抗病高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)平菇菌株的篩選

魯欣欣 鄒明 李峰 靳榮線 劉翼成 朱坤

抗病高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)平菇菌株的篩選

魯欣欣 鄒明 李峰 靳榮線 劉翼成 朱坤

（河南省新鄉(xiāng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，河南 新鄉(xiāng) 453000)

黃斑病是平菇出菇期最為常見、傳播性極強(qiáng)的一種細(xì)菌性病害，為篩選抗黃斑病、高產(chǎn)優(yōu)良平菇菌株，以25個(gè)平菇菌株為材料，通過(guò)平板對(duì)峙培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和出菇抗病性測(cè)定，篩選出7個(gè)具有較強(qiáng)抗黃斑病能力的抗病菌株；通過(guò)栽培出菇試驗(yàn)比較子實(shí)體農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量，選出1株菌絲抗逆性強(qiáng)、子實(shí)體抗黃斑病、生物學(xué)效率高，農(nóng)藝性狀表現(xiàn)良好的菌株XKPL014。

平菇；黃斑??；托拉斯假單胞桿菌；平板對(duì)峙培養(yǎng)；抗病高產(chǎn)菌株

平菇（(Fr.) Kummer）具有適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)量高、栽培原料來(lái)源廣泛、生長(zhǎng)周期短、栽培方式多樣等特點(diǎn)，是全世界廣泛栽培的食用菌之一[1,2]。我國(guó)現(xiàn)多為農(nóng)戶大棚栽培，由于管理水平參差不齊，導(dǎo)致病害發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重。平菇菌絲和子實(shí)體容易受到細(xì)菌和霉菌的污染[3]。黃斑病是平菇出菇期最為常見、傳播性極強(qiáng)的一種細(xì)菌性病害，在我國(guó)平菇主產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)了不同程度的爆發(fā)，Shi等[4]結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法確定平菇黃斑病的病原菌為托拉斯假單胞桿菌（），染病癥狀通常為菌蓋表面出現(xiàn)大面積黃化或黃色銹斑，有時(shí)會(huì)在菌蓋表面產(chǎn)生凹陷的病斑，嚴(yán)重時(shí)整個(gè)子實(shí)體卷曲萎黃，甚至完全腐爛，導(dǎo)致品質(zhì)和產(chǎn)量都極大降低，給廣大生產(chǎn)者造成巨大損失，嚴(yán)重者減產(chǎn)50%以上[5]。目前，對(duì)于平菇黃斑病的研究仍然沒有取得大的突破，尚未形成一套有效的防治體系。因此，開展抗病、高產(chǎn)的優(yōu)良平菇菌株篩選試驗(yàn)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試平菇菌株共25個(gè)，分別為河南省內(nèi)平菇主栽品種黑抗650、平菇99（對(duì)照），以及選育的雜交菌株XKPL001、XKPL003、XKPL004、XKPL005、XKPL007、XKPL008、XKPL009、XKPL010、XKPL012、XKPL013、XKPL014、XKPL015、XKPL017、XKPL021、XKPL022、XKPL023、XKPL025、XKPL026、XKPL027、XKPL028、XKPL029、XKPL030和XKPL035。托拉斯假單胞桿菌（），引自河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。供試菌株均保藏于新鄉(xiāng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所。

1.2 培養(yǎng)基質(zhì)配方

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯化鈉10 g，水1 000 mL。

原種培養(yǎng)基：煮熟麥粒98%，石膏2%。

栽培種培養(yǎng)基：玉米芯42%、棉籽殼42%、麩皮15%、石灰1%，含水量63%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 平板對(duì)峙試驗(yàn)

（1）病原菌菌懸液制備。將保存在甘油中的托拉斯假單胞桿菌在LB平板培養(yǎng)基上劃線接種，置于37 ℃恒溫環(huán)境培養(yǎng)12 h，挑取單菌落接入裝有50 mL液體LB培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，于37 ℃、150 r/min下?lián)u床培養(yǎng)12 h，備用。

（2）平菇菌株培養(yǎng)。分別將供試25個(gè)菌株的母種菌絲接于PDA試管培養(yǎng)基中，25 ℃下恒溫培養(yǎng)，待長(zhǎng)滿菌絲后待用。

（3）平板對(duì)峙培養(yǎng)篩選。用接種針在試管中挑取大小均一的母種菌絲塊，接種到PDA平板培養(yǎng)基的正中心位置，然后用經(jīng)滅菌的鑷子夾取直徑0.5 cm的小圓形濾紙片，呈三角形放置在接種后的培養(yǎng)皿內(nèi)（圖1），用移液槍吸取0.2 mL托拉斯假單胞桿菌菌懸液，分別滴到濾紙片上，最后放入25 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)情況并記錄結(jié)果。每個(gè)菌株設(shè)3次重復(fù)。

