• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    特殊食品中3種B族維生素檢測方法的研究進展

    2022-12-07 09:55:09于瑞莉馮永巍黃麗俊
    食品與藥品 2022年1期
    關(guān)鍵詞:生物素葉酸檢出限

    于瑞莉,馮永巍,黃麗俊,楊 婷

    (無錫市食品安全檢驗檢測中心,國家市場技術(shù)創(chuàng)新中心(特殊食品),江蘇 無錫 214000)

    特殊食品是指為滿足某些特殊人群的生理需要,或某些疾病患者的營養(yǎng)需要,按特殊配方而專門加工的食品,包括保健食品、嬰幼兒配方食品、特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品(簡稱特醫(yī)食品)和特殊膳食等。在食品原料中,葉酸、生物素和維生素B12(VB12)是常添加的3種水溶性B族維生素,是人體維持正常生理機能的一類重要且典型的微量營養(yǎng)素,在體內(nèi)不能自身合成,必須通過食物或外界環(huán)境獲取和補充[1]。由于特殊食品針對的人群特殊,其添加量要求嚴格,因此對于這3種水溶性B族維生素的含量測定有非常重要的作用。但由于基質(zhì)成分復(fù)雜,B族維生素添加量較低,且易受光熱分解[2],使檢測難度大大增加。本文對葉酸、生物素和維生素B12常用的分光光度計法,熒光法、高效液相色譜、液相-質(zhì)譜聯(lián)用法、微生物法和免疫法進行詳細分析討論,旨在為檢測工作者尋找一種簡便、精準、快速的檢測方法提供指導(dǎo)。

    1 性質(zhì)

    葉酸(floic acid,維生素B9),包括天然的葉酸和用于強化食品和膳食補充劑的合成葉酸,其化學(xué)名稱是蝶酰谷氨酸,由蝶呤、對氨基苯甲酸和L-谷氨酸組成,對光敏感。葉酸缺乏會使單碳代謝嚴重異常,可導(dǎo)致慢性疾病和發(fā)育障礙,包括神經(jīng)管缺陷[3]、巨紅細胞型貧血、癌癥及神經(jīng)障礙等多種疾病。但是過量攝入合成葉酸又會引起并發(fā)癥[4-5],如干擾人體對鋅的吸收,增加下一代患自閉癥的風(fēng)險等。一般正常人葉酸的需求量為200~400 μg/d,世界衛(wèi)生組織建議成人至少為200 μg/d,孕婦和母乳為400 μg/d,不同年齡、不同階段的人需求量不同[6]。

    生物素(biotin,維生素B7),是合成維生素C的必要物質(zhì)。含3個不對稱碳原子的雙環(huán)化合物[7]共有8種同分異構(gòu)體,穩(wěn)定性較好。作為羧化酶、羧基轉(zhuǎn)移酶、脫羧酶的輔酶參與人體的糖異生、脂肪酸和氨基酸代謝、能量傳遞過程。其長期攝入不足會影響蛋白質(zhì)及RNA合成,降低身體免疫力[8]。

    維生素B12(cobalamin,鈷胺素),是一類含有鈷離子的咕啉類化合物總稱[9],是唯一含有金屬離子的水溶性維生素,在空氣中不穩(wěn)定,對光敏感。以輔酶形式參與各種代謝過程,在造血和健全神經(jīng)系統(tǒng)功能方面有重要作用。缺乏維生素B12不僅導(dǎo)致巨幼紅細胞貧血,還會引起心臟病,神經(jīng)紊亂,老年癡呆和帕金森綜合征等神經(jīng)系統(tǒng)疾病[10-11]。

    國家食品安全監(jiān)督抽檢對特殊食品中3種B族維生素的含量要求非常嚴格(見表1)[12]。由表可見,特殊膳食食品中尤其是孕、乳母營養(yǎng)補充食品、嬰兒配方食品對維生素添加量有嚴格的要求,特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方奶粉和嬰幼兒配方奶粉對3種B族維生素含量區(qū)間要求更窄,含量更低,需要檢測方法具備更高的靈敏度和更低的檢出限。

