• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    肺癌干性樣細胞與耐藥

    2022-12-13 20:29:07潘振華劉紅雨陳軍
    中國肺癌雜志 2022年2期
    關鍵詞:干性靶向干細胞

    潘振華 劉紅雨 陳軍

    據世界衛(wèi)生組織發(fā)布的2020年GLOBOCAN數據顯示,肺癌是全球發(fā)病率第二、致死率第一的腫瘤,其中非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占85%,小細胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)占15%。按照組織類型,NSCLC又分為肺腺癌、肺鱗癌和大細胞肺癌。對于中晚期的肺癌患者,單獨或者聯(lián)合化療是目前臨床的主要策略,盡管靶向治療和免疫治療大大改善了部分患者的生存狀態(tài),但無論對于傳統(tǒng)化療還是新型療法,耐藥和復發(fā)仍然使肺癌臨床面臨困境[1-3]。

    腫瘤干細胞(cancer stem cells, CSCs)最早在急性髓系白血病中得到鑒定,隨后研究者們陸續(xù)在多種實體瘤中證實了CSCs的存在,并提出CSCs與腫瘤的發(fā)生、轉移、耐藥和復發(fā)密切相關[4]。2007年Maria的課題組[5]利用干細胞對Hoechst 33342染料的高外排能力從人肺癌細胞株和肺癌組織中均分離出了具有干性樣特征的細胞亞群,證實了這群細胞能夠自我更新和多向分化,在體內可以高效成瘤。2008年Levina的課題組[6]發(fā)現(xiàn)在多種化療藥物作用下存活下來的肺癌細胞高表達干性標志蛋白,同時這群細胞具有自我更新和體外成球等干性特征。近年來,更多的證據表明在肺癌組織和細胞中存在一小群干性樣腫瘤細胞,它們可以自我更新、多向分化,具有很強的成瘤能力,能夠在放療、化療、靶向治療和免疫治療中存活,是肺癌耐藥與復發(fā)的主要原因[7]。

    本文主要針對肺癌干性樣細胞(lung cancer stem-like cells, LCSCs)及其耐藥機制的研究進展進行綜述,旨在為臨床靶向和逆轉耐藥提供思路。

    1 肺癌干性樣細胞

    1.1 來源 目前研究者們認為LCSCs的來源主要包括:正常成體干細胞或者前體細胞發(fā)生惡性轉化,以及已分化的腫瘤細胞通過去分化獲得干性。近來有團隊提出,在腫瘤組織中可能不僅僅存在單一的CSC亞群,而可能有多個亞群,它們可能是單來源,也可能是多來源,其惡性轉化途徑可能既存在重合,也存在各自的特異性,這對于干性樣腫瘤細胞的鑒定與靶向提出了更加嚴峻的挑戰(zhàn)[7]。

    1.1.1 成體干細胞來源的LCSCs 研究最多的肺部成體干細胞包括基底細胞、II型肺泡表皮(alveolar epithelial type II, AT2)細胞和club細胞,它們除維系肺部組織平衡發(fā)育,在損傷修復中也發(fā)揮重要功能。研究[7]表明,細胞自身的DNA損傷修復應答、基因突變和炎性環(huán)境的誘導等多種因素可能引起這些成體干細胞在分裂和增殖過程中累積突變而發(fā)生惡性轉化。

    Weeden團隊[8]發(fā)現(xiàn)基底細胞在吸煙等引起的肺損傷時更傾向于啟動非同源末端連接(non-homogenous end joining, NHEJ)途徑進行修復,從而增加了基因組的不穩(wěn)定性和突變幾率,基因表達分析進一步論證了肺鱗癌與基底細胞之間具有高度同源性,這為肺鱗癌的基底細胞來源提供了有力的證據。Jeong團隊[9]通過Trp53和Keap1雙突變,誘導小鼠氣道基底干細胞發(fā)生了向肺鱗癌的惡性轉化,證實了肺鱗癌可由基底細胞惡性突變形成,并成功建立了小鼠基底細胞發(fā)展為肺鱗癌的模型。

    通過小鼠模型,研究者們追蹤到在出生后,肺部損傷可以誘導AT2細胞分化產生新的AT1細胞,同時,體外添加表皮生長因子(epidermal growth factor, EGF)等可以誘導AT2細胞的自我更新。在KrasG12D突變型小鼠體內的AT2細胞可以被有效地激發(fā)出自我更新能力,并進一步發(fā)展為多灶位肺腺癌[10]。在最新的研究中,Chen的團隊[11]通過類器官模型證實表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)T790M/L858R突變的AT2細胞和支氣管肺泡來源的干性細胞能夠轉化為肺癌細胞,轉化后的癌細胞保留了它們各自的表觀遺傳學特征,并對不同的藥物表現(xiàn)出不同的敏感性。

