一起羊副結(jié)核病的診斷報告

張 帆，楊 斌，達來寶力格，陳 偉，張月梅，宋 越，劉 昆，戴玲俐，宋愛軍，盧 巖，趙世華

（內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031）

羊副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性傳染病。發(fā)病羊的主要特征為間歇性腹瀉和漸進性消瘦。病原菌主要存在于病羊的腸黏膜和腸系膜淋巴結(jié)內(nèi)，可以隨著糞便排出體外，污染土壤、飲水等周圍環(huán)境。該菌在自然環(huán)境中可存活數(shù)月乃至數(shù)年。健康羊常通過消化道感染。該病潛伏期長，且沒有明顯臨床癥狀的受感染動物也可向環(huán)境中排出病原菌，成為潛在感染源，該病呈散在發(fā)生或地方性流行。

副結(jié)核分枝桿菌為革蘭染色陽性、抗酸染色陽性、無運動能力的小桿菌，長0.5～1.5 μm，寬0.3～0.5 μm。該菌在人工分離培養(yǎng)基上可長出白色、堅硬、粗糙、針尖大小的菌落，但一般需要1～2個月的時間。少數(shù)菌株可產(chǎn)生黃色素，且對分枝桿菌素具有依賴性。最適生長溫度為38～40℃，對熱敏感，63℃30 min、70℃20 min或 80℃5 min即可被殺滅。耐酸堿，5%草酸、5%硫酸、15%次氯酸鈉、4%氫氧化鈉溶液中30 min仍能存活。而5%甲酚皂溶液、5%甲醛、苯酚（1∶40）10 min 內(nèi)可將其殺死。該菌為胞內(nèi)寄生菌，侵入機體后，首先在體內(nèi)產(chǎn)生細胞免疫，進而產(chǎn)生體液免疫。隨著病情的發(fā)展，細胞免疫功能下降，體液免疫逐漸增加。

通常反芻動物對該菌易感，很多野生動物也可被感染。Miller等在南非1只臘腸犬體內(nèi)分離到了副結(jié)核分枝桿菌［1］，1938年，首例綿羊的副結(jié)核臨床病例被國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)。通?？梢姷陌Y狀包括：漸進性消瘦、間歇性腹瀉、體重下降、黏膜蒼白以及骨骼肌萎縮等多種癥狀，研究人員還發(fā)現(xiàn)羊毛的變化，即羊毛疏少、沒有光澤、易脫落。隨著感染時間的延長，發(fā)病12個月內(nèi)羊群的死亡率可達10%左右。一般情況下，2～4歲的母羊在產(chǎn)羔和斷奶時面臨2個最易感染期。

目前，副結(jié)核病的診斷方法有臨床診斷、剖檢診斷、病原體分離、免疫學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷等。由于臨床上無特征性癥狀，所以只憑臨床癥狀不易確診，剖檢診斷只能用于死后，病原體的分離被認為是一種價格低廉、操作簡單且較為準確的診斷方法，但由于副結(jié)核分枝桿菌在人工培養(yǎng)基上生長緩慢，需要3～6個月的時間才可排除陰性結(jié)果，費時曠久，因此不易為實踐中所接受。免疫學(xué)診斷方法包括變態(tài)反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)（CFT），瓊脂擴散試驗（AGID）、間接紅細胞凝集反應(yīng)、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等方法。變態(tài)反應(yīng)易于執(zhí)行且能夠在感染早期進行診斷，然而，假陽性率偏高。補體結(jié)合試驗和瓊脂擴散試驗都存在對隱性感染病例檢出率較低的情況。分子診斷方法有PCR以及熒光PCR等技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗是OIE推薦的檢測方法，適合規(guī)模化檢疫。PCR方法具有敏感性高、快速的優(yōu)點，但檢測成本易增加養(yǎng)殖戶經(jīng)濟負擔。綿羊副結(jié)核病的多種診斷方法各有其優(yōu)缺點，使用多種方法進行綜合診斷，可得到較準確可靠的診斷結(jié)果。