    2 檢測方法

    2.1 比色法

    維生素檢測開展初期,比色法有較廣的普適性。葉酸檢測分為直接比色和衍生物比色法兩種。直接比色法是在堿性溶液中將葉酸溶解,測定葉酸的特征峰吸收值,從而確定樣品中葉酸含量。衍生法則需對樣品進行前處理,使用衍生化試劑與葉酸反應(yīng),合成其他穩(wěn)定且具有特征吸收峰的物質(zhì)后再進行紫外測定。常用的衍生試劑有茚三酮、高錳酸鉀、N-(1-N)-二乙二胺等[19]。生物素測定則用無水乙醇提取,在硫酸乙醇溶液中生成橙紅色化合物,在一定范圍內(nèi)顏色深淺與生物素含量成正比,根據(jù)吸光度即可判斷生物素的含量[20]。維生素B12在 278,361和550 nm波長處有最大吸收,可使用紫外-可見光分光光度計法進行含量測定[21]。該方法雖然操作簡單,但易被樣品中其他物質(zhì)干擾,受儀器分辨率和樣品本底的影響較大,影響測定結(jié)果的準確度和精確性,因此不太適宜特殊食品中葉酸、生物素和維生素B12的檢測。

    2.2 熒光法

    對于自身含有熒光特性或是與標記物結(jié)合發(fā)光的 B 族維生素,可使用熒光法測定。生物素和維生素B12不具有熒光特性,關(guān)于此方法的研究鮮有報道。只有葉酸結(jié)構(gòu)中的吡嗪嘧啶環(huán)含有特殊的吸收光譜,紫外光可將其轉(zhuǎn)化為熒光產(chǎn)物,采用熒光法和其他檢測手段相結(jié)合的方式進行測定。陳瓊等[22]采用固相萃取-HPLC柱后氧化衍生熒光法測定運動營養(yǎng)食品中葉酸的含量,趙海燕等[23]采用HPLC-柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測方法,用于強化食品中葉酸測定。具有靈敏度高,重現(xiàn)性強的優(yōu)點,但它的缺點在于前處理復(fù)雜,不具備高效快速的特點,且檢出限較低,適用于特殊膳食但不適用于特醫(yī)食品和嬰幼兒配方食品中葉酸的檢測。

    2.3 高效液相色譜法

    高效液相色譜法(HPLC)已普遍用于特殊膳食中維生素測定。耿瑛等[24]采用鈦膠反相色譜柱,建立了同時測定功能飲料中的生物素、葉酸、維生素B12等5種維生素的HPLC法。孫璐璐等[25]通過固相萃取-HPLC實現(xiàn)了對營養(yǎng)強化餅干中維生素B12含量的快速精確測定,檢出限0.1 mg/kg。

    HPLC一般適用于添加形式明確,且含量較高的特殊膳食中維生素的檢測。但李貽[26]用HPLC和HPLC-MS分析嬰幼兒配方乳粉中B12含量,得出結(jié)論:HPLC因檢測重復(fù)性好,結(jié)果準確,適用于維生素B12含量高的樣品,但是靈敏度不高,儀器檢出限較高,對于含量低的樣品不宜準確檢出。所以由于方法的局限性,特醫(yī)食品中葉酸、維生素B12的檢測較少采用HPLC。

    2.4 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

    液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)相對于HPLC,有更強大的組分分離與鑒定能力,也有較低的檢出限;不僅可準確測定維生素含量較高的特殊膳食,也可測定特醫(yī)食品和嬰幼兒配方食品中維生素含量。張辰辰等[27]利用超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)測定特醫(yī)食品中生物素、葉酸、維生素B12等8種維生素,定量限為4~10 μg/100 g,加標回收率達85.52 %~116 %,RSD為0.49 %~4.10 %。陳美君等[28]建立了一種能同時測定嬰幼兒配方奶粉中 11 種 B 族維生素的超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,采用電噴霧離子源正離子模式,方法線性范圍良好,樣品前處理方法簡單,靈敏度高。盧蘭香等[29]采用免疫親和柱進行凈化,建立了LC-MS測定特醫(yī)食品中生物素的方法。

