新鮮艾葉與陳化艾葉揮發(fā)油化學(xué)成分研究

任凌麗，李浩，錢雪，陳亮，劉卉，劉偉俊，江孝亮，梁永超，何炳梁，陳斌，，葉娟2，3，陳玲玲，葛艷，葛達(dá)娥，黃曉德

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京 211111；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210000；3.江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210000；4.南京野生植物綜合利用研究所，江蘇 南京 210042；5.杭州云中羽網(wǎng)絡(luò)科技有限公司，浙江 杭州 310051；6.廣州市名俐日用化工有限公司，廣東 廣州 510000；7.南京潤(rùn)中生物科技有限公司，江蘇 南京 211111；8.北京易才宏業(yè)管理顧問(wèn)有限公司，北京 100022）

艾葉（Artemisia argyiLévl.et Vant.）又稱艾蒿、 香艾，是我國(guó)傳統(tǒng)中草藥。艾葉在我國(guó)的應(yīng)用歷史悠久，早在《詩(shī)經(jīng)》就有“彼采艾兮，一日不見，如三歲兮”的采艾場(chǎng)景描寫，可見早在3000年前，艾已被用來(lái)食用、治病或者祭祀使用；我國(guó)第一部中醫(yī)理論論著《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載了將艾葉作為灸療的主要材料；明代藥學(xué)著作《本草綱目》中記載稱：艾以葉入藥，性溫、純陽(yáng)之性、通十二經(jīng)、具回陽(yáng)、理氣血、逐濕寒、止血安胎等功效。故又被稱為“草醫(yī)”?，F(xiàn)代研究也證明，艾葉具有抑菌、驅(qū)螨、抗病毒等的多種功能活性［2-4］。

艾葉中含有揮發(fā)油、黃酮、多糖等化學(xué)成分。其中，揮發(fā)油是主要的功效成分，分析表明，艾葉揮發(fā)油的主要組分為桉樹醇、α-石竹烯、萜品烯、松油烯和樟腦等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明艾葉揮發(fā)油具有抗菌、抗病毒、平喘、鎮(zhèn)咳、祛痰、止血、抗凝血、鎮(zhèn)靜、抗過(guò)敏和護(hù)肝利膽等作用［5-8］。為探討存放時(shí)間對(duì)艾葉揮發(fā)油化學(xué)成分的影響，本文對(duì)新鮮艾葉和陳化艾葉揮發(fā)油成分的種類及含量變化進(jìn)行了分析比較，以期為艾葉資源的綜合利用提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

氣質(zhì)聯(lián)用儀（7890B-7000C，美國(guó)Agilent公司）；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-C型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇科析儀器有限公司）；BS224S分析天平（北京賽多利斯儀器設(shè)備有限公司）。

新鮮艾葉和陳艾葉均由南京野生植物綜合利用研究所提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備

稱取新鮮艾葉100 g，剪碎，置于1000 mL圓底燒瓶中，加入700 mL蒸餾水，冷浸2 h后按水蒸汽蒸餾法加熱提取?；亓? h后，分離揮發(fā)油，加入少量無(wú)水硫酸鈉干燥，即得到揮發(fā)油產(chǎn)品。陳化艾葉提取方法與上述方法相同。

1.2.2 供試品溶液的制備

分別取新鮮艾葉與陳化艾葉揮發(fā)油各100 μL，取900 μl正己烷與艾葉揮發(fā)油混勻，即得供試品溶液，按3.3的條件進(jìn)行分析。

1.2.3 GC-MS條件

HP-5M S毛 細(xì) 管 色 譜 柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫：柱初始溫度為50℃，以3℃·min-1的速率升至75℃，保持15 min；以10℃·min-1的速率升至175℃，保持3 min；以20℃·min-1的速率升至290℃，保持3 min，300℃后運(yùn)行3 min；進(jìn)樣口溫度：240℃；載氣：He；載氣流速：1 mL·min-1；分流比：20：1；進(jìn)樣量：1 μL；溶劑延遲6.5 min。EI離子源；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電子能量：70 eV；接口溫度：250℃；質(zhì)量范圍：60～600 m/z。

2 結(jié)果與分析

2.1 新鮮艾葉與陳化艾葉揮發(fā)油成分色譜圖分析

通過(guò)對(duì)陳化艾葉和新鮮艾葉的揮發(fā)油成分進(jìn)行GC-MS檢測(cè)得到的色譜圖可以看出兩者的色譜圖在6～8 min、12 min、17 min、20 min、23～24 min、31 min得到的色譜峰相似，說(shuō)明兩種揮發(fā)油的化學(xué)成分也極為相似。