該病由于患病羊長期向牧場及周圍環(huán)境排菌，導(dǎo)致該病發(fā)生地區(qū)凈化難，對羊場尤其是種羊場危害巨大，影響羊的經(jīng)濟價值，造成羊場經(jīng)濟損失。目前已經(jīng)有伊朗、澳大利亞、南非等世界多個國家對羊副結(jié)核病有相關(guān)報道，我國遼寧、新疆、內(nèi)蒙古等地也有多處報道。該病作為一種重要的傳染性疾病，已對多個國家的畜牧業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失，已日益引起人們的關(guān)注，因此，研究和開發(fā)新的診斷和防治方法已迫在眉睫。2017年10月中旬，筆者接診某羊場送檢病死羊數(shù)只，經(jīng)確診為羊副結(jié)核病。

1 流行病學(xué)調(diào)查

該場共飼養(yǎng)種羊187只，為粗放型飼養(yǎng)管理方式，半舍飼養(yǎng)殖，羊只均為2～3歲的青壯年羊。病羊呈間歇性腹瀉及漸進性消瘦，飲食不振，慢慢臥倒不起，甚至死亡，病程15～30 d，近1年內(nèi)共死亡20多只，羊群在周邊的山地放牧，飲水主要以井水為主，與同地區(qū)附近其他養(yǎng)殖戶的羊群有直接或間接接觸。肉眼沒有發(fā)現(xiàn)明顯的體外寄生蟲感染。在季節(jié)變化及天氣突變時羊只易發(fā)病。2017年8月中旬發(fā)現(xiàn)有5只羊出現(xiàn)腹瀉癥狀，之后呈漸進性消瘦，用藥物治療3 d后，患羊腹瀉減輕，2周后其中2只病羊死亡。1個月后，又陸續(xù)有其他羊只出現(xiàn)腹瀉癥狀，用藥后未見明顯好轉(zhuǎn)，最終病羊因機體衰竭而死亡，其余羊未觀察到特征性癥狀。

2 臨床癥狀

病羊腹瀉呈間歇性、頑固性。體溫在發(fā)病初期可升高至41℃左右，后期呈一般趨于正常。腹瀉初期糞便呈糊狀，后期水樣稀便，稀便黃色或黑褐色，伴有惡臭。發(fā)病期間病羊腹瀉反復(fù)發(fā)生，食欲減退，體重減少。發(fā)病后期病羊可視黏膜蒼白，頜下、腹部、皮下水腫，消瘦衰弱，常伴有氣喘、咳嗽，被毛粗亂無光澤且易脫落，逐漸臥地不起，最終因機體高度衰竭而死亡。

3 剖檢變化

主要病理變化集中在回腸、盲腸、結(jié)腸。腸黏膜增厚，形成大腦溝回狀皺褶，呈典型的特征性病理變化。腸系膜淋巴結(jié)腫大、堅硬。心肌變軟、心內(nèi)膜有條形出血斑。肺臟局部氣腫，有出血點。

4 實驗室檢驗

分別無菌采集發(fā)病羊頸靜脈血、心血、肝、脾、肺、腸黏膜、腸系膜淋巴結(jié)和腸內(nèi)容物等待檢樣品進行實驗室檢驗。

4.1 血清學(xué)診斷

采用市售愛德士副結(jié)核抗體檢測試劑盒對病羊血清樣品進行特異性抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗，具體操作按照試劑盒說明書進行，診斷結(jié)果全部為陽性［2-3］。

4.2 細菌學(xué)診斷

對采集的病例分別做革蘭染色和抗酸染色，其中，腸系膜淋巴結(jié)、腸黏膜及腸內(nèi)容物涂片可見到革蘭陽性成叢排列的紅色短桿菌，無鞭毛、無莢膜、無芽胞，而在其他病料中未檢出該類菌體［4-5］。

5 鑒別診斷

該病應(yīng)重點與營養(yǎng)不良、沙門菌病以及胃腸道寄生蟲病所引起的病癥進行鑒別診斷。

5.1 營養(yǎng)不良

病羊雖然也會出現(xiàn)消瘦、腹瀉等癥狀、但不會出現(xiàn)腸黏膜增厚并形成褶皺的特征性病理變化。

5.2 沙門菌病

沙門菌病可引起病羊腹瀉、排黃綠色粥樣稀便、精神沉郁、食欲減退或拒食、體溫升高等癥狀。經(jīng)實驗室細菌學(xué)診斷，未分離到沙門菌，可排除該菌感染。

5.3 胃腸道寄生蟲病

寄生蟲病在糞檢中可發(fā)現(xiàn)蟲卵，剖檢胃腸道可見寄生蟲。對送檢病例剖檢肝臟，未見肝片吸蟲，糞便檢查無蟲卵，剖檢無蟲體。

根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢一般可做出初步診斷，結(jié)合實驗室檢驗和鑒別診斷，確診該病為副結(jié)核病。