    但是LC-MS/MS的測定與其標準溶液相關(guān)性較強,而這3種維生素在特殊食品中的存在形式較復(fù)雜。葉酸衍生物種類多,LC-MS/MS測定的只是不同衍生物的含量,盡管Ndawa等[30]將衍生物轉(zhuǎn)化為5-甲基四氫葉酸或多種純化方式分別測得多種衍生物含量,但是葉酸及其衍生物不穩(wěn)定,且易在提取和測定過程中發(fā)生氧化降解或衍生物間相互轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致難以準確測定葉酸總量。而維生素B12的主要存在形式包括羥基鈷胺素、氰基鈷胺素、脫氧腺苷鈷胺素和甲基鈷胺素[31],不同于允許添加到食品中的維生素B12的種類(氰鈷胺、羥鈷胺和鹽酸氰鈷胺)[32],且維生素B12幾乎都是借助于微生物發(fā)酵獲得,其基質(zhì)復(fù)雜,儀器法難以滿足準確測定要求。生物素有8種同分異構(gòu)體,陳杰峰等[33]通過同位素內(nèi)標和LC-MS/MS測定的嬰幼兒配方奶粉中B6和生物素含量,其中生物素質(zhì)控樣品測定值(每100 g 含0.1906 mg)低于質(zhì)控樣品特性值區(qū)間(每100 g 含1.346±0.093 mg),且6個實際樣品的檢測結(jié)果普遍低于國標法,最高偏差達3.9 %,可見LC-MS/MS并不能準確測定嬰幼兒配方食品中生物素的含量。LC-MS/MS作為更先進的手段,盡管具有較低的檢出限,更高靈敏度,更簡單的操作,但是在特醫(yī)食品和嬰幼兒配方食品葉酸、生物素和維生素B12檢測的準確性和全面性方面還存在缺陷。

    2.5 微生物法

    目前,傳統(tǒng)微生物法是我國現(xiàn)行檢測標準,同時也是美國官方分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC)和美國藥典(USP)的推薦方法。我國現(xiàn)行檢測方法為:《GB5009.211-2014 食品安全標準 食品中葉酸的測定》[34]、《GB5009.259-2016食品安全標準 食品中生物素的測定》[35]和《GB5413.14-2010食品安全標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測定》[36]。

    葉酸主要是以葉酸衍生物的形式存在[37],最主要的天然葉酸形式包括[38]:5-甲酰四氫葉酸、5-甲基四氫葉酸、四氫葉酸和葉酸;不同葉酸衍生物又包含單谷氨酸形式和多聚谷氨酸形式的葉酸,具有生物活性的多達100余種[39-40]。生物素共有8種同分異構(gòu)體,但只有全順式結(jié)構(gòu)的D-生物素具有生理活性[41],D-生物素的存在形式又分為游離狀態(tài)與結(jié)合狀態(tài)。維生素B12的存在形式也不單一。微生物法利用相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌種對特定維生素有很強的特異性,在一定條件下,其生長和繁殖速度與溶液中維生素的含量成一定對應(yīng)關(guān)系;可測定具有生物活性的維生素,測定結(jié)果更準確,范圍廣,靈敏度高,能滿足含量低和基質(zhì)復(fù)雜的特殊食品檢測。

    但是國標中傳統(tǒng)微生物法的諸多缺點也限制了該法的實際應(yīng)用范圍。如葉酸、維生素B12對光敏感,分析過程均需避光操作,對環(huán)境要求高;實驗關(guān)鍵點多,且要求平行管之間結(jié)果偏差不得超過10 %;由于產(chǎn)品實際含量一般高于標示值,精準把握樣品稀釋倍數(shù),使其落入合適的線性區(qū)間的難度加大,導(dǎo)致對檢驗員的操作水平和檢測經(jīng)驗要求提高;為了保證測定用菌種的活力需傳代2~3代,萊士曼氏乳酸桿菌活力較差,菌種活化時間需2~4 d,維生素的檢測周期一般需要4~6 d;另外如果保存不當或傳代過多,菌種易變異失去對維生素的特異性,嚴重影響檢測結(jié)果。葉酸測定中所使用的鼠李糖乳桿菌只可測定出單尾形式的葉酸或含2~3個谷氨酸尾的葉酸,對長鏈的谷氨酸葉酸衍生物的響應(yīng)較弱[42]。生物素的8種異構(gòu)體中只有1種具有較高的生物活性,采用微生物法不能分離并測定出該種異構(gòu)體的含量。另外,陳緒華等[43]研究發(fā)現(xiàn),國產(chǎn)培養(yǎng)所含本底較高,標準曲線線性較差。