    當肺部受損嚴重,或者采用基因編輯的方式去除掉club細胞時,通常保持休眠狀態(tài)的神經內分泌(neuroendocrine, NE)細胞就會發(fā)生增殖并對周圍表皮細胞進行修復。而在腫瘤抑制因子Rb1和Trp53缺失的情況下,小鼠體內的NE細胞能夠轉化成為小細胞肺癌[12]。

    1.1.2 前體細胞來源的LCSCs 與干細胞相比,前體細胞在組織中的含量明顯增加,同時前體細胞也存在一定的自我更新和多向分化能力。Sasai團隊[13]對人小氣道表皮細胞進行基因編輯,聯(lián)合hTERT的過表達、Rb和p53通路的失活、KRAS以及PIK3CA和CYCLIN-D1的活化,成功在裸鼠模型中轉化得到了肺腺癌細胞,當增加c-Myc活性,可以得到具有干性樣的低分化型肺腺癌細胞。不同于Sasai團隊復雜的基因編輯實驗,Wang的團隊[14]發(fā)現(xiàn)鎳元素可以直接誘導正常的人支氣管表皮細胞發(fā)生惡性轉化,同時,SOD1的高表達促使其中一部分細胞發(fā)生去分化獲得干性樣特征,這部分獲得干性樣特征的腫瘤細胞表現(xiàn)出更高的惡性程度。

    1.1.3 肺癌細胞通過去分化獲得干性 干性細胞的分化受到c-Myc、SOX2、Oct-4和TP53等多種基因以及Wnt、Notch和Hedgehog等信號通路的調控,因此當這些與分化相關的基因或者通路活性發(fā)生改變時,細胞的分化和去分化狀態(tài)之間可以相互轉換[7]。

    EGFR突變的肺腺癌向小細胞肺癌或者肺鱗癌的轉化,是臨床上腫瘤細胞獲得多向分化能力從而發(fā)生組織類型轉化的經典案例。研究[15]表明TP53和RB1的失活使腫瘤細胞獲得干性樣特征,具有了能夠多向分化的能力,在EGFR活化型突變的情況下會激活更利于表皮特征的轉錄程序并抑制細胞向神經內分泌型轉化的趨勢,但當采用酪氨酸激酶抑制劑分子(tyrosine-kinase inhibitors, TKIs)抑制EGFR信號時,則大大增加了這類細胞向SCLC轉化的能力。

    另一個與肺癌耐藥直接相關的研究熱點是表皮間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition, EMT),EMT主要受到SNAI1、TWIST1和ZEB1等轉錄因子的調控,促使表皮特征的蛋白減少而間充質特征的蛋白表達增多,其調控網絡與CSCs的調控之間存在很多重合。EMT既是腫瘤細胞獲得干性的一個重要途徑,同時也是一個重要表現(xiàn)[16]。

    除此之外,包括基因突變,表觀遺傳修飾、代謝重編程和腫瘤微環(huán)境在內的多種內外因素都被證實可以誘導肺癌細胞發(fā)生去分化。比如,白介素-6(interleukin-6, IL-6)通過上調DNMT1促進了A549細胞p53和p21蛋白的甲基化,誘導出細胞的干性樣功能表型;而抑制DNMT3A可以通過上調CDH1來降低Wnt/β-catenin信號活性從而抑制NSCLC的干性特征[17,18]。缺氧壓力下,HOXA5通過上調SOX2的轉錄水平誘導肺腺癌細胞發(fā)生去分化;在營養(yǎng)和氧氣同時缺乏的情況下,間充質成纖維細胞通過旁分泌IL-6、Activin-A和G-CSF,促進肺癌細胞的去分化;CD90+的腫瘤相關成纖維細胞可以通過旁分泌胰島素樣生長因子II(insulin-like growth factor II, IGF-II)誘導肺癌細胞的Nanog表達和干性樣特征的獲得;一氧化氮分子可以促進Oct-4和Cav-1復合體的形成,從而誘導肺癌細胞去分化、獲得干性樣特征[19-22]。

    1.2 對LCSCs的鑒定

    1.2.1 側群細胞 采用Hoechst 33342染色,在流式細胞儀檢測下鑒定到的低染細胞群,也被稱為側群(side population,SP)細胞。SP鑒定干細胞最早是由Goodel團隊在對小鼠造血干細胞研究中提出的,是基于干性樣細胞高表達ABCG2和ABCB1的特征,而這兩種蛋白可以將Hoechst 33342排出細胞,在染色上使得這部分細胞表現(xiàn)為低染[5]。研究者們最早就是通過SP的方法在肺癌組織和細胞系中分離并鑒定到干性樣細胞亞群[5]。