6 防控措施

參照國家農(nóng)業(yè)行業(yè)標準，進行副結(jié)核分枝桿菌提純蛋白衍生物皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗，淘汰陽性羊，每60 d復(fù)檢1次。半年后復(fù)檢，無陽性羊。

將羊群暫時遷移至備用羊場，用5%來蘇兒對污染羊場的羊舍、飼槽等用具以及土壤環(huán)境進行徹底消毒。一年后再遷入健康羊群中。

加強飼養(yǎng)管理，定期進行畜舍消毒，及時應(yīng)對天氣變化，保證羊群微量元素攝入，對羊群健康狀態(tài)保持觀察。

7 小結(jié)

羊副結(jié)核病是慢性、散發(fā)性傳染病，無治療價值，應(yīng)以預(yù)防為主［6-7］。 檢疫、隔離、消毒、凈化等綜合生物安全措施是該病目前主要的防疫手段。具體措施包括：加強飼養(yǎng)管理，堅持自繁自養(yǎng)，定期對圈舍及飼養(yǎng)環(huán)境進行消毒，無害化處理病死羊。保證羊攝入適量的維生素、微量元素，增強羊只免疫力，天氣變化時及時采取應(yīng)對措施。定期對疫區(qū)羊只進行變態(tài)反應(yīng)檢測，對變態(tài)反應(yīng)呈陽性的病羊及時淘汰，如果是感染嚴重、經(jīng)濟價值低的生產(chǎn)羊群應(yīng)整群淘汰［8］。已經(jīng)確診副結(jié)核分枝桿菌感染的羊群，應(yīng)對牧場進行徹底消毒，并空置1年后再引入健康羊。該病可長期在某一地區(qū)流行，各病例發(fā)病間歇期不定，呈散發(fā)型，但常具有地方性流行特點，被病畜污染的草場成為本地區(qū)內(nèi)其他羊只感染的途徑之一，因此需盡量避免共用草場。

澳大利亞研究者通過對12個副結(jié)核感染的農(nóng)場超過10年的研究發(fā)現(xiàn)，隨著時間的推移，接種疫苗顯著地降低了糞便中副結(jié)核分枝桿菌的檢出率。該項研究據(jù)稱是目前時間最長、最全面的關(guān)于副結(jié)核疫苗有效性的研究，同時提供了疫苗接種對副結(jié)核病發(fā)病率影響的重要信息［9］。目前未見國內(nèi)關(guān)于有效的疫苗和治療方法的相關(guān)報道。目前有市售的ELISA檢測試劑盒可實現(xiàn)對該病的快速診斷，但對于預(yù)防和消除羊副結(jié)核病保護畜牧業(yè)健康發(fā)展，還需在疫苗研制等方面做出更多努力。

［1］MILLER M A，DAVEY S C，VAN HELDEN L S，et al.Paratuberculosis in a domestic dog in South Africa［J］.J S AFR VET ASSOC，2017，88（1）：e1-e5.

［2］李向宇.內(nèi)蒙古羊副結(jié)核病檢測方法的比較研究［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2014，35（1）：24-26.

［3］汪天杰，劉永松，韋兵.澳大利亞進境種羊副結(jié)核感染情況調(diào)查［J］.中國動物檢疫，2015（2）：32-33.

［4］任志文，王百菊.一起羊副結(jié)核病的診斷與治療［J］.中國畜禽種業(yè)，2010，6（4）：109.

［5］吳建勇，吳星星，楊學(xué)云，等.綿羊副結(jié)核病的病原學(xué)檢測與分析 ［J］. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，53 （8）：1562-1568.

［6］崔書民，陳培娟，高潔.牛羊副結(jié)核病的防控［J］.當代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2016（6）：26.

［7］張忠健.牛羊副結(jié)核病的流行、診斷及防制［J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2015（18）：78.

［8］馬呼和，東風，楊萬科.羊傳染性腹瀉病的調(diào)查及防治試驗［J］.畜禽業(yè)，2015（2）：72-74.

［9］DHAND N K， EPPLESTON J， WHITTINGTON R J， et al.Changes in prevalence of ovine paratuberculosis following vaccination with Gudair?:Results of a longitudinal study conducted over a decade ［J］.Vaccine， 2016， 34（42）：5107-5113.