獸醫(yī)實驗室檢測技術(shù)在動物疫病防控中的作用

楊 青

（四川省達州市動物疫病預防控制中心，四川達州 635000）

獸醫(yī)實驗室的建立對動物疫病的防控起到了重要的積極作用，其承擔了動物疫病的診斷、監(jiān)測、監(jiān)督、調(diào)查等重要方向的研究。實驗室檢測技術(shù)為動物疫病的防控工作提供了堅實的技術(shù)支持，其中包括了專業(yè)的實驗場所、儀器、設備、人員等，同時獸醫(yī)實驗室具有較高的技術(shù)標準，使其檢測結(jié)果具有高效，科學，準確的特點。

獸醫(yī)實驗室的存在對動物疫病的防控起到了以下3個方面的作用：∶一是為動物疫病的病因、病源提供科學準確的診斷依據(jù)，從根源上降低了動物的死亡率，提高了動物的治愈率、存活率；二是為動物防控工作提供了流動監(jiān)督預警的技術(shù)支持，通過相應檢測技術(shù)可以對動物疫病的發(fā)展趨勢進行合理預測；三是通過對動物肉食品加工的檢測為人類的可食用安全提供了保障。

1 常見的動物疫病及常規(guī)防控手段

1.1 動物疫病

動物疫病是指以動物為疾病宿主（病原侵襲）發(fā)生的傳染病、寄生蟲病以及大規(guī)模動物死亡等癥狀，動物疫病的出現(xiàn)對維護人類健康和畜牧生產(chǎn)的正常開展有著巨大的負面沖擊。《中華人民共和國動物防疫法》依照影響嚴重性將動物疫病劃分為三類，一類17種，二類77種，三類63種。

在影響人類健康方面主要是由于動物疫病引起的人畜共患病（自然疫源性疾?。?，人畜共患病是由WHO與聯(lián)合國農(nóng)糧組織共同命名的，是由人和動物攜帶的共同病原體（病毒、真菌、細菌、寄生蟲）所引起的。據(jù)統(tǒng)計，全球已有250種被證實的人畜共患病，我國約有90種，其中被人們廣泛熟知的疾病有鼠疫、布氏桿菌病、炭疽、狂犬病、口蹄疫、絳蟲病等，在歷史的長河中共有三次較為大型的世界性傳染病大流行，其中SARS更是給世界人民留下了深刻印象。

動物疫病病原體變異速度快、亞型多，以口蹄疫為例，口蹄疫屬于RNA病毒類，感染人類會造成手、足、面部及口腔的丘疹進而轉(zhuǎn)變成水皰，并伴隨發(fā)熱、頭痛、惡心、腹瀉等全身性癥狀?？谔阋吖财邆€血清類型，包括O型、A型、C型、亞洲I型以及南非1、2、3，目前全球流行最多的為A、O兩型，A型口蹄疫最易發(fā)生病原體異變，該類毒株抵抗力強、隱蔽性強、生命活性強，多發(fā)生于早春及秋末。

1.2 動物疫病防治手段

（1）日常免疫：規(guī)模養(yǎng)殖場按程序進行疫苗注射，散養(yǎng)戶進行春秋防集中免疫。（2）環(huán)境消殺：定期對場地、衣物、動物接觸物消毒，動物糞便及剩余飼料經(jīng)堆積發(fā)酵處理，加強養(yǎng)殖戶的環(huán)境衛(wèi)生意識。（3）封鎖隔離：確認疫區(qū)后，嚴格封鎖，嚴禁隨意移動病畜。（4）斷絕傳染源：動物尸體進行焚燒或深埋處理，對同群豬撲殺。

2 獸醫(yī)實驗室檢測技術(shù)應用

2.1 組織病理學檢測技術(shù)（Histopathological detection technique）

組織病理學（Histopathology）一詞起源于《結(jié)核病學名詞》，包括病理學及免疫病理學，其中病理學檢測技術(shù)（Pathological detection technology）是將恐患有疫病的動物活檢組織切片，通過顯微鏡觀察其組織細胞的特征性病變及病理變化的檢測手段。免疫病理學檢測技術(shù)（Immunopathological detection technique）又稱免疫組織化學技術(shù)，主要針對免疫組織細胞通過對病理細胞染色，來定位查找標記抗體、抗原對其進行定性檢測操作。該檢測技術(shù)不僅具有病理學檢測技術(shù)的直觀觀察性而且具有特異性檢測組織的特點，并且可結(jié)合原位PCR技術(shù)對動物疫病的發(fā)病機理及過程進行深入研究，例如家豬的呼吸道感染疾病，由于其病原具有多樣性致使家豬的呼吸道感染具有一定的差異性，通過該技術(shù)的使用可以明確具體致病原，提高家豬的治療效果。由于組織病理學檢測技術(shù)的直觀性及較高的可操作性使得該項技術(shù)在獸醫(yī)實驗室中廣泛使用。

