(jì)算出每個(gè)樣品內(nèi)參基因的表達(dá)量ΔCt，再計(jì)算對(duì)照組中ΔCt的均值，用觀察組每個(gè)樣品的ΔCt 減去對(duì)照組的ΔCt 均值，得到ΔΔCt，采用2-ΔΔCt公式計(jì)算出觀察組的表達(dá)量。

表1 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）的引物及長(zhǎng)度

3.5、比較兩組的口腔菌群［18］治療后，采用 PCR 分析患者齦下菌斑中的牙齦卟啉單胞菌（Pg）、具核梭桿菌（Fn）、福塞斯坦氏菌（Tf）、中間型普里沃菌（Pi）。首先從牙周袋最底部采用無(wú)菌刮治器刮取齦下菌斑，將其溶解于磷酸緩沖鹽溶液中充分混勻，以4 ℃12 000×g的條件離心15 min，棄去上清液，在-80 ℃保存?zhèn)溆?。采用酚氯仿提取菌斑總DNA，于-20 ℃條件下凍存。由上海生工生物工程有限公司合成Pg、Fn、Tf以及Pi的特異性擴(kuò)增引物。PCR反應(yīng)體系的反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性3 min，95 ℃變性45 s，55 ℃退火60 s，72 ℃延伸 90 s，共 35 個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸 10 min。PCR擴(kuò)增在PCR 擴(kuò)增儀（型號(hào)：eppendorf5331，生產(chǎn)廠家：上海奧陸生物科技有限公司）上完成。

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1、兩組患者的治療效果和咀嚼效率比較

觀察組患者的治療成功率、咀嚼效率均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），具體見(jiàn)表2。

表2 兩組口腔正畸治療患者治療后治療效果和咀嚼效率比較

2、兩組患者治療前、治療后1、4 周的齦溝液趨化因子比較

表3 結(jié)果顯示，觀察組治療前的CX3CL1、CXCL2、CCL4、CCL7 mRNA 水平與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；而觀察組治療后 1 周、4 周的 CX3CL1、CXCL2、CCL4、CCL7 mRNA 水平與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），且治療4 周后的 CX3CL1、CXCL2、CCL4、CCL7 mRNA 水平與治療1 周后的水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表3 兩組口腔正畸治療患者治療前后齦溝液趨化因子水平比較（pg/nl，）

表3 兩組口腔正畸治療患者治療前后齦溝液趨化因子水平比較（pg/nl，）

注：觀察組采用微型種植體支抗技術(shù)，對(duì)照組采用口外弓加強(qiáng)支抗正畸法；與同組治療前比較，aP＜0.05；與同組治療后1 周比較，bP＜0.05

P值0.136＜0.001 0.023 0.161＜0.001＜0.001 0.678＜0.001＜0.001 0.456＜0.001＜0.001指標(biāo)CX3CL1 CXCL2 CCL4 CCL7時(shí)間治療前治療后1周治療后4周治療前治療后1周治療后4周治療前治療后1周治療后4周治療前治療后1周治療后4周觀察組（64例）21.53±3.41 35.13±9.75a 37.63±10.14ab 1.07±0.17 1.87±0.13a 2.23±0.22ab 1.12±0.12 1.87±0.23a 2.36±0.32ab 1.16±0.13 1.69±0.32a 2.35±0.42ab對(duì)照組（64例）22.44±3.45 27.26±6.71a 33.56±9.87ab 1.03±0.15 1.26±0.12a 1.45±0.16ab 1.13±0.15 1.36±0.17a 1.74±0.18ab 1.14±0.17 1.46±0.11a 1.61±0.21ab t值1.501 5.319 2.301 1.412 27.583 22.939 0.417 14.235 13.509 0.748 5.438 12.607

3、兩組患者齦下致病菌檢出率比較

兩組患者的齦下菌斑中均檢出 Pg、Fn、Tf、Pi 4 種常見(jiàn)的齦下致病斑，且觀察組的Tf 的檢出率明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），具體見(jiàn)表4。

表4 兩組口腔正畸治療患者4種齦下致病菌的檢出情況比較[例（%）]

