新疆部分地區(qū)豬瘟病毒抗體水平檢測及分析

常軍帥，李 娜，王紫陽，屈勇剛，梁 晏，趙 玉，陳 寧

（1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003；2.動物疾病防控兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832003）

隨著我國經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，對豬肉的需求量也日益增多，促使我國生豬存欄量、豬肉產(chǎn)量穩(wěn)居全球第一[1]。但與發(fā)達(dá)國家相比，我國養(yǎng)殖水平相對較低，規(guī)模較小，致使豬病易發(fā)、頻發(fā)、較難凈化，嚴(yán)重影響了豬場的經(jīng)濟(jì)效益。豬瘟（CSF）俗稱“豬霍亂”，又稱“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種只感染豬的病毒性傳染病，該病毒自1810年在美國發(fā)現(xiàn)之后，100多年內(nèi)法國、英國、日本及我國也相繼報(bào)道出CSFV的本土病例出現(xiàn)[2]。CSFV傳播迅速，致死率高，被世界動物衛(wèi)生組織（Office International Des Epizooties, OIE）在《國際動物衛(wèi)生法典》中列為必須上報(bào)的疾病，在我國的《家畜家禽防疫條例實(shí)施細(xì)則》中也明確規(guī)定其為一類傳染病?！秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》將CSF列為優(yōu)先防治和重點(diǎn)防范的動物疫病[3]。CSFV分為3個(gè)基因型（基因1～3型）和11個(gè)基因亞型（1.1～1.4、2.1～2.3和3.1～3.4），其中我國流行的優(yōu)勢毒株為2.1b[2]。20世紀(jì)50年代，我國研發(fā)出了豬瘟兔化弱毒疫苗（C株），并于1965年提出根除豬瘟計(jì)劃，在我國及世界豬瘟凈化工作上發(fā)揮了關(guān)鍵作用。但由于我國養(yǎng)殖模式多元化、養(yǎng)殖人員技術(shù)水平參差不齊、生物安全防控意識薄弱、相關(guān)政策不夠完善等原因，導(dǎo)致CSF在我國凈化不徹底，急性型轉(zhuǎn)變?yōu)槁孕汀睾托?，呈現(xiàn)種豬長期帶毒、仔豬先天感染等癥狀。對于凈化CSF而言，疫苗免疫是最簡單、最有效的方法，但由于各種原因，導(dǎo)致疫苗免疫不合格，抗體水平低，致使CSF在我國以散發(fā)流行為主。

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）抗體檢測方法，價(jià)格低廉、快捷方便、特異靈敏，在評價(jià)抗體水平時(shí)最為常用。本試驗(yàn)為了解新疆部分地區(qū)CSFV的免疫狀況，對2019—2020年采集的1 238份豬血清進(jìn)行CSFV抗體檢測，根據(jù)結(jié)果對各豬場、各豬群進(jìn)行免疫程序優(yōu)化，以減少CSFV及其相關(guān)疾病的發(fā)生。

1 材料

1.1 樣品

2019年1月至2020年12月期間從新疆石河子市、伊犁哈薩克自治州、阿克蘇市、巴音郭楞蒙古自治州、奎屯市、塔城地區(qū)，按照地區(qū)、豬場及豬群類別的不同隨機(jī)采集了1 238份血樣，分離血清后立即在石河子大學(xué)動物科技學(xué)院進(jìn)行檢測。其中哺乳仔豬145份、保育豬132份、肥育豬81份、后備豬163份、繁殖母豬548份、種公豬169份。

1.2 材料和儀器

豬瘟病毒（CSFV）抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；獸用一次性采血器5 mL為南昌市山力畜牧器械有限公司產(chǎn)品；自動酶標(biāo)儀購自青島智匯谷信息技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 樣品及試劑準(zhǔn)備

新鮮的、冷藏（2～8 ℃少于8 d）的、冰凍的血清都可用于檢測；所有試劑需恢復(fù)至20 ℃，輕微震蕩混勻。

2.2 ELISA檢測方法

在每個(gè)CSFV抗原包被孔內(nèi)加入50 μL樣品稀釋液，每孔再分別加入50 μL樣品、陰性對照、陽性對照（陰、陽對照各2孔），輕微震蕩后加蓋封條放入20 ℃環(huán)境下孵育2 h；洗滌3次，每孔加100 μL酶標(biāo)，加蓋封條后放入20 ℃環(huán)境下孵育30 min；再次洗滌，加入100 μL底物溶液，放置10 min后再加入100 μL終止液，即可在450 nm出測量樣本及對照的吸光值。

2.3 結(jié)果判定

試驗(yàn)成立的標(biāo)準(zhǔn)為陰性對照平均值＞0.50，且陽性對照阻斷率＞50%，該檢測結(jié)果才能有效。阻斷率%=（陰性對照平均值-樣品OD450）/陰性對照平均值。當(dāng)阻斷率≥40%判定為陽性，阻斷率≤30%為陰性，阻斷率介于30%～40%之間為可疑。