2.2 新鮮艾葉與陳化艾葉揮發(fā)油主要成分分析

由圖1-2分析可知，新鮮及陳化艾葉通過(guò)GCMS分別分離檢測(cè)得到134個(gè)峰和124個(gè)峰。通過(guò)NIST11數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，結(jié)合人工分析，從新鮮艾葉揮發(fā)油中鑒定出117種化合物，其主要成分有桉樹醇（27.93%）、丁二酸單乙酯（9.47%）、龍腦（7.66%）、樟腦（6.82%）、4-萜烯醇（3.86%）、石竹烯（2.72%）、α-松油醇（2.07%）等。從陳化艾葉揮發(fā)油鑒定出124種化合物，其主要成分有桉樹醇（23.70%）、Bicyclo［3.1.0］hexan-3-one，4-methyl-1-（1-methylethyl）-（9.41%）、龍腦（8.31%）、右旋樟腦（8.11%）、1，3-Cyclopentadiene，1，2，5，5-tetramethyl-（4.95%）、4-萜烯醇（4.19%）、石竹烯（2.90%）、α-松油醇（2.51%）等。

圖1 新鮮艾葉揮發(fā)油成分總流離子圖Fig.1 Total ion flow chart of essential oils of fresh A.argyi leaves

桉樹醇又稱桉樹腦，廣泛用于治療感冒、呼吸道感染、胰腺炎和結(jié)腸炎等疾病，也可緩解疼痛［9-10］。α-蒎烯具有鎮(zhèn)咳和祛痰的功能。同時(shí)，α-蒎烯還具有抗真菌（如白念珠菌）、驅(qū)蟲、殺蟲和除螨等作用［11］。龍腦又稱天然冰片、龍腦香，具有很強(qiáng)的滲透能力，能改善角膜上皮細(xì)胞層的細(xì)胞膜磷脂分子排列，疏松細(xì)胞連接；修復(fù)及保護(hù)DNA和細(xì)胞的損傷。同時(shí)，龍腦所具有的逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性、影響神經(jīng)遞質(zhì)含量、治療結(jié)腸炎、骨質(zhì)疏松和抗血栓等功效，隨著具體作用機(jī)制進(jìn)一步探明和臨床實(shí)驗(yàn)的開展，將為開發(fā)治療抗腫瘤、抗血栓、治療骨質(zhì)疏松和大面積皮膚創(chuàng)傷等重大疾病的特效藥開辟新途徑，解決臨床治療難題［12］。4-萜烯醇具有較強(qiáng)的抑菌作用和抗氧化活性［13］。石竹烯具有很強(qiáng)的1型單純性皰疹病毒（HSV-1）抑制作用和殺蟲作用［14］。α-松油醇屬于萜類化合物，具有抗菌、抗痙攣和抗炎等作用。研究證明α-松油醇抑菌譜廣，對(duì)革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌均有較強(qiáng)的抑菌效果，具有較好的藥物開發(fā)價(jià)值［15］。具體成分如表1所示。

表1 艾葉揮發(fā)性成分結(jié)果分析Tab.1 Analysis of Volatile Components of Artemisia argyi leaves

圖2 陳化艾葉與新鮮艾葉揮發(fā)油成分總流離子圖Fig.2 Total ion flow chart of essential oils of aged Artemisia argyi leaves

通過(guò)分析比較陳化艾葉和新鮮艾葉揮發(fā)油的主要化學(xué)成分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種揮發(fā)油的成分差異比較明顯，其中的相同成分有桉樹醇、龍腦、4-萜烯醇、石竹烯、α-松油醇、2-甲基-5-（1-甲基乙烯基）-2-環(huán)己烯-1-醇等，含量也極為相近。但陳化艾葉中肉桂醛、對(duì)傘花烴、蒎烯、莰烯等特有成分在新鮮艾葉中未檢測(cè)到。

3 討論

艾草具有“草中鉆石”的稱號(hào)，廣泛分布于我國(guó)各地，在民間有悠久的應(yīng)用傳統(tǒng)和歷史。艾草全草都能入藥，具有去濕、溫經(jīng)、散寒、止血、消炎、止咳和平喘等功效。傳統(tǒng)的艾草熏蒸方式和艾葉水煎液，對(duì)多種病毒、細(xì)菌和真菌都具有良好的殺滅或抑制作用，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明：艾草提取物中起到抑菌作用的主要成分是揮發(fā)油，艾草揮發(fā)油對(duì)大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌、四聯(lián)球菌均具有良好的抑菌作用。

本研究采用GC-MS對(duì)新鮮艾葉和陳化艾葉揮發(fā)油中的化學(xué)成分進(jìn)行了定性和相對(duì)含量分析，比較了新鮮艾葉與陳化艾葉揮發(fā)油中化學(xué)成分的差異。結(jié)果表明，陳化艾葉和新鮮艾葉揮發(fā)油中共有的化學(xué)成分主要有萜類、醇類、萜烯類等，鮮艾葉在陳化過(guò)程中揮發(fā)油成分的種類及其含量會(huì)發(fā)生一定的變化，相較于鮮艾葉，陳化艾葉的揮發(fā)性成分中多了肉桂醛和對(duì)傘花烴等物質(zhì)，說(shuō)明艾葉陳化過(guò)程中其化學(xué)成分發(fā)生了轉(zhuǎn)化，同時(shí)肉桂醛、對(duì)傘花烴等高效抑菌和殺菌成分的增加也為未來(lái)陳化艾葉揮發(fā)油在殺菌、抑菌類天然日化產(chǎn)品中的應(yīng)用提供了支撐。