    此外,微生物法實驗過程中需大量的玻璃器皿,所有玻璃器皿及用具均需嚴格清洗、酸泡和干熱滅菌,工作量較大。近年,研究人員也對國標微生物法進行了改進。主要優(yōu)化方向是縮小反應(yīng)體系,如微孔板式定量檢測試劑盒。涂曉波等[44]對奶粉中生物素、葉酸及維生素B12,利用自主研發(fā)與進口維生素檢測試劑盒進行了對比分析,發(fā)現(xiàn)自主研發(fā)試劑盒操作較簡便。楊小平等[45]采用EP管代替試管,通過等比例縮小反應(yīng)測定嬰幼兒配方奶粉中葉酸含量,加標回收率為98 %-107.5 %。余文等[46]采用96孔板代替?zhèn)鹘y(tǒng)培養(yǎng),酶標儀代替分光光度計,實現(xiàn)了快速檢測。但是也存在檢測結(jié)果偏低的情況,另外試劑盒比較昂貴,檢測成本高,普及率較低。諸多問題使微生物法將逐漸被其他簡便、快速、準確的方法替代。

    2.6 免疫法

    免疫學(xué)分析技術(shù)是基于免疫學(xué)原理設(shè)計的對目標樣本進行定性或定量檢測的實驗手段。通過免疫分析技術(shù),可實現(xiàn)對抗原、抗體等免疫相關(guān)物質(zhì)的測定。其中,酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展的一種新型的免疫測定技術(shù),是目前最具有發(fā)展前景的技術(shù)之一,在特殊食品領(lǐng)域已逐步開始應(yīng)用。李江等[47]采用間接競爭ELISA方法,得出嬰幼兒配方奶粉中維生素B12含量,快速靈敏、準確、操作簡便、無需貴重儀器設(shè)備,檢出限3 μg/kg。葉酸測定中,由于單谷氨酸葉酸、多谷氨酸葉酸、葉酸衍生物與葉酸結(jié)合蛋白的親和性不相同,會影響測定的靈敏度,楊霈瑤[19]提出了通過制備葉酸-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的抗體,并在此基礎(chǔ)上利用酶免疫試驗的基本原理,建立一種簡單快速的檢測方法。樂振竅等[48]采用ELISA測定功能食品中維生素B12的含量,結(jié)果準確度和精密度與AOAC方法達到同等效果。Kong等[49]開發(fā)了一種間接競爭性酶聯(lián)免疫吸附法檢測不同營養(yǎng)強化中維生素B12的 4 種主要形式(氰鈷胺、羥鈷胺、腺苷鈷胺和甲鈷胺)的方法,其檢測限為0.065 ng/ml,回收率為81 %~122 %。

    此外,熒光免疫層析技術(shù)是免疫法中的基于抗原抗體特異性免疫反應(yīng)的另一種新型膜檢測技術(shù)。主要基于抗原抗體特異性識別原理和層析反應(yīng)模式,能快速、準確地測定特殊食品中維生素含量。劉海英[50]對生物素含量的檢測采用熒光微球免疫層析方法,熒光微球等發(fā)射光譜型標記物因信號強度可隨激發(fā)光增強而增強,可有效降低層析方法的檢測限。以EDC/NHS介導(dǎo)的兩步法偶聯(lián)合成適用于免疫層析檢測的熒光微球探針。熒光微球探針粒度均一、化學(xué)及光學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。以此建立的以生物素為目的物的免疫層析檢測方法,最終檢測限可達3 ng/ml,遠低于其他檢測方法;靈敏度亦高于微生物法及HPLC,且檢測時間較短,檢測成本低廉。

