‘華仲12號(hào)’杜仲葉片黃酮類物質(zhì)組成鑒定及含量分析

李 慧，張 婉，李 靜，朱景樂，陳夢(mèng)嬌，唐 駿，孟益德，劉 丹

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，河南 鄭州 450002；2.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 a.經(jīng)濟(jì)林研究所；b.經(jīng)濟(jì)林種質(zhì)創(chuàng)新與利用國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450003；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 果樹研究所，遼寧 興城 125100；4.國(guó)有信陽市平橋區(qū)天目山林場(chǎng)，河南 信陽 464100；5.山東省林草種質(zhì)資源中心，山東 濟(jì)南 250102）

杜仲Eucommia ulmoidesOliv.為杜仲科杜仲屬單科單屬植物，是一種名貴的中藥材和重要的經(jīng)濟(jì)樹種。杜仲多以皮入藥，但有關(guān)研究結(jié)果表明，其葉片與樹皮有著相似的化學(xué)成分和抗氧化活性，且杜仲葉片的再生能力強(qiáng)，葉片資源更加豐富也更容易采取[1]。黃酮類物質(zhì)具有抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫力等多種功效，是杜仲葉中一類重要的活性成分，其在杜仲葉片和樹皮中的含量相近，因此，亦可以葉片代替樹皮作為藥源[2-5]?！A仲12 號(hào)’杜仲Eucommia ulmoides‘Huazhong No.12’是葉片變異型的杜仲品種，其葉片呈現(xiàn)紅色，與葉片呈綠色的杜仲相比，‘華仲12 號(hào)’杜仲表現(xiàn)出更加優(yōu)良的園林觀賞價(jià)值[2]。有關(guān)研究結(jié)果表明，黃酮類物質(zhì)在組成和含量上的差異是影響植物葉色表現(xiàn)的重要因素，對(duì)于不同品種杜仲來說，其葉色的不同與黃酮類物質(zhì)的組成和含量都有一定的相關(guān)性[6-10]。為了進(jìn)一步了解‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片呈現(xiàn)紅色的現(xiàn)象與黃酮類物質(zhì)組成和含量之間的相關(guān)性，以葉片呈綠色的‘華仲11 號(hào)’為對(duì)照，檢測(cè)并分析‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組成和含量，以期為后期關(guān)于‘華仲12 號(hào)’杜仲合理定向化利用的研究奠定基礎(chǔ)。

近些年來，針對(duì)杜仲葉片中生物活性物質(zhì)的提取方法、藥理分析、活性物質(zhì)與其生態(tài)因子間的相關(guān)性等方面的研究不斷深入[11-14]，但有關(guān)‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組成成分及含量的分析鮮見報(bào)道。常用于檢測(cè)黃酮類物質(zhì)的方法有超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法、紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法等，與后兩種方法相比，超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法具有自動(dòng)化程度高、分離速度快、定性準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)[15-17]。黃酮類物質(zhì)是以2-苯基色原酮（圖1）為母核的化合物，其組分復(fù)雜，本研究運(yùn)用UPLC-PDA-MS/MS 法，通過將其與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，采用色譜與質(zhì)譜信息分析、數(shù)據(jù)分析等方法，對(duì)‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)分別進(jìn)行定性與定量分析，并選取葉色呈綠色的葉用型良種‘華仲11 號(hào)’杜仲Eucommia ulmoides‘Huazhong No.11’葉片作為對(duì)照材料，比較分析兩種杜仲無性系葉片中黃酮類物質(zhì)組成與含量的差異情況，以期為 ‘華仲12 號(hào)’杜仲合理的定向化利用的研究奠定理論基礎(chǔ)。

圖1 2-苯基色原酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of 2-phenyl-chromone

1 材料與方法

1.1 材 料

供試的‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片均采自于河南省新鄉(xiāng)市原陽杜仲良種繁育圃。標(biāo)準(zhǔn)品分別為矢車菊素-3-O 葡萄糖苷、槲皮素-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、蘆丁、山柰酚-葡萄糖苷，均為美國(guó)Sigma-Aldrich 公司生產(chǎn)。