    1.2.2 標志性蛋白 目前在肺癌中常常采用細胞表面標志性蛋白CD133、CD44、CD90、CD117、CD166、EpCAM(CD326)、ALDH以及EMT的標志性蛋白Nanog、SOX2和Oct-4來鑒定干性樣細胞群,但是尚沒有得到一致認同的標志物分子[7,23,24]。比如,Eramo[25]和Chen[26]的課題組都在肺癌組織和細胞系中證實了CD133+的細胞可體外成球生長,能夠分化出CD133-的細胞,104個細胞足夠在免疫缺陷小鼠體內形成腫瘤,然而Qiu的團隊[27]從H446細胞中分離到的CD133+與CD133-細胞在成球能力和分化能力上并沒有顯著差異,提出相比于CD133,uPAR更適合作為干性樣特征標記。Masciale等[28]在最新的研究中對比了從肺腺癌和肺鱗癌患者組織標本中分離出的LCSCs,提出不同組織分型的NSCLCs應該采用不同的標志物。

    因此,一方面研究者們常常采用多標記聯(lián)合鑒定的方法,另一方面對于分離到的干性樣腫瘤細胞需要進行功能驗證。

    1.2.3 功能鑒定 對干性樣腫瘤細胞的鑒定,公認的金標準是在免疫缺陷小鼠體內的成瘤能力評估,早期Al-Hajj團隊通過這個模型證實了100個CD44+/CD24(-/low)的乳腺癌細胞即可形成腫瘤,與對照組之間成瘤能力差到幾十倍[29,30]。

    體外功能驗證包括成球實驗和克隆形成實驗。成球實驗通常是將細胞置于低吸附培養(yǎng)皿中,以無血清培養(yǎng)基培養(yǎng),定期添加適量生長因子,檢測其形成細胞球的能力??寺⌒纬蓪嶒炇菍⒈侗认♂尩募毎臃N到普通培養(yǎng)皿中常規(guī)培養(yǎng),一定時間之后采用甲醛固定并染色以觀察克隆的數目[28,31,32]。

    1.2.4 干性指數評估 2018年,Malta等[33]來自包括哈佛、斯坦福、MD Anderson癌癥研究中心等多個重要研究機構的研究者們基于癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中33種腫瘤的轉錄組數據采用機器學習的方法得到并驗證了可以作為腫瘤細胞干性指數的mRNAsi。2020年Zhang的課題組[34]即發(fā)表了利用該指數挖掘肺腺癌干性樣腫瘤細胞標志物的相關工作。通過對TCGA和GEO數據庫中的數據進行整合分析,Zhang課題組的工作證實了mRNAsi的分值與肺腺癌患者的臨床分期正相關,與5年生存率負相關,同時進一步鑒定到細胞周期相關基因對肺癌細胞干性樣特征的重要調控作用。

    2 肺癌干性樣細胞的耐藥機制

    2.1 ABC家族轉運蛋白促進了藥物外排 ABCB1、ABCG2和ABCC1是多藥耐藥(multidrug-resistant, MDR)蛋白家族中三個最為主要的成員,廣泛調控親水物質、親脂物質在胎盤、腸道以及血腦屏障中的轉運。其中,ABCB1和ABCG2被證實在干性細胞中普遍高表達,并與多種干性樣腫瘤細胞的多藥耐藥表型相關[24,35,36]。Chen的團隊[37]鑒定到ABCB1高表達是NSCLC細胞HCC827、HCC4006和H1299對多西他賽(Docetaxel)耐藥的主要原因,當采用依克立達(Elacridar)靶向抑制ABCB1時,能夠抑制耐藥細胞亞群的干性樣特征,并增強對Docetaxel的敏感性。Su的團隊[38]證實通過抑制SLC27A2,可以負向調控ABCG2的表達從而逆轉肺腺癌原代細胞中干性樣細胞對順鉑的耐受。

    2.2 抗氧化能力強 CSCs中的活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平普遍降低,主要原因之一是細胞內自由基清除系統(tǒng)的表達水平增高[39]。研究[40]發(fā)現(xiàn),ROS與調控干細胞生物學特性的信號通路相互調控,比如,WNT配體能刺激NADPH氧化酶(NADPH oxidase, NOX)家族成員NOX1產生ROS,產生的ROS又促進了核氧化還原蛋白(nucleoredoxin, NRX)的氧化,破壞了NRX與蓬亂(Dishevelled, DVL)蛋白的相互作用,與NRX解離的DVL能增加β-catenin的穩(wěn)定性,繼而增加其與T細胞因子(T cell factor, TCF)家族轉錄因子的相互作用,進一步調控WNT的靶基因,或者與叉形頭轉錄因子O亞型(forkhead box protein O, FOXO)家族作用,調控細胞的還原狀態(tài)。Lei的團隊[41]證實,改變細胞內的ROS水平可以通過激活Nrf2誘導Notch信號的活化,從而促進基底干細胞的自我更新,與此同時激活細胞內的抗氧化途徑來減少細胞內的ROS,以保持細胞內的氧化還原穩(wěn)態(tài)。ALDH1可以通過上調SOD2和GPX4來調控ROS-RCS代謝通路,以平衡厄洛替尼引起的細胞內ROS毒性。