    3 討論

    維生素B12、葉酸和生物素的檢測方法正處于優(yōu)化和創(chuàng)新的發(fā)展期,找到適合特殊食品中不同樣品基質(zhì)的最佳方法是目前研究人員的努力方向。分光光度法雖然操作簡單,但測定結(jié)果的準確度低和精確性差,因此不適于檢測特殊食品中3種維生素。熒光法可靠性存在缺陷,需要和其他檢測手段結(jié)合,由于生物素和維生素B12無紫外和熒光發(fā)色集團,只適用于特殊膳食中葉酸測定,不適于其他特殊食品的測定;HPLC適用于添加形式明確,且含量較高的特殊膳食中3種維生素檢測,但對于某些基質(zhì)成分較復(fù)雜、含量低于儀器檢出限的特醫(yī)食品和嬰幼兒配方食品,檢測還存在缺陷。LC-MS/MS做為更先進的手段,檢出限低,靈敏度高,操作簡單,但準確性和全面性方面還有不足。微生物法雖然是目前針對特殊食品這3種維生素的首選方法,特異性好、靈敏度較高,但由于操作關(guān)鍵點多,微生物生長周期長,工作量大,對環(huán)境、人員、菌種和培養(yǎng)基要求高等問題,應(yīng)用有限;相比之下,作為目前研究熱點的免疫法而言,有檢驗靈敏度高、檢測限低、特異性好、樣本處理量大、檢驗時間短、準確、操作簡便、無需貴重儀器設(shè)備等諸多優(yōu)點,更適用于特殊食品,尤其是特醫(yī)食品和嬰幼兒配方食品的檢測,具有廣泛的開發(fā)空間和應(yīng)用前景。