1.2 黃酮類物質(zhì)的提取與純化

將采集的‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片迅速地分別置于液氮中冷凍，并利用冷凍研磨機(jī)（SPEX 公司）研磨成粉，分別稱取約為1.0 g 的樣品，加入10 mL 的甲醇（HPLC 級(jí)，美國(guó)Fisher公司），以超聲波超聲提取20 min，然后置于高速冷凍離心機(jī)（CF16RXII 式，日本日立公司）中，以10 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心5 min，分別取上清液（提取液）以備用。參照相關(guān)文獻(xiàn)[18]中說明的方法分別進(jìn)行純化，對(duì)其中的部分步驟有所改進(jìn)，將所用的樣品提取液、淋洗所用的甲醇、最終定容體積均改為5.0 mL，淋洗固相萃取小柱的水體積為2.5 mL，純化后再上機(jī)檢測(cè)。

標(biāo)準(zhǔn)品的制備：每種標(biāo)準(zhǔn)品各準(zhǔn)確稱取5.0 mg，以甲醇溶解并定容至10 mL，得到500 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，根據(jù)需要配置成適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液使用液。

1.3 UPLC 和MS/MS 條件

UPLC 條件：柱溫40 ℃，進(jìn)樣量2.0 μL，流速0.3 mL·min-1。流動(dòng)相A、B 分別為乙腈（HPLC 級(jí)，美國(guó)Fisher 公司生產(chǎn)）和0.5%的甲酸（LCMS 級(jí)，美國(guó)Anaqura Chemicals Supply 公司生產(chǎn)）。A 液的洗脫梯度為：0%，0 min；10%，1 min；20%，10 min；25%，16 min；80%，18 min；洗脫20 min后回到初始狀態(tài)，平衡5 min。

MS/MS 條件：參考有關(guān)文獻(xiàn)[19]進(jìn)行設(shè)定。

1.4 杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)組成的鑒定與含量的測(cè)定

因?yàn)椴荒艽_認(rèn)兩種杜仲葉片中所含有的黃酮類物質(zhì)的具體組成，無法獲取全部相應(yīng)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)于有標(biāo)準(zhǔn)品的物質(zhì)，可以利用標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和MS/MS 質(zhì)譜信息，結(jié)合其相對(duì)分子質(zhì)量及二級(jí)質(zhì)譜碎片離子進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，完成對(duì)該黃酮類物質(zhì)的定性分析；而對(duì)于未獲得相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的物質(zhì)，則可結(jié)合其苷元及糖基等信息進(jìn)行鑒定。

采用相對(duì)定量的分析方法，采用正離子MRM模式，將標(biāo)準(zhǔn)品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液使用液，用外標(biāo)法準(zhǔn)確測(cè)定杜仲葉片提取液中相應(yīng)物質(zhì)的含量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積及含量、從提取液中測(cè)得的其他黃酮類物質(zhì)的峰面積，運(yùn)用公式（1）計(jì)算出各黃酮類物質(zhì)的含量。因?yàn)闊o法得到全部相應(yīng)黃酮類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品，無法準(zhǔn)確確定黃酮類物質(zhì)的質(zhì)譜響應(yīng)差異，所以先假設(shè)各種黃酮類物質(zhì)的質(zhì)譜響應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品一致，即Fj=1，F(xiàn)j表示相同摩爾質(zhì)量的化合物j與標(biāo)準(zhǔn)品i在相同試驗(yàn)條件下檢測(cè)信號(hào)的比值，然后按式（1）計(jì)算各黃酮類組分的含量。所有的測(cè)定結(jié)果均以3 次測(cè)定值的（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）來表示。

式（1）中：j表示利用標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定其含量的某種黃酮類物質(zhì)，Cj表示其含量；i為標(biāo)準(zhǔn)品；A為某種黃酮類物質(zhì)的峰面積；M為某種黃酮類物質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

使 用Microsoft Excel 2016 和SPSS 25.0 軟 件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 ‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組成

‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中15 種黃酮類物質(zhì)的色譜圖如圖2所示，各類黃酮類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖3所示，圖2和圖3中的數(shù)字均表示峰號(hào)；15 種黃酮類物質(zhì)的保留時(shí)間、分子離子的質(zhì)荷比（m∶z）、碎片離子質(zhì)荷比及物質(zhì)組成與含量見表1，表1中的峰號(hào)分別與2 和圖3中的數(shù)字相對(duì)應(yīng)。

表1 ‘華仲12 號(hào)’杜仲和‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)組成及含量（n=3）Table 1 Composition and content of flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’ and ‘Huazhong 11’ (n=3)

圖2 ‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中15 種黃酮類物質(zhì)的色譜圖Fig.2 Chromatogram of 15 flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’

圖3 ‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中各類黃酮類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.3 Chemical structure of flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’