1.3.2 栽培出菇試驗(yàn)及農(nóng)藝性狀觀測(cè)

供試25個(gè)平菇菌株的栽培出菇試驗(yàn)在新鄉(xiāng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院研發(fā)中心進(jìn)行，采用的栽培配方：玉米芯42%、棉籽殼42%、麩皮15%、石灰1%，含水量63%。培養(yǎng)料現(xiàn)拌現(xiàn)裝，采用規(guī)格為18 cm×35 cm×0.005 cm的聚丙烯塑料袋裝袋，滅菌后在無(wú)菌條件下接種，菌袋置于24～26 ℃下避光培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿袋后置于出菇棚內(nèi)出菇，觀察自然情況下黃斑病發(fā)生情況。按照國(guó)家糙皮側(cè)耳特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南統(tǒng)計(jì)其主要農(nóng)藝性狀，并測(cè)定產(chǎn)量。每個(gè)菌株設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10個(gè)出菇袋。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果

按照1.3.1所述方法，培養(yǎng)7天后，觀察供試菌株在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖1所示。各菌株的菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)出明顯差異，以菌株XKPL008、XKPL021、XKPL023和XKPL026的菌絲生長(zhǎng)最受抑制，生長(zhǎng)速度慢，菌絲稀疏，生長(zhǎng)勢(shì)極差，初步得出這4個(gè)菌株的菌絲抗黃斑病能力較差；菌株XKPL001、XKPL003、XKPL004、XKPL005、XKPL007、XKPL009、XKPL010、XKPL012、XKPL013、XKPL015、XKPL022、XKPL027、XKPL028和XKPL035的菌絲生長(zhǎng)也受到一定程度的抑制，生長(zhǎng)速度較快，長(zhǎng)勢(shì)一般，表明這13個(gè)菌株的菌絲抗黃斑病能力一般；菌株XKPL014、XKPL017、XKPL025、XKPL029、XKPL030、黑抗650和平菇99的菌絲生長(zhǎng)受抑制不明顯，生長(zhǎng)速度快，菌絲生長(zhǎng)旺盛，平菇菌絲覆蓋過(guò)病原菌菌落，初步顯示這7個(gè)菌株的菌絲具有較強(qiáng)的抗黃斑病能力。

2.2 出菇試驗(yàn)菌株抗黃斑病情況和主要農(nóng)藝性狀

自然情況下，子實(shí)體黃斑病根據(jù)不同發(fā)病程度所表現(xiàn)的病情可，分為4個(gè)等級(jí)：難以分辨的淺黃色斑點(diǎn)為極輕微感染；顏色略深的淺黃色斑點(diǎn)為輕微感染；黃色凹陷斑點(diǎn)為中度感染；深黃色至深褐色凹陷斑點(diǎn)為嚴(yán)重感染。25個(gè)供試菌株感染黃斑病的情況見圖2。對(duì)菌株感染黃斑病的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，XKPL008、XKPL010、XKPL023和XKPL029等4個(gè)菌株出現(xiàn)黃斑病，其中XKPL029有極輕微感染，XKPL010有輕微感染，而XKPL008和XKPL023發(fā)病較早且較為嚴(yán)重。

對(duì)25個(gè)菌株的主要農(nóng)藝性狀進(jìn)行分析的結(jié)果（表1），在XKPL014、XKPL017、XKPL025、XKPL029、XKPL030、黑抗650和平菇99等抗性強(qiáng)的7個(gè)菌株中，除XKPL014外，其余6個(gè)菌株的產(chǎn)量均較低，前兩潮平均單袋產(chǎn)量在0.3 kg以下，而XKPL014的前兩潮平均單袋產(chǎn)量達(dá)到0.35 kg，生物學(xué)效率達(dá)77.8%，產(chǎn)量在所有供試菌株中為最高，且農(nóng)藝性狀表現(xiàn)良好：菌蓋灰黑色，菌褶白色、密集，菌柄硬實(shí)，初步篩選認(rèn)定其為抗病高產(chǎn)優(yōu)良品種，適宜進(jìn)一步推廣種植。