    由ROS水平升高誘導細胞凋亡是多種藥物毒性的重要途徑之一,CSCs中低水平的ROS,以及增強的氧化還原平衡能力,加強了其對治療的耐受性。這種還原調控機制對于干細胞的生物學特征、肺損傷修復以及腫瘤等疾病具有重要的研究價值[42]。

    2.3 凋亡逃逸 CSCs可以通過多種機制來降低藥物引起的細胞凋亡,包括改變Bcl-2家族中抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白之間的平衡,抑制線粒體介導的凋亡通路,促進凋亡抑制因子的表達等[24,30,43]。Zeuner和同事[44]證實了從肺癌組織中提取出的LCSCs普遍高表達Bcl-XL,當采用抑制劑分子ABT737時能夠有效誘導干性樣細胞的凋亡、阻斷LCSCs移植瘤的生長。Zakaria的團隊[45]也報道了NSCLC細胞系中的CSCs高表達抗凋亡蛋白BCL-2、Bcl-XL和凋亡抑制因子survivin,并且核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)信號在其中起到了關鍵調控作用。

    此外,與正常成體干性細胞一樣,干性樣腫瘤細胞也會通過進入休眠狀態(tài)來維持組織平衡,并且在微環(huán)境不利于其生存的情況下,起到自我保護的作用[46]。休眠狀態(tài)的細胞周期一般停滯在G0期,這就降低了對靶向細胞快速增殖特征的傳統(tǒng)化療藥物的敏感性,同時,休眠的LCSCs被證實促凋亡蛋白活性顯著降低,并能通過自噬和內質網應激等途徑適應性生存[24,46,47]。

    2.4 DNA損傷修復能力增強 研究發(fā)現(xiàn),CSCs的DNA損傷修復能力很強。DNA損傷的主要感受蛋白包括ATM和ATR相關的蛋白激酶,ATM識別雙鏈DNA斷裂,ATR識別單鏈斷裂。當DNA發(fā)生損傷,ATM和ATR激酶會與PARP-1、BRCA1形成復合體,磷酸化CHK1和CHK2,繼而促進下游靶蛋白的活化,包括p53和CDC25A,促進細胞周期停滯,給細胞足夠的時間進行DNA損傷修復或者誘導凋亡。目前認為與CSCs的耐藥有關的DNA修復蛋白主要包括CHK1、CHK2、ATR、MSI1、RAD50和RAD51。

    Bartucci團隊[48]驗證到,由NSCLC患者組織就分離到的干性樣腫瘤細胞,在化療藥物引起的損傷應答過程中,CHK1是最早也是最顯著的活化指標,并且不依賴于p53的狀態(tài)。而在已經分化的肺癌細胞中,CHK1的活化很微弱。體內、體外采用CHK1的抑制劑聯(lián)合化療能夠顯著地抑制干性樣肺癌細胞。

    Yu的團隊[49]對比了干性樣和非干性樣肺腺癌細胞在順鉑作用下的DNA損傷修復能力,證實前者細胞中DNA損傷更小,可能是由于AQP2和CTR1的下調,因此具有對順鉑引起的DNA雙鏈間的損傷修復能力更強。

    2.5 與腫瘤微環(huán)境的相互影響 多項研究證實,CSCs與其所處的微環(huán)境之間存在相互調控關系。如前所述,營養(yǎng)和氧氣的缺失、炎性反應,以及藥物作用等都可能促進腫瘤細胞通過去分化獲得干性。此外,細胞外基質的改變可以通過應力傳導影響細胞骨架、形態(tài)和粘附力,并調控在CSCs干性維系中發(fā)揮重要作用的轉錄因子YAP/TAZ的活性。YAP/TAZ的靶基因中包括了參與EMT調控的重要蛋白,而同時細胞EMT過程中伴隨的形態(tài)與粘附力等的改變又作為上游調控因子直接影響了YAP/TAZ的活性[50]。近來不少研究者們提出,YAP/TAZ的磷酸化能夠對非干性腫瘤細胞重編程,使其具備完整的CSCs屬性[50,51]。Kurppa等[47]通過試驗證實LCSCs在藥物的作用下可以通過啟動YAP介導的重編程進入休眠狀態(tài)而逃避凋亡,Pisanu的團隊[52]也提到在LCSCs中硬脂酰輔酶A脫氫酶SCD1主要是通過調控YAP/TAZ的活性維系細胞的干性特征以及對順鉑的耐受表型。

