酶聯(lián)免疫聯(lián)合核酸檢測對減少輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)的探討

李艷

（山西省臨汾市中心血站，山西 臨汾 041000）

0 引言

目前，輸血在臨床中是非常常見的手段，而在進(jìn)行輸血的過程中應(yīng)保證各個(gè)環(huán)節(jié)的安全性，以降低輸血中感性疾病的傳播率。如何有效地保證臨床輸血的安全成為需要重點(diǎn)考慮的問題。血液篩查是一個(gè)有效提供安全血液的重要環(huán)節(jié)，而在篩查的過程中如何有效解決病毒感染的“窗口期”是非常關(guān)鍵的。在感染性病原微生物中乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒及梅毒病毒都是嚴(yán)重危害人類健康的主要類型，其主要的傳播途徑為血液制品、靜脈吸毒等。而人們在輸血的過程中，尤其是無償獻(xiàn)血前并不知道自身攜帶哪種病毒，因此進(jìn)行血液篩查是非常必要的。近年來，患有血液傳播性疾病的患者比例增加，使得人們對輸血安全性的重視程度加深。血液采集后的檢測為血液傳播性疾病篩查的主要方法，包括酶聯(lián)免疫法與核酸檢測法[1]。酶聯(lián)免疫法為應(yīng)用廣泛的檢測手段，通過血清學(xué)方法檢驗(yàn)[2]，有效篩查了血液傳播性疾病，該檢測方法操作簡單，適合對血液標(biāo)本進(jìn)行大范圍篩查。核酸檢測屬于較為先進(jìn)的檢測方法，篩查精準(zhǔn)性較高，但普及程度較酶聯(lián)免疫法降低。在實(shí)踐運(yùn)用中發(fā)現(xiàn)，血液內(nèi)病毒處于窗口期或變異期時(shí)，酶聯(lián)免疫法檢測往往無法檢測出結(jié)果，增加了漏檢的風(fēng)險(xiǎn)[3]。為降低血液傳播性疾病的漏檢率，保障臨床的用血安全性,增加核酸檢測[4]。核酸檢測技術(shù)在近年來得到了廣泛的應(yīng)用，尤其是在血液安全篩查中對于乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒及梅毒病毒等病毒的檢測發(fā)揮著重要的作用，無論是低水平的病毒還是隱匿性的感染、處于亞型的病毒及變異的病毒都有檢出作用。 本次研究選擇山西省臨汾市中心血站采集的5280份血液標(biāo)本，分別進(jìn)行了酶聯(lián)免疫法檢測2次及核酸檢測1次，同時(shí)對比了檢測結(jié)果數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年4月至2020年4月山西省臨汾市中心血站采集的5280例獻(xiàn)血者血液標(biāo)本為研究對象，所有患者均采用快速金標(biāo)法進(jìn)行了乙肝表面抗原和梅毒螺旋體抗體的檢測以及干式生化儀檢測了丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，從采血袋的旁袋分別留取2管靜脈血，每管均為5ml，一管無分離膠的予以酶聯(lián)免疫法檢測，一管有分離膠的進(jìn)行核酸檢測，需要注意的是，用于核酸檢測的標(biāo)本離心處理時(shí)間需在4h內(nèi)進(jìn)行，以免對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，血液采集后，均置于溫度為2-8℃的恒溫環(huán)境中，予以統(tǒng)一管理保存統(tǒng)一檢測。

1.2 檢測方法

檢測儀器：酶聯(lián)免疫法所應(yīng)用的檢測儀器為愛康全自動酶聯(lián)免疫檢測處理系統(tǒng)，核酸檢測所應(yīng)用的儀器為華益美核酸篩查系統(tǒng)。

檢測試劑：檢測過程中所運(yùn)用試劑包括廈門新創(chuàng)和北京萬泰的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP試劑和華益美核酸檢測試劑[5]。