此外，菌株XKPL001、XKPL003、XKPL004、XKPL005和XKPL009等的前兩潮平均單袋產(chǎn)量均在0.33kg以上，生物學(xué)效率超過(guò)73%，其中XKPL001、XKPL005和XKPL009的菌蓋顏色較深、菌柄硬實(shí)；XKPL001和XKPL009的菌褶白且密集，雖抗病性一般，但子實(shí)體農(nóng)藝性狀優(yōu)良、產(chǎn)量較高，可作為今后選育抗病高產(chǎn)優(yōu)良菌株的親本材料。

表1 25個(gè)平菇菌株的主要農(nóng)藝性狀表現(xiàn)

品種前兩潮平均單袋產(chǎn)量/kg生物學(xué)效率/%抗黃斑病能力菌蓋顏色菌柄硬度菌褶密度菌褶顏色品種前兩潮平均單袋產(chǎn)量/kg生物學(xué)效率/%抗黃斑病能力菌蓋顏色菌柄硬度菌褶密度菌褶顏色 黑抗6500.28±0.04 defg62.2++灰褐中等中白XKPL0150.25±0.02 g55.6++灰褐中等中灰白 平菇990.29±0.05 cdefg64.4++深褐中等密白XKPL0170.28±0.02 defg62.2+++土黃中等稀疏白 XKPL0010.34±0.03 ab75.6++灰褐硬密白XKPL0210.25±0.03 g55.6+青灰中等密白 XKPL0030.34±0.03 ab75.6++灰褐中等密白XKPL0220.26±0.02 fg57.8++青灰軟密白 XKPL0040.33±0.02 abc73.3++土黃中等密白XKPL0230.25±0.04 g55.6+灰褐中等中白 XKPL0050.34±0.03 ab75.6++灰褐硬中白XKPL0250.27±0.01 efg60.0+++土黃中等稀疏白色 XKPL0070.31±0.03 abcde68.9++灰褐中等密白XKPL0260.26±0.01 fg57.8+白中等稀疏白 XKPL0080.26±0.01 fg57.8+深褐中等中灰白XKPL0270.27±0.01 efg60.0++青灰中等中灰 XKPL0090.34±0.02 ab75.6++深褐硬密白XKPL0280.25±0.02 g55.6++灰褐中等中灰 XKPL0100.28±0.04 defg62.2++灰褐中等中白XKPL0290.28±0.03 defg62.2+++灰褐中等密灰 XKPL0120.30±0.01 bcdef66.7++深褐中等中灰白XKPL0300.28±0.03 defg62.2+++深褐中等密灰 XKPL0130.32±0.02 abcd71.1++青灰中等密白XKPL0350.30±0.02 bcdef66.7++灰褐中等密白 XKPL0140.35±0.02 a77.8+++灰褐中等密白……………………

注：+為抗病能力弱，++為抗病能力一般，+++為抗病能力強(qiáng)；各菌株干料重均為0.45 kg；數(shù)據(jù)后小寫字母不同，表示差異顯著（＜0.05）。

3 討論與小結(jié)

現(xiàn)在對(duì)平菇黃斑病的防治，常用一些物理和藥劑防治的方法，如控制出菇溫度、濕度和通風(fēng)條件，噴施漂白粉溶液等藥物，不但耗費(fèi)大量人力物力，而且很難達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。利用抗病平菇品種防控細(xì)菌性病害是最為經(jīng)濟(jì)有效的生物防控方法。因此，培育抗病品種具有廣闊的前景。

本試驗(yàn)采取平菇菌絲與病原菌對(duì)峙培養(yǎng)的方法，測(cè)定供試菌株的抗性水平，以抗性水平作為評(píng)價(jià)參數(shù)，初步建立一種簡(jiǎn)單快速的抗黃斑病平菇菌株室內(nèi)篩選方法。此方法可有效規(guī)避田間接種費(fèi)時(shí)費(fèi)力、結(jié)果易受栽培管理?xiàng)l件等影響的缺點(diǎn)。

本研究通過(guò)室內(nèi)平板對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)合栽培出菇試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同菌株的抗性水平存在差異。其中，XKPL014雜交菌株的抗病性強(qiáng)且綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良，可為今后抗病強(qiáng)、品質(zhì)優(yōu)的平菇品質(zhì)示范推廣提供基礎(chǔ)。XKPL001和XKPL009這兩個(gè)菌株雖抗病能力一般，但綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良，產(chǎn)量和生物學(xué)效率高，可為今后遺傳育種提供優(yōu)質(zhì)種源材料。

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S646

B

2095-0934（2022）04-312-04

河南省食用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（Z2013-09-01）

魯欣欣，碩士研究生，實(shí)習(xí)研究員，從事食用菌新品種選育和栽培技術(shù)研究。E-mail：xxl1663@126.com。