由表1可知，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中共檢測(cè)出15 種黃酮類物質(zhì)，根據(jù)其苷元結(jié)構(gòu)可將15 種黃酮類物質(zhì)劃分為3 類：槲皮素糖苷類有10 種，分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖、槲皮素-戊糖酰-己糖酰-己糖、槲皮素-己糖-己糖、槲皮素-戊糖酰-蕓香糖苷、槲皮素-戊糖-己糖、槲皮素-脫氧己糖-己糖、槲皮素-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-丙二酰-葡萄糖苷；山柰酚糖苷類有3 種，分別為山柰酚-蕓香糖苷、山柰酚-葡萄糖苷、山柰酚-丙二酰-葡萄糖苷；矢車菊素糖苷類有2 種，分別為矢車菊素-3-桑布糖苷和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。在相同的試驗(yàn)條件下，‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中共檢測(cè)出12 種黃酮類物質(zhì)，包括槲皮素糖苷類的9 種和山柰酚糖苷類的3 種。比較分析可知，槲皮素-3-O-半乳糖苷、矢車菊素-3-O 桑布糖苷、矢車菊素-3-O 葡萄糖苷此3 種物質(zhì)都是‘華中12 號(hào)’杜仲葉片獨(dú)有的。

圖2A 顯示，在相同的試驗(yàn)條件下，峰號(hào)分別為7、8、9 和11 的保留時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比（m∶z）與其對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的均相似，據(jù)此可識(shí)別出其對(duì)應(yīng)的黃酮類化合物可能分別為蘆丁、槲皮素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷和山柰酚-蕓香糖苷。

由圖2A 可知，峰號(hào)1、2、3 對(duì)應(yīng)的化合物分子離子的質(zhì)荷比分別為773、759、627，據(jù)此可以初步判斷，峰號(hào)1、2、3 對(duì)應(yīng)的物質(zhì)可能分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖、槲皮素-戊糖酰-己糖酰-己糖、槲皮素-己糖-己糖，測(cè)得的其相對(duì)分子質(zhì)量與其對(duì)應(yīng)的理論相對(duì)分子質(zhì)量都相匹配。對(duì)照?qǐng)D3中黃酮類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式分析可知，峰號(hào)1 對(duì)應(yīng)的特征子離子碎片的質(zhì)荷比分別為627、465、303，其代表的物質(zhì)可能分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子脫氧己糖（其質(zhì)荷比為627）、槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子脫氧己糖和一分子己糖（其質(zhì)荷比為465）、槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子脫氧己糖和兩分子己糖（其質(zhì)荷比均為303）的碎片離子；峰號(hào)1 對(duì)應(yīng)的碎片離子的質(zhì)荷比為611，其可能是槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子己糖的碎片離子。峰號(hào)2 對(duì)應(yīng)的特征子離子碎片的質(zhì)荷比分別為627、465、303，其可能分別為槲皮素-戊糖酰-己糖酰-己糖失去一分子戊糖（其質(zhì)荷比為627）、一分子戊糖和一分子己糖（其質(zhì)荷比均為465）、一分子戊糖和兩分子己糖（其質(zhì)荷比均為303）的碎片離子；峰號(hào)3 對(duì)應(yīng)的特征子離子碎片的質(zhì)荷比分別為465、303，其可能分別為槲皮素-己糖-己糖失去一分子己糖、失去兩分子己糖的碎片離子。

峰號(hào)4 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比為 743，初步判斷其代表的物質(zhì)為槲皮素-戊糖酰-蕓香糖苷，其特征碎片離子的質(zhì)荷比分別為611、465、303，其可能分別為槲皮素-戊糖酰-蕓香糖苷失去一分子戊糖（其質(zhì)荷比為611）、失去一分子戊糖和一分子鼠李糖（其質(zhì)荷比均為465）、失去一分子戊糖和蕓香糖（葡萄糖+鼠李糖）（其質(zhì)荷比均為303）的碎片離子。峰號(hào)5 和6 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比分別為 597 與611，可初步判斷其代表的物質(zhì)分別為槲皮素-戊糖-己糖和槲皮素-脫氧己糖-己糖；峰號(hào)5 對(duì)應(yīng)的特征碎片離子的質(zhì)荷比分別為465 與303，其代表的物質(zhì)可能為槲皮素-戊糖-己糖失去戊糖和失去戊糖及己糖的碎片離子；峰號(hào)6 對(duì)應(yīng)的特征碎片離子的質(zhì)荷比分別為465與303，其代表的物質(zhì)可能分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖失去一分子脫氧己糖和失去脫氧己糖和己糖的碎片離子。