    此外,CSCs的自我更新和多向分化能力會造成腫瘤細胞的異質性,并且抑制腫瘤微環(huán)境對免疫細胞的招募[53,54]。

    3 靶向肺癌干性樣細胞逆轉耐藥的策略

    3.1 誘導分化 Zhai的團隊[55]證實神經表皮生長因子樣蛋白NELL1能夠通過抑制c-MET-Notch信號誘導LCSCs的分化,Huang的團隊[56]證實綠原酸(chlorogenic acid)可以增強SUMO1的表達,引起c-Myc的類泛素化繼而促進LCSCs的分化。這些研究結果表明,通過誘導LCSCs的分化可以有效降低腫瘤細胞的成瘤能力、增強腫瘤細胞對藥物的敏感性。

    3.2 靶向調控細胞干性的關鍵蛋白和信號通路 早期用來戒酒的雙硫侖(Disulfiram)能夠抑制ALDH活性,近來在包括肺癌在內的多種腫瘤中被證實具有抑制腫瘤的作用[57]。Ouyang等[58]在實驗中鑒定到芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor, AhR)可以通過與干性特征基因ABCG2、KLF4和c-Myc啟動子的結合來促進這些基因的表達,而小分子抑制劑TCID可以通過靶向抑制泛素羧基末端水解酶L3的活性,增強AhR的降解,最終達到抑制LCSCs的效果。

    一些靶向Wnt、Notch、Hedgehog和Hippo信號通路的單克隆抗體分子已經進入了臨床試驗階段,包括DLL4的抗體Demcizumab、Wnt/Fzd的廣譜抗體Vantictumab、Hedgehog通路的抗體Taladegib和Saridegib,以及靶向Hippo通路的Pevonedistat等,但是效果和毒性仍然有待評估。由于這些調控CSCs干性的蛋白和信號通路同樣也在正常成體干細胞中發(fā)揮重要功能,因此在臨床應用中需要更加謹慎[4]。

    值得關注的是,姜黃素和異硫氰酸鹽等天然藥物成分,在靶向LCSCs中同樣表現(xiàn)出了重要潛力。比如,姜黃素能有效抑制LCSCs的Wnt和Hedgehog通路,而異硫氰酸鹽能夠通過調控miR-214,繼而抑制MYC的轉錄[59,60]。

    3.3 靶向腫瘤微環(huán)境 鈣調蛋白的抑制劑分子CBP501,在小鼠模型中可以抑制巨噬細胞分泌的IL-6、IL-10和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF),從而阻斷了肺腺癌中ABCG2的表達及細胞的成球能力和成瘤能力,限制了肺癌細胞的轉移[61]。阿帕替尼近來在晚期肺癌患者的II期臨床試驗中表現(xiàn)良好,研究者們發(fā)現(xiàn)阿帕替尼可以通過靶向血管內皮細胞生長因子受體2(vascular endothelial growth factor receptor 2, VEGFR2)降低腫瘤微環(huán)境中巨噬細胞誘導的肺癌細胞EMT重編程而達到有效抑制肺癌發(fā)展的效果[62]。

    4 小結與展望

    LCSCs是一群具有自我更新、多向分化和無限增殖能力的細胞亞群,被提出并證實是肺癌發(fā)生、耐藥、復發(fā)和轉移的主要原因。LCSCs既能由正常成體干細胞或前體細胞惡性轉化而來,也可由普通肺癌細胞發(fā)生去分化獲得干性而產生。具有干性特征的肺癌細胞由于其較強的藥物外排與解毒能力、增強的抗凋亡與DNA損傷修復能力,以及對腫瘤微環(huán)境的適應與調節(jié)能力,對傳統(tǒng)化療、靶向治療和免疫治療均表現(xiàn)出了耐受,同時,在腫瘤的異質性調控中也發(fā)揮了重要作用。因此,鑒定和靶向LCSCs是臨床克服耐藥與復發(fā)的關鍵之一。

    LCSCs的干性主要受到Wnt、Notch、Hedgehog和Hippo通路以及SOX2、c-Myc、Oct-4和TP53等基因的調控,并受到氧化還原水平和腫瘤微環(huán)境中細胞外基質(extracellular matrix, ECM)與多種細胞因子的影響,然而由于LCSCs與正常成體干細胞和前體細胞具有相似的調控網絡,鑒定到其特異性調控靶點對于臨床具有重要的意義。同時,由于LCSCs對藥物分子的高外排能力,CSCs的特異性藥物運載方法對于提高藥物吸收也很有幫助。

    LCSCs的調控因素復雜,并受到微環(huán)境的多重影響,因此在研究過程中需要更加接近人體腫瘤實際結構與微環(huán)境的培養(yǎng)模式,包括腫瘤細胞的立體生長、多種細胞的共培養(yǎng)等,人源腫瘤異種移植(patient-derived xenografts,PDX)模型、類器官以及更新的仿生系統(tǒng)能夠更好地增加研究結果的可靠性。同時,干性樣腫瘤細胞的異質性、細胞分化狀態(tài)的可逆性和調控機制的多樣性,增加了肺癌臨床對精準醫(yī)療的需求,以及依靠無創(chuàng)技術對患者進行長期監(jiān)測的需求。