    猜你喜歡
    生物素葉酸檢出限
    環(huán)境監(jiān)測結(jié)果低于最低檢出限數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理方法
    定量NMR中多種檢出限評估方法的比較
    生物素在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的應(yīng)用
    準備懷孕前3個月還不補葉酸就晚了
    正在備孕的你,葉酸補對了嗎
    準備懷孕前3個月還不補葉酸就晚了
    防治脫發(fā)的生物素
    用獼猴桃補葉酸?未必適合你
    媽媽寶寶(2017年4期)2017-02-25 07:01:16
    新型生物素標記的苦杏仁苷活性探針的合成
    生物素的營養(yǎng)功能及其在奶牛飼養(yǎng)中的應(yīng)用
    亚洲欧美精品专区久久| av在线播放精品| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| a级毛色黄片| 成人欧美大片| 午夜福利高清视频| 国产成人福利小说| 久久久久精品性色| 天堂网av新在线| 少妇高潮的动态图| 亚洲av成人精品一二三区| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产91av在线免费观看| 日本熟妇午夜| 在线观看一区二区三区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 看十八女毛片水多多多| 久久精品国产亚洲av涩爱| 九色成人免费人妻av| 亚州av有码| 五月伊人婷婷丁香| 久久久午夜欧美精品| 在线天堂最新版资源| 亚洲成人av在线免费| 波野结衣二区三区在线| 日韩国内少妇激情av| 91狼人影院| 国产成人午夜福利电影在线观看| 联通29元200g的流量卡| 真实男女啪啪啪动态图| 最近最新中文字幕大全电影3| 午夜久久久久精精品| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品蜜桃在线观看| 看黄色毛片网站| 国产爱豆传媒在线观看| 男女国产视频网站| 国产人妻一区二区三区在| av在线老鸭窝| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲av男天堂| 老司机影院成人| 日本一本二区三区精品| 日韩一本色道免费dvd| 一边亲一边摸免费视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 看黄色毛片网站| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精品日韩av在线免费观看| 久久久久精品性色| 高清视频免费观看一区二区 | 在线免费十八禁| 欧美97在线视频| 日本黄大片高清| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| av女优亚洲男人天堂| 成人欧美大片| 国产精品福利在线免费观看| 一区二区三区四区激情视频| 内地一区二区视频在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 我的女老师完整版在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 国产又色又爽无遮挡免| 精华霜和精华液先用哪个| 一二三四中文在线观看免费高清| 午夜福利成人在线免费观看| av天堂中文字幕网| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜爱爱视频在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲精品成人久久久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久久精品欧美日韩精品| av国产久精品久网站免费入址| 免费黄网站久久成人精品| 不卡视频在线观看欧美| 在线观看一区二区三区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产在视频线在精品| 精品不卡国产一区二区三区| 床上黄色一级片| 国产人妻一区二区三区在| 赤兔流量卡办理| 亚洲欧美精品自产自拍| 麻豆国产97在线/欧美| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 欧美+日韩+精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 晚上一个人看的免费电影| 久久鲁丝午夜福利片| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| av卡一久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美精品一区二区大全| 丰满乱子伦码专区| 成人亚洲精品av一区二区| 一级毛片 在线播放| 在线观看免费高清a一片| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲成色77777| 免费av毛片视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 一级爰片在线观看| 男人舔奶头视频| 国产综合精华液| 欧美日韩亚洲高清精品| 免费大片黄手机在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美极品一区二区三区四区| 特级一级黄色大片| 男人舔奶头视频| 99热网站在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 精品一区二区三区人妻视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产69精品久久久久777片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 日韩中字成人| 亚洲精品国产av成人精品| 中文字幕久久专区| 日本午夜av视频| 国产免费视频播放在线视频 | 久久久精品欧美日韩精品| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美最新免费一区二区三区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 丰满乱子伦码专区| 99久国产av精品| 国产精品1区2区在线观看.| 最近最新中文字幕免费大全7| 老司机影院成人| 久久亚洲国产成人精品v| 日韩中字成人| 午夜爱爱视频在线播放| www.av在线官网国产| 免费av毛片视频| av女优亚洲男人天堂| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 春色校园在线视频观看| 成人一区二区视频在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 一区二区三区免费毛片| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 日韩欧美一区视频在线观看 | 天堂影院成人在线观看| 久久久午夜欧美精品| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 联通29元200g的流量卡| 草草在线视频免费看| 大香蕉97超碰在线| av在线亚洲专区| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 一个人看的www免费观看视频| 国产av不卡久久| 99热这里只有是精品在线观看| 国产毛片a区久久久久| 高清日韩中文字幕在线| 超碰97精品在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产亚洲最大av| 18禁动态无遮挡网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 免费看美女性在线毛片视频| 国产成人a区在线观看| 国产黄色免费在线视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 中文字幕av在线有码专区| 欧美bdsm另类| 国产中年淑女户外野战色| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲18禁久久av| 久久精品国产亚洲网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av一本久久久久| 欧美极品一区二区三区四区| 国产永久视频网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲怡红院男人天堂| 在线免费十八禁| 国内精品一区二区在线观看| 