峰號(hào)10 和13 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比分別為551 與535，初步判斷其代表的物質(zhì)分別為槲皮素-丙二酰葡萄糖苷和山柰酚-丙二酰葡萄糖苷，且測(cè)定的相對(duì)分子質(zhì)量與其對(duì)應(yīng)的理論相對(duì)分子質(zhì)量相匹配。其碎片離子的質(zhì)荷比分別為303 與287，其可能分別是槲皮素-丙二酰葡萄糖苷和山柰酚-丙二酰-葡萄糖苷失去丙二酰葡萄糖的碎片離子。

峰號(hào)12 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比為443，初步判斷其代表的物質(zhì)為山柰酚-葡萄糖苷，測(cè)定的相對(duì)分子質(zhì)量與其對(duì)應(yīng)的理論相對(duì)分子質(zhì)量一致；其碎片離子質(zhì)荷比為287，其可能是山柰酚-葡萄糖苷失去一分子葡萄糖的碎片離子。

對(duì)于‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中矢車菊素糖苷類物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果，可以通過將其與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對(duì)而確認(rèn)。根據(jù)圖2B 中杜仲葉片提取液在510 nm 波長(zhǎng)下的譜圖中的保留時(shí)間，可初步判斷‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中含有矢車菊素-3-O 桑布糖苷和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。由表1可知，峰號(hào)14 和15 分別代表矢車菊素-3-O-桑布糖苷與矢車菊素-3-O-葡萄糖苷，其碎片離子的質(zhì)荷比分別為287 與287，推測(cè)其分別為矢車菊素-3-O 桑布糖苷失去一分子桑布糖和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷失去葡萄糖的碎片離子（圖3C）。這一結(jié)果表明，在相同的試驗(yàn)條件下，杜仲葉片中矢車菊素-3-O-葡萄糖苷的色譜保留時(shí)間、二級(jí)質(zhì)譜碎片離子與其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品均一致；杜仲葉片中矢車菊素-3-O-桑布糖苷的色譜保留時(shí)間、二級(jí)質(zhì)譜碎片離子與其對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜分析參數(shù)也都一致。根據(jù)上述分析結(jié)果可以鑒別，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中很可能含有矢車菊素-3-O-葡萄糖苷和矢車菊素-3-O-桑布糖苷。

圖4 華仲12 號(hào)’杜仲和‘華仲11 號(hào)’杜仲葉中15 種黃酮類物質(zhì)的含量分布情況Fig.4 Content distribution of 15 flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’ and ‘Huazhong 11’

2.2 杜仲葉中黃酮類物質(zhì)的含量及分析

兩種杜仲葉片中各種黃酮類物質(zhì)的含量見表1。由表1可知，‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中12 種黃酮類化合物的總含量為4.136 6 g·kg-1，‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-丙二酰-葡萄糖苷、槲皮素-戊糖-己糖、槲皮素-蕓香糖苷的含量均相對(duì)較高，其含量與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中其他黃酮類物質(zhì)的含量均有顯著差異。

從表1中還可看出，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中共檢測(cè)到15 種黃酮類物質(zhì)，其總含量為36.732 3 g·kg-1，約為‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)總含量的8.88 倍。其中，槲皮素糖苷類（10 種）、山柰酚糖苷類（3 種）、花色苷類（2 種）物質(zhì)的含量分別占其黃酮類物質(zhì)總含量的94.33%、4.39%、1.29%。槲皮素-戊糖-己糖和槲皮素-3-O-葡萄糖苷都是‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中的主要黃酮類物質(zhì)，其含量分別占其組分總含量的48.80%與27.67%，此二者與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中對(duì)應(yīng)組分含量的差異均顯著，且與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中其他黃酮類組分的含量相比亦有顯著差異。作為‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中獨(dú)有的物質(zhì)，槲皮素-3-O-半乳糖苷、矢車菊素-3-O-桑布糖苷、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷含量分別為0.494 9、0.440 0、0.035 1 g·kg-1。比較分析‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組分與含量可知，除了‘華仲12 號(hào)’獨(dú)有的3 種物質(zhì)及槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖、槲皮素-丙二酰-葡萄糖苷、山柰酚-蕓香糖苷、山柰酚-丙二酰-葡萄糖苷外，‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片間對(duì)應(yīng)的其他黃酮類物質(zhì)的含量均表現(xiàn)出顯著差異。