首先應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測5280份血液標(biāo)本2次，檢測完畢后無反應(yīng)標(biāo)本繼續(xù)實(shí)施核酸檢測，核酸檢測無反應(yīng)則認(rèn)定標(biāo)本合格，核酸檢測有反應(yīng)則需進(jìn)一步實(shí)施單項(xiàng)拆分檢測，仍有反應(yīng)則認(rèn)為標(biāo)本不合格。所有血液標(biāo)本檢測后予以報(bào)廢處理。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并記錄酶聯(lián)免疫法與核酸檢測法檢測的結(jié)果，首先對比酶聯(lián)免疫法檢測中單陽性與雙陽性的份數(shù)差異，進(jìn)一步對比酶聯(lián)免疫無反應(yīng)標(biāo)本核酸檢測的有反應(yīng)與無反應(yīng)份數(shù)差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，對比采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酶聯(lián)免疫法單陽性與雙陽性差異性對比

酶聯(lián)免疫檢測的5280份血液標(biāo)本中，有反應(yīng)的標(biāo)本共有43份，占比0.81%，酶聯(lián)免疫法檢測雙陽性比例為0.66%（35/5280），單陽性比例為0.15%（8/5280），兩者數(shù)據(jù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 酶聯(lián)免疫法單陽性與雙陽性差異性對比（n）

2.2 酶聯(lián)免疫法無反應(yīng)標(biāo)本中核酸檢測有反應(yīng)與無反應(yīng)標(biāo)本的差異性對比

采用核酸檢測的5237份血液標(biāo)本中，有4份血液標(biāo)本出現(xiàn)了反應(yīng)，4份標(biāo)本均經(jīng)核實(shí)確認(rèn)存在血液傳播風(fēng)險(xiǎn)，總陽性率為0.076%（4/5237）。核酸檢測無反應(yīng)的比例為99.924%（5233/5237），核酸檢測有反應(yīng)與無反應(yīng)標(biāo)本的差異性對比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 核酸檢測有反應(yīng)與無反應(yīng)標(biāo)本的差異性對比（n）

3 討論

核酸檢測技術(shù)為聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的有效應(yīng)用，隨著我國醫(yī)療水平的提升，該技術(shù)廣泛應(yīng)用于多種血液傳播性疾病的診斷中，應(yīng)用效果較好[6]。酶聯(lián)免疫檢測方法的主要檢測對象為抗原、抗體，需要較長的“窗口期”，尤其是以抗體為主的檢測對象的感染標(biāo)志物，從病毒進(jìn)入到人體內(nèi)進(jìn)行刺激產(chǎn)生抗體，再到抗體被檢出的時(shí)間需要得更長。因此，在實(shí)際應(yīng)用酶聯(lián)免疫檢測中在“窗口期”非常容易出現(xiàn)漏檢的情況。有相關(guān)的研究結(jié)果顯示，有將近90%的乙型肝炎病毒、艾滋病病毒以及70%左右的丙型肝炎病毒在使用酶聯(lián)免疫檢測時(shí)出現(xiàn)漏診都是發(fā)生在“窗口期”。與酶聯(lián)免疫檢測方法相比較，核酸檢測技術(shù)則能大大縮短乙型肝炎病毒、艾滋病病毒、丙型肝炎病毒的“窗口期”。該技術(shù)是用來檢測病原體核酸，在縮短“窗口期”上有著明顯的優(yōu)勢[7,8]。