2.2 分子生物學檢測技術(shù)（Molecular biology detection technology）

分子生物學檢測技術(shù)是以蛋白質(zhì)及核酸為樣本分析對象，通過分析因基因結(jié)構(gòu)及基因異常表達而引起的動物相關(guān)基因功能的變化，為動物疫病的診斷、研究提供詳細數(shù)據(jù)的一項常用檢測技術(shù)。其特點是快速診斷、及時掌握動物疫病的各項動態(tài)變化，通常采用基因芯片試劑盒和聚合式酶聯(lián)反應（Polymeric enzyme linked reaction，PCR）PCR是通過獲取動物病原體的特異DNA片段來進行動物疾病診斷的，其中包括RT-PCR，Multi-PCR等，可以起到快速、準確檢測病原體的作用。

在檢測中常用到的檢測手段有核酸分子雜交（Molecular hybridization of nucleic acid）、基因測序技術(shù)（Gene sequencing technology）?，F(xiàn)在常用的實時熒光定量PCR技術(shù)，在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析，使分子生物學檢測更方便、快捷。分子生物學檢測技術(shù)的使用要求實驗室人員具有較高的專業(yè)水平，同時也體現(xiàn)了動物實驗室在動物疫病防治中的專業(yè)程度。

2.3 病原學檢測技術(shù)（Pathogen detection technology）

病原學檢測就是探索動物疫病病因的檢測手段，主要以細菌、病毒、寄生蟲作為研究對象。多采用現(xiàn)代微生物學技術(shù)、細胞培養(yǎng)法、蟲體檢查法、生物學檢查法等對動物的病原研究對象進行分離、培養(yǎng)等工作，其中病毒的分離與鑒定在檢測口蹄疫的動物疾病中較為重要，但由于其具有一定傳染性且實驗耗時較長使得該項技術(shù)對于實驗室及人員要求較高。該項技術(shù)可以通過對直接病原的檢測達成動物疫病的有效預防，政府及相關(guān)專業(yè)人士要重視該項技術(shù)的價值性與推廣性。

2.4 血清學檢測技術(shù)（Serological detection technology）

生物體內(nèi)存在的免疫應答系統(tǒng)會在宿主出現(xiàn)發(fā)炎感染時產(chǎn)生相應抗體，血清學檢測技術(shù)就是基于抗原及與其對應抗體之間的特異性結(jié)合反應，通過染病動物體內(nèi)抗體水平的變化情況進行免疫應答水平分析，并制定科學合理有效的治療方案。血清學檢測可分為凝集性反應（沉淀試驗）、補體參與反應（免疫粘附血凝試驗）、中和試驗（毒素中和試驗）、標記抗體（酶標抗體）及免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)等。其中酶聯(lián)免疫吸附試驗具有高效（反應時間1～2 h）便捷、適合大規(guī)模檢測的特點而被廣泛使用。

血清學檢測技術(shù)的應用具有較高的臨床意義：其一，做到動物疫病的預警作用，在指定區(qū)域內(nèi)有效規(guī)避大范圍動物疫病爆發(fā)的指標是疫苗的免疫合格率，血清學檢測技術(shù)是防控動物疫病的重要環(huán)節(jié)。其二，輔助疫苗免疫程序的修訂，通過對動物體內(nèi)免疫抗體的動態(tài)變化經(jīng)過專業(yè)分析可進一步掌控動物疫病抗體水平的變化規(guī)律，有針對性地進行免疫程序的修訂。其三，確定動物疫苗療效，在動物接種疫苗后對動物機體的抗體水平進行監(jiān)測，可以進一步確定疫苗的免疫效能。

2.5 其他檢測技術(shù)