3 討論與結(jié)論

在反相液相色譜分離過程中，含有葡萄糖的黃酮醇糖苷類化合物的色譜保留時(shí)間一般長(zhǎng)于含有半乳糖的[20]。槲皮素-3-O-葡萄糖苷與槲皮素-3-O-半乳糖苷均屬于異構(gòu)體，結(jié)合保留時(shí)間及二級(jí)質(zhì)譜碎片離子分析后判斷，峰號(hào)8 和9 所代表的物質(zhì)分別為槲皮素-3-O-半乳糖苷與槲皮素-3-O-葡萄糖苷。

不同品種的杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組成有所不同。研究結(jié)果表明，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中獨(dú)有的3 種黃酮類組分分別為槲皮素-半乳糖苷、矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷。唐芳瑞等[21]從杜仲葉片中鑒定出的8 種黃酮類物質(zhì)中，除了quercetin-3-O-rutinoside、quercetin-3-O-glucoside、quercetin-3-O-galactoside之外，還包括本研究未測(cè)得的槲皮素、quercetin-3-O-sambubioside、kaempherol-3-O-sambubioside 等。閆建昆等[22]從杜仲的干燥葉中分離得到了圣草素、山柰酚-3-Oα-L-鼠李糖苷、山柰酚-3-O-β-D-6’-乙?；拎咸擒盏? 種黃酮類物質(zhì)。在上述已報(bào)道的杜仲葉片中的黃酮類物質(zhì)中，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中含有的矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷均未見報(bào)道。

本研究從‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中鑒定出的黃酮類物質(zhì)共有15 種，與從‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中鑒定出的黃酮類物質(zhì)相比，槲皮素-半乳糖苷、矢車菊素-桑布糖苷、矢車菊素-葡萄糖苷均為‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中獨(dú)有的，其含量分別占其組分總含量的1.39%、1.12%、0.10%?！A仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的總含量高達(dá)36.732 3 g·kg-1，約為‘華仲11 號(hào)’杜仲葉中的8.88 倍，說明‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的含量遠(yuǎn)高于‘華仲11 號(hào)’的。且作為‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的主要組分，槲皮素-戊糖-己糖和槲皮素-3-O-葡萄糖苷的含量分別高達(dá)17.924 0 與10.164 1 g·kg-1，無論是與供試材料中其他黃酮類物質(zhì)相比，還是與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉中各對(duì)應(yīng)組分相比，這2 種組分都有顯著差異。路買林等[23]曾報(bào)道，花色苷含量的變化是‘華仲12 號(hào)’杜仲葉色呈現(xiàn)紅色的直接原因。朱景樂等[24]曾以杜仲的3 種優(yōu)良無性系‘華仲11 號(hào)’‘華仲12 號(hào)’和密葉杜仲為試驗(yàn)材料，采用分光光度計(jì)法測(cè)定其葉片中花色苷的含量，結(jié)果表明，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中花色苷的含量顯著高于‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片的，是‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片的1.8 倍，他們指出，葉片中高含量的花色苷是‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片表現(xiàn)出紅色的主要原因。本研究結(jié)果表明，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片具有3 種獨(dú)有的物質(zhì)，其中的矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷均屬于花色苷類，據(jù)此推測(cè)，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片的呈色很可能與其獨(dú)有的物質(zhì)有重要關(guān)系。再者，黃酮類物質(zhì)具有良好的藥用價(jià)值，‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中高含量的黃酮類物質(zhì)使其具有良好的開發(fā)利用前景。

綜上所述，本研究從‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中共鑒定出15 種黃酮類物質(zhì)，包括槲皮素糖苷類（10 種）、山柰素糖苷類（3 種）及花色苷類（2 種）物質(zhì)?！A仲12 號(hào)’杜仲葉片中存在高含量的黃酮類物質(zhì)，與‘華仲11 號(hào)’杜仲相比，其多種組分含量也均顯著較高，且其獨(dú)具槲皮素-半乳糖苷、矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷這3 種物質(zhì)。此3 種其獨(dú)有的物質(zhì)及多種高含量黃酮類組分的存在，可能共同影響著‘華仲12號(hào)’杜仲葉片的呈色，也是影響杜仲品種的觀賞價(jià)值、藥用價(jià)值及開發(fā)利用前景的重要因素。此研究結(jié)果對(duì)于 ‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片化學(xué)成分的研究、特定組分的高效積累機(jī)理的研究、‘華仲12 號(hào)’杜仲的定向利用研究等方面都具有重要意義。