實(shí)踐運(yùn)用中發(fā)現(xiàn)，核酸檢測在HBsAg、抗-HCV、抗-HIV等多種病毒的檢測中，均具有較高的特異性及敏感性，縮短了采用酶聯(lián)免疫法于窗口期檢測造成的檢測盲區(qū)，降低了血液病毒傳播的風(fēng)險(xiǎn)，為臨床用血安全提供了有力保障[9]。酶聯(lián)免疫法檢測價(jià)格低廉、時(shí)間周期短、操作方便，因此仍為各個(gè)血站主要的檢測方法，但由于該檢測方法具有較長的窗口期，因此具有一定的輸血風(fēng)險(xiǎn)。采取酶聯(lián)免疫合并核酸檢測，發(fā)展前景廣闊，更符合醫(yī)療水平不斷發(fā)展的趨勢[10,11]。本次研究對比了酶聯(lián)免疫法與核酸檢測在篩查血液傳播性疾病中的價(jià)值，研究結(jié)果顯示：采用核酸檢測的5237份血液標(biāo)本中，有4份血液標(biāo)本出現(xiàn)了反應(yīng)，4份標(biāo)本均經(jīng)核實(shí)確認(rèn)存在血液傳播風(fēng)險(xiǎn)，總陽性率為0.076%（4/5237）。核酸檢測無反應(yīng)的比例為99.924%（5233/5237），核酸檢測有反應(yīng)與無反應(yīng)標(biāo)本的差異性對比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果提示：降低輸血感染風(fēng)險(xiǎn)已經(jīng)成為了各個(gè)血站迫切解決的問題，核酸檢測在篩查血液傳播性疾病方面，具有較高的精準(zhǔn)性，但該檢測方法復(fù)雜，耗時(shí)長，檢測費(fèi)用昂貴。建議可采取一次酶聯(lián)免疫法聯(lián)合核酸檢測的方式篩查血液樣本，以提高檢測效率，降低檢測成本[12-16]。從此次研究中可看出，與酶聯(lián)免疫檢測方法相比較，核酸檢測有效彌補(bǔ)其不足之處及存在的缺陷，能夠大大提高乙型肝炎病毒的檢出率。分析其中的原因，作者認(rèn)為核酸檢測主要是通過將血液中微小的病毒核酸通過 PCR 擴(kuò)增以及熒光信號識別，從而達(dá)到早期檢測縮短“窗口期”的作用，進(jìn)一步彌補(bǔ)酶聯(lián)免疫法的缺陷，達(dá)到提高輸血安全的目的[17-19]。筆者認(rèn)為酶聯(lián)免疫檢測的基本原理為抗原、抗體的特異性反應(yīng)， 而臨床上已有相關(guān)研究報(bào)道證實(shí)，類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、部分自身抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)以及高濃度非特異性免疫球蛋白等內(nèi)源性感染因素與標(biāo)本儲存時(shí)間較長、細(xì)菌污染等外源性因素均可能對酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的測定結(jié)果產(chǎn)生干擾。

綜上所述，若乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等傳染病在患者體內(nèi)的病毒處于隱性感染期、變異期或窗口期時(shí)，單采用酶聯(lián)免疫法檢測已不能滿足用血安全性要求，采用酶聯(lián)免疫聯(lián)合核酸檢測的方式能夠有效減少漏檢情況的發(fā)生，對于提高檢測精準(zhǔn)性，減少輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)，具有十分重要的意義[20-22]。但是，無論是哪種檢測方式都會存在一定的“窗口期”，只是相對來說分為時(shí)間的長與短，即便是核酸檢測技術(shù)也有一定的“窗口期”。這就需要采血機(jī)構(gòu)需要在源頭上進(jìn)行血液篩查，保證提供更加安全的血液，首先需要對獻(xiàn)血者進(jìn)行篩查，在獻(xiàn)血前對獻(xiàn)血者進(jìn)行健康體檢，選取較低危的人群作為獻(xiàn)血者。同時(shí)，由于核酸檢測技術(shù)的靈敏度較高[23,24]，因此，在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及血液標(biāo)本上也有更高的要求，需要在一個(gè)安全的環(huán)境下進(jìn)行操作，最大限度地保證血液標(biāo)本的安全性。也就是說，在進(jìn)行上機(jī)操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格地按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行檢測，留取的標(biāo)本要完善，做好環(huán)境清潔消毒各個(gè)環(huán)節(jié)，保證血液的安全，從而減少輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)[25]。