97在线视频观看| 亚洲av不卡在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美一区二区亚洲| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产淫片久久久久久久久| 人妻一区二区av| 在线免费观看的www视频| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲av日韩在线播放| 最近中文字幕高清免费大全6| 老女人水多毛片| 2021天堂中文幕一二区在线观| 能在线免费看毛片的网站| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久久久久伊人网av| 午夜激情福利司机影院| 国产有黄有色有爽视频| 一个人免费在线观看电影| 国产成人a区在线观看| 美女大奶头视频| 久久亚洲国产成人精品v| 日韩中字成人| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 日本免费在线观看一区| 久久97久久精品| 欧美97在线视频| 26uuu在线亚洲综合色| 在线免费十八禁| 久久久久久久久久久免费av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 成人毛片a级毛片在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 一级爰片在线观看| 精品一区二区免费观看| 91精品国产九色| 国产精品一区二区性色av| 69av精品久久久久久| 国产探花在线观看一区二区| 国产精品久久久久久精品电影| 国产乱来视频区| 插逼视频在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久久欧美国产精品| 日日撸夜夜添| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲自拍偷在线| 亚洲四区av| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 成人漫画全彩无遮挡| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲av一区综合| 午夜精品一区二区三区免费看| 26uuu在线亚洲综合色| 少妇人妻精品综合一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 午夜亚洲福利在线播放| 中文字幕av在线有码专区| 最近最新中文字幕免费大全7| 人妻系列 视频| av.在线天堂| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 一级毛片aaaaaa免费看小| 成人国产麻豆网| 亚洲国产色片| 插逼视频在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 特级一级黄色大片| 18禁在线播放成人免费| 中文字幕av在线有码专区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲精品亚洲一区二区| 精品一区二区三区视频在线| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲av免费高清在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 搡老妇女老女人老熟妇| 在线播放无遮挡| 久久人人爽人人爽人人片va| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美日韩精品成人综合77777| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品久久视频播放| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产又色又爽无遮挡免| 激情五月婷婷亚洲| 日韩视频在线欧美| 色吧在线观看| 99热这里只有精品一区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品一区二区性色av| 午夜福利在线观看吧| 国产精品99久久久久久久久| 久久久精品94久久精品| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产 亚洲一区二区三区 | 色视频www国产| 我的老师免费观看完整版| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美激情国产日韩精品一区| 99九九线精品视频在线观看视频| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品一及| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲av中文av极速乱| 日本欧美国产在线视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 性插视频无遮挡在线免费观看| 不卡视频在线观看欧美| 视频中文字幕在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久精品综合一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲人成网站高清观看| xxx大片免费视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 99久久精品热视频| 在线观看av片永久免费下载| av国产久精品久网站免费入址| 大香蕉久久网| 国精品久久久久久国模美| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲内射少妇av| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲在线观看片| 日韩制服骚丝袜av| 丝瓜视频免费看黄片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一级黄片播放器| 男的添女的下面高潮视频| 高清欧美精品videossex| 亚洲成色77777| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品456在线播放app| 久久久午夜欧美精品| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 午夜福利高清视频| 99热6这里只有精品| 日韩欧美 国产精品| 久久国内精品自在自线图片| 免费观看在线日韩| 婷婷色综合www| 熟女电影av网| 一本一本综合久久| 国产午夜福利久久久久久| 丰满少妇做爰视频| 精品不卡国产一区二区三区| 一区二区三区免费毛片| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 综合色av麻豆| 亚洲欧美成人精品一区二区| 综合色丁香网| 黄色一级大片看看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久这里只有精品中国| 国产在线一区二区三区精| 日本wwww免费看| 色尼玛亚洲综合影院| 久久精品国产自在天天线| 国产一级毛片在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 99热这里只有精品一区| 日日撸夜夜添| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲18禁久久av| 欧美一级a爱片免费观看看| xxx大片免费视频| 精品一区二区三卡| 一级a做视频免费观看| 国产探花在线观看一区二区| 男女国产视频网站| 18+在线观看网站| 97在线视频观看| 人人妻人人看人人澡| 成人特级av手机在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久久久久久成人| 免费观看性生交大片5| 九草在线视频观看| 男女视频在线观看网站免费| 人体艺术视频欧美日本| 久久国内精品自在自线图片| 男的添女的下面高潮视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品人妻偷拍中文字幕| a级毛色黄片| 国产一区二区三区av在线| 久热久热在线精品观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频 | 麻豆乱淫一区二区| 久久国产乱子免费精品| 99热这里只有精品一区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一级爰片在线观看| 激情五月婷婷亚洲| 伊人久久精品亚洲午夜| 男女视频在线观看网站免费| 免费观看在线日韩| 