    猜你喜歡
    干性靶向干細胞
    干細胞:“小細胞”造就“大健康”
    如何判斷靶向治療耐藥
    薯蕷皂苷元調控Nrf2信號通道干預大鼠干性AMD氧化應激機制的研究
    MUC1靶向性載紫杉醇超聲造影劑的制備及體外靶向實驗
    毛必靜:靶向治療,你了解多少?
    肝博士(2020年5期)2021-01-18 02:50:18
    造血干細胞移植與捐獻
    干細胞產業(yè)的春天來了?
    夏季頻發(fā)溺水事件,“干性溺水”是怎么回事
    方圓(2017年12期)2017-07-17 17:48:12
    夏季游泳要提防“干性溺水”
    靶向超聲造影劑在冠心病中的應用
    久久精品人妻少妇| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 老司机午夜十八禁免费视频| 久久人妻av系列| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 老熟妇仑乱视频hdxx| 丰满人妻一区二区三区视频av | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久精品91蜜桃| 热99在线观看视频| 欧美一区二区亚洲| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲在线自拍视频| 久久久久久人人人人人| 亚洲无线在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 久久久久久久久中文| 12—13女人毛片做爰片一| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 免费看日本二区| 国产欧美日韩精品一区二区| 成人国产一区最新在线观看| 99国产综合亚洲精品| 成人av在线播放网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲中文字幕日韩| 久久精品影院6| a在线观看视频网站| 亚洲不卡免费看| 国产毛片a区久久久久| 少妇人妻一区二区三区视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲精品456在线播放app | 成人一区二区视频在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 综合色av麻豆| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久精品国产清高在天天线| 久久午夜亚洲精品久久| 看片在线看免费视频| 国产高潮美女av| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美日韩福利视频一区二区| 真人做人爱边吃奶动态| 在线视频色国产色| 老鸭窝网址在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 少妇高潮的动态图| 色吧在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 日本在线视频免费播放| 国产午夜福利久久久久久| 丰满人妻一区二区三区视频av | 白带黄色成豆腐渣| 亚洲片人在线观看| 国产精华一区二区三区| 精品国内亚洲2022精品成人| av天堂在线播放| 午夜福利免费观看在线| 免费在线观看成人毛片| 国内精品一区二区在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 一本久久中文字幕| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产成人系列免费观看| 91久久精品国产一区二区成人 | 午夜福利18| 日本免费a在线| 免费看日本二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 丁香欧美五月| 午夜免费激情av| 九色国产91popny在线| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲av美国av| 女警被强在线播放| 国产精品亚洲美女久久久| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 51午夜福利影视在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 在线天堂最新版资源| 日韩欧美三级三区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久久久久久中文| 国产三级在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 成人18禁在线播放| 亚洲电影在线观看av| 免费高清视频大片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产免费男女视频| 欧美bdsm另类| 麻豆国产av国片精品| 免费一级毛片在线播放高清视频| 村上凉子中文字幕在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产成人a区在线观看| 久久久久久人人人人人| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产单亲对白刺激| 白带黄色成豆腐渣| 99在线人妻在线中文字幕| 女警被强在线播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲美女视频黄频| 真人一进一出gif抽搐免费| 99热精品在线国产| 亚洲国产精品sss在线观看| 免费搜索国产男女视频| 国产精品一区二区免费欧美| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲性夜色夜夜综合| 99久国产av精品| 成年版毛片免费区| 99在线人妻在线中文字幕| 很黄的视频免费| 国产伦在线观看视频一区| 国产一区二区在线观看日韩 | 内射极品少妇av片p| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品 国内视频| 日韩亚洲欧美综合| 午夜日韩欧美国产| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 十八禁人妻一区二区| 天堂网av新在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 18禁在线播放成人免费| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久久久性生活片| 在线观看66精品国产| 国产成年人精品一区二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲一区二区三区不卡视频| 一进一出好大好爽视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲内射少妇av| 桃色一区二区三区在线观看| 在线天堂最新版资源| 亚洲国产欧美人成| 99久国产av精品| 国产视频一区二区在线看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品无人区乱码1区二区| 中文资源天堂在线| 久久久久久久久久黄片| 免费看日本二区| 国产视频一区二区在线看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 精品福利观看| 99在线人妻在线中文字幕| 成人鲁丝片一二三区免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 综合色av麻豆| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 亚洲久久久久久中文字幕| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜福利免费观看在线| 一本精品99久久精品77| 国产三级在线视频| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| xxxwww97欧美| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久久国产精品麻豆| 特大巨黑吊av在线直播| 国产午夜福利久久久久久| av在线天堂中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美在线一区亚洲| 