免疫膠體金快速診斷試紙條，該測定方式簡單且容易操作，目前適用于豬瘟、禽流感、口蹄疫等疾病的快速診斷。儀器檢測的應用，例如全自動酶免工作站（ELISA）。多功能新型生物液體處理工作站（VERSA）、實時熒光定量PCR儀等。

3 實驗室檢測技術(shù)在動物疫病防控中的重要作用

3.1 正確判斷作用

隨著現(xiàn)代化畜牧業(yè)的蓬勃發(fā)展，動物疾病的種類、數(shù)量的急劇增多，如何進行正確診斷動物疫病的病因成為了動物疫病防控階段的重要研究方向。動物疫病病因的正確判斷是為了有效遏制動物疾病的發(fā)生和死亡，避免給畜牧業(yè)發(fā)展造成的嚴重經(jīng)濟損失的重要手段。

在獸醫(yī)進行動物疫病臨床診療的時候，非常容易出現(xiàn)診斷錯誤、病因判斷錯誤等現(xiàn)象，在診斷錯誤的延伸下，又會產(chǎn)生對動物疫病的錯誤治療，錯誤藥物選擇及治療方法的錯誤性，會導致動物疫病的全面爆發(fā)，造成物力、人力、財力的巨大損失。在不影響人類健康的情況下，給動物的養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來了較為嚴重的危害及損失。獸醫(yī)實驗室相關(guān)檢測技術(shù)的使用就達到了正確判斷動物疫病病因、病源的有效性，例如，獸醫(yī)實驗室中聚合酶鏈反應技術(shù)的應用。在動物疫病的診斷方面，其特異性高，針對性強，可以檢測出正在繁殖的病原體，同時也可以檢測出潛伏的病原體。對感染的情況進行詳細的了解，同時，對于動物疫病的檢測樣本要求較低，簡便又快速，在2～4 h內(nèi)就可以獲得檢測結(jié)果。該技術(shù)手段遏制了病原體逃逸，從根源上防止了傳染病擴散?，F(xiàn)存應用該技術(shù)檢測的動物疫病種類有豬圓環(huán)病毒、雞毒霉形體、禽呼腸孤病毒、魏氏梭菌病等等，并且隨著PCR技術(shù)在獸醫(yī)實驗室的廣泛使用，其在臨床快速診斷動物疫病上得到了充分的肯定。由此可見，獸醫(yī)實驗室的檢測技術(shù)在防控階段可以起到正確判斷的作用。

3.2 警示預防作用

隨著中國實力的不斷增強，經(jīng)濟的迅速發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)逐漸對外擴張，那么就出現(xiàn)了對外貿(mào)易的特點。大量的出入境動物的交易，容易造成外來病毒細菌的侵害。獸醫(yī)實驗室的相關(guān)檢測技術(shù)可以對境外動物進行正確科學的防疫檢測工作，使得獸醫(yī)實驗室在動物疫病的防御階段起到了警示預防的作用。當前，我國需要提防的動物疫病種類主要是非洲豬瘟，該病例的來源主要是俄羅斯。相關(guān)防疫人員通過對于非洲豬瘟的動物疫病來源進行及時有效的隔離，檢測，達到對高烈性傳染病的預防工作。

例如，2021年9月22日，四州省達州市就組織開展了關(guān)于預防非洲豬瘟等重大動物疫病的防預培訓工作，由此可見，對于非洲豬瘟的預防工作是較為關(guān)鍵的。非洲豬瘟的的發(fā)病癥狀與其他普遍豬瘟都較為相似，采用常規(guī)的診療方法并不能準確的確認，只有通過實驗室檢測，才能進行正確的鑒別，獸醫(yī)實驗室的檢測在針對診斷非洲豬瘟上面的技術(shù)有：動物接種試驗、紅細胞吸附試驗、間接免疫熒光實驗、直接免疫熒光試驗以及酶聯(lián)免疫吸附試驗等。中國在2019年先后出臺了非洲豬瘟疫情應急實施方案以及關(guān)于加強非洲豬瘟防控工作的意見，從國家性的法規(guī)文件的出臺，體現(xiàn)出非洲豬瘟對于國內(nèi)動物的健康影響的嚴重性，并側(cè)面體現(xiàn)了獸醫(yī)實驗室檢測技術(shù)對于正確診斷重大動物疫病的警示預防作用[1～3]。