討 論

隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展以及人們物質(zhì)水平的提升，越來(lái)越多人更注重其口腔的美觀度，此外，牙頜面畸形還是導(dǎo)致成年人牙齒喪失的主要原因，危害人類的牙齒以及健康［19］。正畸治療正是臨床上有效治療患者牙齒畸形的方法之一，其治療主要是通過(guò)使用矯正裝置對(duì)牙齒加壓來(lái)進(jìn)行，其中，支抗設(shè)計(jì)正是口腔畸形治療的重要環(huán)節(jié)，穩(wěn)定的支抗是支撐整個(gè)正畸過(guò)程的重要基礎(chǔ)［20］。其中，微型種植體支抗以其舒適性好、穩(wěn)定性強(qiáng)以及創(chuàng)傷小的優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于臨床治療中。有研究顯示，微型種植體支抗的矯治效果是其他常規(guī)方法所難以實(shí)現(xiàn)的，并且可以很好地避免牙齒移動(dòng)的影響，能夠?qū)⒊C治力的反作用施加頜骨上，使得治療過(guò)程中能夠施加較大的正畸力而不會(huì)讓患者感到不適［21-22］。本研究結(jié)果顯示觀察組的治療效果以及咀嚼效率均顯著高于對(duì)照組。

正畸治療主要是通過(guò)調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的水平，促進(jìn)自身基質(zhì)的降解和重建，進(jìn)而調(diào)控牙槽骨的吸收和沉積實(shí)現(xiàn)的。而趨化因子CX3CL1 具有黏附以及趨化的雙重作用，不僅可以介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附，還能夠誘導(dǎo)白細(xì)胞的黏附、遷徙，發(fā)揮趨化因子的作用，引起機(jī)體的免疫損傷。本研究結(jié)果顯示采用微型種植體支抗技術(shù)治療患者的CX3CL1 表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，并且治療后的CX3CL1 的表達(dá)水平也較治療前有所上升，可能原因?yàn)镃X3CLA 能夠在成骨細(xì)胞誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用，即CX3CLA 能夠調(diào)控破骨細(xì)胞黏附，還能夠誘導(dǎo)破骨前體細(xì)胞在骨髓中的遷移［23］。CX3CL1 作為 CX3CR1 的特異性受體，CX3CL1-、CX3CR1 能夠維持破骨前體細(xì)胞的聚集，加快骨吸收作用，且不誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化導(dǎo)致的。CXCL2 作為趨化因子能夠促進(jìn)骨重塑反應(yīng)，且在正畸力的作 用下會(huì)出現(xiàn) 高 表達(dá)的現(xiàn)象［24］。Guo 等［25］研究表 明 ，CCL4 能夠有助于抗痛覺(jué)過(guò)敏作用，并且能夠在牙周愈合的過(guò)程中起到血管重建的作用。CCL7 作為一種小細(xì)胞因子，在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的遷移過(guò)程中有誘導(dǎo)作用，對(duì)組織再生具有重要作用［26］。本研究結(jié)果顯示治療后兩組患者的CXCL1、CCL4、CCL7 mRNA 表達(dá)水平均上升，且觀察組均明顯高于對(duì)照組?？梢?jiàn)，采用微型種植體支抗技術(shù)進(jìn)行正畸治療不僅能夠促進(jìn)骨吸收，還能夠提高牙周組織再生能力，減輕患者的疼痛。

牙周致病菌是正常菌群的組成成分之一，然而隨著細(xì)菌附著能力的增強(qiáng)，其分泌的毒素也會(huì)增多，導(dǎo)致炎癥的發(fā)生以及發(fā)展［27］。矯治器的佩戴方式對(duì)口腔清潔程度具有一定的影響，若不注意佩戴方式，則會(huì)導(dǎo)致患者口腔菌群的生態(tài)平衡被打破，使得口腔滋生大量細(xì)菌引起牙周炎癥的發(fā)生［28］。其中Pg、Fn、Tf 以及Pi 均是出現(xiàn)頻率較高的致病菌，能黏附在牙周組織上，產(chǎn)生毒性因子從而促進(jìn)炎癥的發(fā)生，破壞牙周組織［29-30］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，兩組患者的Pg、Fn以及Pi 致病菌的檢出率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而觀察組Tf 致病菌的檢出率明顯高于對(duì)照組，提示兩種治療方法可能導(dǎo)致齦下致病菌種類的差異。

綜上所述，口腔正畸治療中采用微型種植體支抗技術(shù)能夠有效地改善牙周指標(biāo)，提高治療效果，并且降低患者的炎癥因子，并且促進(jìn)牙周組織的再生，減少齦下致病菌的種類，值得臨床進(jìn)行推廣。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突