9191精品国产免费久久| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 日本成人三级电影网站| 欧美日韩乱码在线| 日日夜夜操网爽| 久久国产乱子伦精品免费另类| 免费人成视频x8x8入口观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 波野结衣二区三区在线 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲最大成人中文| 好男人电影高清在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 国产 一区 欧美 日韩| 此物有八面人人有两片| 禁无遮挡网站| 亚洲色图av天堂| 久久久久久国产a免费观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 全区人妻精品视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 中文字幕高清在线视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品久久久久久,| 波多野结衣高清作品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产69精品久久久久777片| 亚洲在线自拍视频| 男人舔奶头视频| av在线天堂中文字幕| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲一区二区三区不卡视频| 在线观看av片永久免费下载| 91av网一区二区| 一级a爱片免费观看的视频| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成人av激情在线播放| 亚洲电影在线观看av| 国产成年人精品一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 中文字幕av在线有码专区| 在线视频色国产色| 最后的刺客免费高清国语| 中文字幕久久专区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| www.色视频.com| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久 | 男人和女人高潮做爰伦理| 真人做人爱边吃奶动态| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品 国内视频| 亚洲精品456在线播放app | 69av精品久久久久久| 女警被强在线播放| 久久久久久久久中文| 日本五十路高清| 欧美一区二区国产精品久久精品| 桃红色精品国产亚洲av| 国产亚洲精品一区二区www| 五月玫瑰六月丁香| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美又色又爽又黄视频| 成人av在线播放网站| 欧美最新免费一区二区三区 | 一个人免费在线观看的高清视频| 精品无人区乱码1区二区| 中文字幕高清在线视频| 日韩免费av在线播放| 床上黄色一级片| xxxwww97欧美| 久久国产精品影院| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲av电影在线进入| 99热6这里只有精品| 中文在线观看免费www的网站| 特级一级黄色大片| 国产成人系列免费观看| 90打野战视频偷拍视频| 欧美中文综合在线视频| 国产亚洲精品一区二区www| 欧美+亚洲+日韩+国产| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 久久精品影院6| 男人的好看免费观看在线视频| svipshipincom国产片| 国产精品99久久久久久久久| 好男人电影高清在线观看| 波多野结衣高清作品| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 波多野结衣高清无吗| 久久久久久久午夜电影| 午夜老司机福利剧场| 99久久综合精品五月天人人| 免费观看精品视频网站| 动漫黄色视频在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 乱人视频在线观看| 99热6这里只有精品| 中文字幕av在线有码专区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 88av欧美| av女优亚洲男人天堂| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产真人三级小视频在线观看| 极品教师在线免费播放| 欧美中文日本在线观看视频| 国产熟女xx| 91av网一区二区| www.www免费av| 亚洲国产中文字幕在线视频| 99视频精品全部免费 在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 91麻豆av在线| 欧美+日韩+精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲av一区综合| 精品久久久久久久久久久久久| 欧美日韩黄片免| 九九热线精品视视频播放| aaaaa片日本免费| 日韩国内少妇激情av| 色噜噜av男人的天堂激情| 香蕉丝袜av| 色av中文字幕| 久久伊人香网站| 黄色成人免费大全| 天堂√8在线中文| 亚洲欧美激情综合另类| 午夜视频国产福利| 成年版毛片免费区| 国产精品久久久久久精品电影| 免费看十八禁软件| 高潮久久久久久久久久久不卡| 动漫黄色视频在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 一级黄片播放器| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲国产精品999在线| 极品教师在线免费播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久亚洲精品不卡| 俺也久久电影网| 日韩欧美在线二视频| 国语自产精品视频在线第100页| av天堂在线播放| 免费观看人在逋| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 黄色成人免费大全| 99热只有精品国产| 在线看三级毛片| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 草草在线视频免费看| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲av成人精品一区久久| 国产三级中文精品| 国产高清有码在线观看视频| 欧美大码av| av天堂在线播放| 18禁美女被吸乳视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 97碰自拍视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 最近视频中文字幕2019在线8| 99久久精品一区二区三区| 国产成人福利小说| 午夜视频国产福利| 听说在线观看完整版免费高清| 日韩欧美在线乱码| 18禁在线播放成人免费| 欧美乱色亚洲激情| 18禁美女被吸乳视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 欧美激情在线99| 天天一区二区日本电影三级| 免费搜索国产男女视频| 欧美日韩综合久久久久久 | 色综合亚洲欧美另类图片| 日本在线视频免费播放| 亚洲,欧美精品.