3.3 及時撲滅作用

獸醫(yī)實驗室通過檢疫技術(shù)的運用能夠?qū)游镆咔檫_到有效消滅的效果，并且是從病源剛剛出現(xiàn)的時候進行消滅措施。例如，通過抗體測試技術(shù)，在動物的個體免疫中體液免疫和細胞免疫會對動物的整體狀況產(chǎn)生很重要的影響，在動物整個繁殖過程中，如果發(fā)生了疾病傳染的狀況，經(jīng)過體液免疫和細胞免疫的共同影響動物身上就會形成了大量的抗體，獸醫(yī)實驗室可以通過對動物身上的抗體進行測試，來評估生物的疾病傳染狀況，可以說是在動物疾病剛要出現(xiàn)的階段，就對動物實施了科學的診斷，實現(xiàn)了從最微小源頭上的消滅，從而大大地提高了動物的生存率，同時還可以隨著動物身上抗體的變異，通過專業(yè)的分析檢驗等手段，對動物疾病出現(xiàn)的規(guī)律做出了合理的預報，對進一步開展動物疫病疾病的研究工作提供了較為豐富的數(shù)據(jù)資源。

3.4 流動監(jiān)測作用

獸醫(yī)實驗室的監(jiān)測技術(shù)可以為動物生命全過程進行流動監(jiān)測的監(jiān)督管理。在整個動物疫病的防控過程中，其中有五項工作是整體防控必須要采取的重點工作內(nèi)容，包括了動物疫病病原、病因的檢測，動物疫病疫苗的注射，動物生存環(huán)境的消毒，動物尸體的消滅以及最后的關(guān)于動物疫病的后續(xù)管控。在整個的防控過程中，獸醫(yī)實驗室的檢測技術(shù)時刻是穿插其中對動物疫病防控起到了流動監(jiān)測的作用[4]。

以口蹄疫為例，可以采用抗體檢測（液相阻斷ELISA試劑盒、免疫膠體金試劑盒）或抗原檢測（熒光RT-PCR試劑盒、反向間接血凝試劑）。通過不同的監(jiān)測技術(shù)手段應用于動物疫病的發(fā)生、發(fā)展以及預后等過程，起到了對動物疫病的全過程的整體監(jiān)督。在動物疫病的發(fā)生發(fā)展中國家對于動物疫病的檢測手段有嚴格的指向性，例如：布魯菌病的指定診斷方法為虎紅平板實驗試管凝集試驗，由此可見，實驗室檢測技術(shù)在動物疫病的防控過程中的重要作用[5]。

以抗體檢測技術(shù)作為說明的示范例子，首先是動物疫病的診斷，抗體可以出現(xiàn)三種情況：一是動物疫病發(fā)生階段，還未產(chǎn)生抗體的時候，通過抗體檢測與病原學檢測結(jié)合，進行對動物疫病萌芽狀態(tài)的治療管理工作；二是動物疫病發(fā)展過程中，抗體檢測會呈陽性，專業(yè)人士可以根據(jù)檢測結(jié)果進行發(fā)展趨勢的預測，進行后一步的防控管理工作；三是動物疫病的預后階段，體內(nèi)只產(chǎn)生了少量的抗體，通過結(jié)合其他的檢測手段，例如，病原學檢測、分子生物學檢測等。對動物進行科學合理的診斷治療以及治愈，可以說實驗室的檢測技術(shù)對于動物疫病的整體防控就是全程監(jiān)督的，流動監(jiān)督對于疫病的有效遏制起到了至關(guān)重要的作用。

4 結(jié)語

隨著動物疫病種類的不斷擴大，且動物與人類健康關(guān)系的相關(guān)性、密切性，獸醫(yī)實驗室的良好建立是動物疫病防控工作的重點內(nèi)容。鑒于獸醫(yī)實驗室在動物疫病防控工作中的重要性，國家及相關(guān)機構(gòu)要重視實驗室檢測技術(shù)的應用，專業(yè)的檢測技術(shù)可以對動物疫病防控的各個階段進行監(jiān)測、監(jiān)督、預警并對為未發(fā)生的動物疫病的防治工作提供有效的數(shù)據(jù)信息，對于未來動物疫病的防控起到了基礎鞏固的作用，相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員要提高自身的檢測水平，切實的為人民的人身健康保駕護航，同時對維護社會經(jīng)濟起到了重要的作用。