2.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算各組數(shù)據(jù)的差異。

3 結(jié)果

3.1 不同豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

在1 238份樣品中，85.70%（1 061/1 238）的血清有CSFV的抗體存在，平均阻斷率為67.88%。A～F豬場的陽性率分別為91.11%（287/315）、94.91%（56/59）、81.40%（210/258）、80.80%（101/125）、86.35%（215/249）、82.76%（192/232）；其中B場的平均阻斷率最高，為70.26%，D場的平均阻斷率最低，為61.00%；D豬場的平均阻斷率與A、B、C、E場存在顯著差異（P＜0.05）；F豬場的平均阻斷率與A、B、C、D、E場差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 不同豬場CSFV抗體檢測結(jié)果

3.2 不同類別豬群CSFV抗體檢測結(jié)果

各類別豬群中，哺乳仔豬、保育豬、肥育豬、后備豬、繁殖母豬、種公豬陽性率分別為62.76%（91/145）、68.18%（90/132）、69.14%（56/81）、90.18%（147/163）、94.34%（517/548）、94.75%（160/169）；其中繁殖母豬的平均阻斷率最高，為74.05%，保育豬的平均阻斷率最低，為50.91%；肥育豬的平均阻斷率與哺乳仔豬、保育豬、后備豬、繁殖母豬、種公豬存在顯著差異（P＜0.05）；種公豬的平均阻斷率與后備豬、繁殖母豬差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

表2 不同類別豬群CSFV抗體檢測結(jié)果

4 討論與分析

目前我國CSFV主要表現(xiàn)為持續(xù)性感染和非典型性感染，造成這個(gè)結(jié)果的原因主要有兩個(gè)：一是CSFV可垂直傳播，種豬群凈化不徹底，所產(chǎn)仔豬在生長過程中可持續(xù)向環(huán)境排毒，對其他健康豬造成威脅；二是無效的疫苗免疫驅(qū)動了CSFV向低毒力凈化，才導(dǎo)致CSF病例多為非典型癥狀[4]。因此，對免疫效果及時(shí)評價(jià)、定期調(diào)整，才能更好地保證健康養(yǎng)殖。

檢測結(jié)果得出，CSFV的抗體陽性率為85.70%（1 061/1 238），明顯高于國家規(guī)定的70%，證明各地區(qū)對CSFV的免疫效果良好[5]；平均阻斷率為67.88%，明顯高于40%，說明該地區(qū)豬群CSFV抗體水平較高。谷思穎等[6]曾對該地區(qū)進(jìn)行過CSFV抗體檢測，得出2018年的平均陽性率為84.11%（270/321），與之相比，本試驗(yàn)抗體水平略有上升，可能受2019—2020年高豬價(jià)的影響。在各豬場中，D豬場陽性率最低，為80.80%（101/125），而B豬場陽性率高達(dá)94.91%（56/59），造成D豬場陽性率低的原因可能是疫苗注射量不足。免疫劑量不足是免疫失敗的主要原因，D豬場可結(jié)合本豬場傳統(tǒng)和現(xiàn)狀制定出更科學(xué)、高效的免疫程序[7]。各類別豬群中，哺乳仔豬的陽性率最低，為62.76%（91/145）。對于這種現(xiàn)象，可在母豬產(chǎn)前40～20 d加強(qiáng)免疫1次，提高乳汁中母源抗體水平；也可檢測該地區(qū)仔豬母源抗體半衰期時(shí)間，即母源抗體的效價(jià)在1∶8～1∶64時(shí)，及時(shí)對仔豬進(jìn)行CSFV疫苗免疫，這樣才能使母源抗體不干擾免疫效果；保育豬、肥育豬的陽性率也未達(dá)到國家規(guī)定的70%的抗體陽性率，為了提高免疫效果，注射疫苗同時(shí)肌肉注射亞硒酸鈉維生素E或左旋咪唑等免疫增強(qiáng)劑[7]。

總之，在防控CSFV中疫苗免疫雖是最重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，但也離不開綜合防控措施。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保證豬舍環(huán)境衛(wèi)生，才能更好地提高豬群對疾病的抵抗力。同時(shí)凈化豬場中的豬圓環(huán)病毒病、豬藍(lán)耳病等免疫抑制疾病，減少疫苗免疫過程中的干擾因素，免疫效果才能達(dá)到預(yù)期效果。同時(shí)，針對抗體值明顯高于平均水平的豬只要進(jìn)行CSFV的抗原檢測，才能確保生豬養(yǎng)殖事業(yè)能夠長久穩(wěn)定的發(fā)展。