| 国产精品一区二区免费欧美| 一二三四社区在线视频社区8| 高潮久久久久久久久久久不卡| 五月玫瑰六月丁香| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美性猛交黑人性爽| 国产探花在线观看一区二区| 国产精品三级大全| 亚洲成av人片在线播放无| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 免费大片18禁| 激情在线观看视频在线高清| 精品久久久久久久末码| 亚洲中文字幕日韩| 在线观看日韩欧美| 亚洲真实伦在线观看| aaaaa片日本免费| 国产三级在线视频| 午夜福利成人在线免费观看| 一a级毛片在线观看| 校园春色视频在线观看| 一区福利在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 欧美另类亚洲清纯唯美| 香蕉av资源在线| xxx96com| 国产成人福利小说| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲av熟女| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲黑人精品在线| 亚洲电影在线观看av| 亚洲最大成人手机在线| 91字幕亚洲| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲激情在线av| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久久久久久午夜电影| 又黄又粗又硬又大视频| 国产真人三级小视频在线观看| 99热这里只有精品一区| 免费电影在线观看免费观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 人人妻人人看人人澡| 免费看美女性在线毛片视频| 成年版毛片免费区| 亚洲成av人片免费观看| 日韩人妻高清精品专区| 欧美中文日本在线观看视频| 久久99热这里只有精品18| 真实男女啪啪啪动态图| 成年女人永久免费观看视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 久9热在线精品视频| 中文字幕av成人在线电影| 在线看三级毛片| 亚洲精品成人久久久久久| 国产成人啪精品午夜网站| 国产私拍福利视频在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 日本免费a在线| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜免费激情av| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美色欧美亚洲另类二区| 美女免费视频网站| 日韩欧美国产在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 欧美成人性av电影在线观看| 午夜两性在线视频| 操出白浆在线播放| 亚洲成人中文字幕在线播放| 级片在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美日韩综合久久久久久 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 日本免费一区二区三区高清不卡| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲av免费在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美在线黄色| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久99久视频精品免费| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久久国内视频| 黄色日韩在线| 色播亚洲综合网| 欧美日本视频| a级毛片a级免费在线| 久久久久久久久中文| 久久久久久久午夜电影| 免费在线观看日本一区| 十八禁网站免费在线| 亚洲在线自拍视频| 99热只有精品国产| 九色国产91popny在线| 国产免费av片在线观看野外av| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产一区在线观看成人免费| xxx96com| 叶爱在线成人免费视频播放| 一个人看的www免费观看视频| 日本一二三区视频观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99精品欧美一区二区三区四区| 9191精品国产免费久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 夜夜夜夜夜久久久久| 黄色女人牲交| 国产激情偷乱视频一区二区| 丝袜美腿在线中文| av在线蜜桃| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产免费av片在线观看野外av| 99精品在免费线老司机午夜| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久香蕉精品热| 一级黄片播放器| 热99在线观看视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费搜索国产男女视频| ponron亚洲| 成年女人毛片免费观看观看9| 香蕉av资源在线| 色综合婷婷激情| 99久久无色码亚洲精品果冻| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 中文资源天堂在线| www.www免费av| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品 欧美亚洲| 久久精品综合一区二区三区| 网址你懂的国产日韩在线| 精品一区二区三区视频在线 | av黄色大香蕉| 午夜福利免费观看在线| 在线观看66精品国产| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产成人系列免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 在线观看免费视频日本深夜| 国产日本99.免费观看| 精品国产美女av久久久久小说| 波多野结衣巨乳人妻| 嫩草影院入口| 亚洲精品亚洲一区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久香蕉国产精品| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产成人aa在线观看| 久久亚洲精品不卡| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 日韩精品青青久久久久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 麻豆国产97在线/欧美| 老熟妇乱子伦视频在线观看| bbb黄色大片| 99久久精品热视频| netflix在线观看网站| 成人无遮挡网站| 亚洲精品一区av在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 国产伦精品一区二区三区四那| 色播亚洲综合网| 久久精品人妻少妇| 国产在视频线在精品| 欧美性感艳星| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 免费看日本二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 激情在线观看视频在线高清| 热99re8久久精品国产| 欧美午夜高清在线| 香蕉久久夜色| 欧美色视频一区免费| 少妇丰满av| 99久久精品一区二区三区| 嫩草影院入口| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久国产精品人妻蜜桃| 日本a在线网址| 免费在线观看影片大全网站| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品98久久久久久宅男小说| 老司机午夜十八禁免费视频| 岛国视频午夜一区免费看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲国产色片| 国产精品久久久人人做人人爽| 搡老熟女国产l中国老女人| 成年人黄色毛片网站| 一a级毛片在线观看| 日韩欧美在线乱码| 青草久久国产| 色噜噜av男人的天堂激情| 看黄色毛片网站| 黄片大片在线免费观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 看黄色毛片网站| 禁无遮挡网站| 最新中文字幕久久久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 最后的刺客免费高清国语| 91av网一区二区| 真人做人爱边吃奶动态| 桃红色精品国产亚洲av| 国产不卡一卡二| netflix在线观看网站| 亚洲av免费高清在线观看| 久久亚洲精品不卡| 亚洲一区二区三区不卡视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲人成电影免费在线| 国产私拍福利视频在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产私拍福利视频在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲成人久久爱视频| 色吧在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美黄色片欧美黄色片| 精品福利观看|