久久精品夜色国产| av国产免费在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 热99在线观看视频| 免费黄频网站在线观看国产| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美日本视频| 国产黄片视频在线免费观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 欧美激情久久久久久爽电影| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日本免费在线观看一区| 最近2019中文字幕mv第一页| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 如何舔出高潮| 99久久精品热视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久久精品94久久精品| 国产伦一二天堂av在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久久久精品性色| 亚洲自拍偷在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 99久久精品热视频| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲av二区三区四区| 国产黄频视频在线观看| 国产精品伦人一区二区| 亚洲欧洲国产日韩| 久久久a久久爽久久v久久| 少妇的逼好多水| 国产精品不卡视频一区二区| 国产免费视频播放在线视频 | 国产乱来视频区| 欧美日韩精品成人综合77777| 极品教师在线视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 午夜老司机福利剧场| 日韩强制内射视频| 91久久精品国产一区二区成人| 日日啪夜夜爽| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 成人鲁丝片一二三区免费| 一区二区三区高清视频在线| 男女视频在线观看网站免费| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲内射少妇av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 免费观看在线日韩| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久国产网址| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 男插女下体视频免费在线播放| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 深爱激情五月婷婷| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲av.av天堂| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av在线观看视频网站免费| 免费观看的影片在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 久久久久久国产a免费观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产 一区精品| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲精品视频女| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产不卡一卡二| 丝瓜视频免费看黄片| 我的女老师完整版在线观看| 精品一区二区三卡| 97在线视频观看| 国产在线男女| 亚洲国产欧美人成| 岛国毛片在线播放| 成年人午夜在线观看视频 | av在线播放精品| 精品熟女少妇av免费看| 久久精品国产亚洲网站| 久久久成人免费电影| 精品国内亚洲2022精品成人| 91在线精品国自产拍蜜月| 成年女人看的毛片在线观看| 人妻系列 视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产成人a区在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲在久久综合| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 少妇熟女欧美另类| 国产不卡一卡二| 国产探花在线观看一区二区| av在线播放精品| 精品一区二区三区人妻视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久| 色5月婷婷丁香| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产黄色免费在线视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| or卡值多少钱| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲三级黄色毛片| 久久6这里有精品| 国产一级毛片七仙女欲春2| 超碰97精品在线观看| 日韩欧美三级三区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 一级毛片我不卡| 亚洲av中文av极速乱| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲精品国产成人久久av| .国产精品久久| 能在线免费观看的黄片| 亚洲av成人精品一二三区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费观看无遮挡的男女| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日韩av免费高清视频| 大香蕉久久网| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 99久久精品热视频| 在线播放无遮挡| 一本久久精品| 久久99精品国语久久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 成年女人看的毛片在线观看| 一级av片app| 天堂√8在线中文| 国产成人精品福利久久| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲精华国产精华液的使用体验| 最后的刺客免费高清国语| 2021天堂中文幕一二区在线观| 十八禁国产超污无遮挡网站| 嫩草影院新地址| 欧美精品一区二区大全| 国产久久久一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 大陆偷拍与自拍| 秋霞在线观看毛片| 美女国产视频在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 丰满少妇做爰视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美精品一区二区大全| 干丝袜人妻中文字幕| 搡女人真爽免费视频火全软件| 高清在线视频一区二区三区| 高清日韩中文字幕在线| 国产 一区 欧美 日韩| 国产男人的电影天堂91| 熟女人妻精品中文字幕| 1000部很黄的大片| 免费看av在线观看网站| 美女国产视频在线观看| 日本一本二区三区精品| 国产黄a三级三级三级人| 一个人看视频在线观看www免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产 亚洲一区二区三区 | 尤物成人国产欧美一区二区三区| 精品久久国产蜜桃| 岛国毛片在线播放| 久久久色成人| av播播在线观看一区| 午夜久久久久精精品| 色哟哟·www| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 床上黄色一级片| 色综合色国产| 婷婷色综合www| 亚洲精品自拍成人| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产成人精品婷婷| 国产一区二区三区综合在线观看 | 免费高清在线观看视频在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲自偷自拍三级| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲欧美清纯卡通| ponron亚洲| 久久精品久久久久久久性| 亚洲伊人久久精品综合| 人人妻人人看人人澡| 精品久久久久久久末码| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久久久久国产电影| 九色成人免费人妻av| 亚洲在久久综合| 一区二区三区乱码不卡18| 久久热精品热|