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    正交設計優(yōu)化附子煨制工藝的研究*

    2022-12-05 10:58:24侯春久何平平林亮華
    中國中醫(yī)藥現代遠程教育 2022年22期
    關鍵詞:附片建昌烏頭

    侯春久 蘇 慧 曹 婧 何平平 林亮華

    (江西中醫(yī)藥高等??茖W校藥學系,江西 撫州 344000)

    附子的煨制方式是江西“建昌幫”具有地域特色的炮制方法,“建昌幫”以擅長傳統(tǒng)飲片加工炮制、藥材集散交易著稱。炮制風格以工具輔料獨特,工藝取法烹飪,講究形色氣味,毒性低,療效高著稱。作為古老藥幫之一,繁榮數百年。在“建幫炮制十三法”中,以煨制法和炆制法最具特色[1],其中煨制法乃“雷公炮炙十七法”之一,建昌幫之煨法不同于其他幫派的煨法,其保留著唐代以來用糠灰炮炙的古老技法,該法是將凈藥材置糠火中煨熟,在全國別具一格,典型代表藥物就是建昌幫煨附片[2]。傳統(tǒng)炮制方法操作復雜,且成品得率較低,不適合特色飲片的應用。本次研究探索一種現代煨制方法,并量化炮制終點生物堿含量的指標,為實現批量生產以及炮制成品質量提供參考。

    1 儀器與材料

    1.1 儀器 生附子(購于四川江油中壩飲片廠)。煨附片(傳統(tǒng)煨制方法得到),安捷倫1260高效液相色譜儀[安捷倫科技(中國)有限公司]。YL183H2高壓蒸汽鍋(浙江蘇泊爾股份有限公司);CSY-L2中藥水分測定儀(深圳市芬析儀器制造有限公司),優(yōu)普超純水機RWD-1(上海優(yōu)普實業(yè)有限公司),KQ-500DE超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司),溫控煨制爐(自制);XW-80A渦旋混合儀(海門其林貝爾儀器制造有限公司)。

    1.2 試劑 乙醚、 乙酸乙酯、異丙醇、二氯甲烷、硫酸等有機溶劑均來源于西隴科學股份有限公司,均為分析純。乙腈:色譜純(美國天地有限公司);烏頭堿對照品(批號:20051918)、烏頭原堿(批號:20060306)、新烏頭堿(批號:20080210)、苯甲酰烏頭原堿(批號:19103010)、苯甲酰新烏頭原堿(批號:20022710)、次烏頭堿(批號20052710)、苯甲酰次烏頭原堿(批號:20033111)購于信陽萊耀生物科技有限公司。

    2 方法與結果

    2.1 煨附片傳統(tǒng)炮制方法 選大個鹽附子,清水漂洗至味微咸,晾干表皮水分。選避風處,砌一直徑45 cm圍灶,用篩凈的糠灰鋪平地面,約3 cm厚。將附子尾端朝下插入灰中,靠攏,依次覆蓋薄片生姜、草紙、糠灰、干稻草、干糠。用稻草點燃煨制2~3 d,待糠燼灰冷,取出煨附片。敲之有聲為好。篩凈糠灰后置木甄內,隔水武火蒸3~4 h,至無或微有麻味,表面光澤時停火。日攤夜悶至六成干,切片或曬干后分次潤軟切片[3]。

    2.2 炮制方法的選擇 通過對建昌幫煨附片傳統(tǒng)炮制工藝的研究發(fā)現,其炮制效果主要與煨制溫度、生姜用量、煨制時間以及蒸制時間、蒸制溫度等有關。 生姜的用量主要與附子和容器的大小有關,用量在1~1.2倍之間,對結果無影響。故本次優(yōu)化試驗主要選擇煨制溫度、煨制時間以及蒸制時間為因素。根據預實驗選擇3種不同的水平。因素水平見表1。以炮制成品物性參數量化值為考察指標,對炮制方法進行綜合評價,正交試驗設計及綜合評價結果見表2。具體操作如下:選個大生附子置于小型均勻加熱溫控煨制爐中,依次鋪糠灰,擺放附子,覆薄生姜片、草紙、糠灰。煨制完成后篩凈糠灰置高壓蒸汽鍋中蒸制,烘干后切制成薄片即得成品。其成品見圖1。

    表1 因素水平表

    表2 正交試驗結果表

    注:樣1為傳統(tǒng)炮制方法,樣2、樣3、樣4為現代炮制方法。圖1 煨附片成品

    2.3 炮制成品的評定 觀察飲片的性狀,采用游標卡尺測量飲片厚度,量取多種飲片取平均值。將炮制所得成品置于同一環(huán)境下,通過多組中藥學人員包括主任中藥師、主管中藥師、建昌幫傳統(tǒng)炮制方法傳承人以及本校中藥學專業(yè)建昌幫班學生對飲片表面顏色、斷面質地、氣、味進行綜合評價。建昌幫煨附片成品性狀要求為灰棕色半透明,不規(guī)則卵圓型薄中片,斷面光滑平整,微有光澤,有數個小孔隙,質脆,無臭,味微咸,不麻舌。根據以上特點,對不同等級狀態(tài)進行賦值,根據與傳統(tǒng)炮制方式的接近程度,采取百分制的原則,例如顏色為灰棕色 ,根據表面顏色灰棕色-灰色-棕色的等級區(qū)別賦值為15~0,并將最后所得的物性參數評分作為綜合評價指標。

    3 生物堿類成分的含量測定

    3.1 滴定分析測定總生物堿 按照酸堿滴定法[4]測定供試品中總生物堿的含量,將濾過制得的供試品溶液轉移置25 mL容量瓶中,精密加入0.01 mol/L硫酸滴定液10 mL,加水至刻度,放置20 min,濾過,精密吸取續(xù)濾液10 mL于三角燒瓶中,加甲基紅指示劑1滴,用0.02 mol/L濃度的NaOH滴定液,滴至黃色,記錄所消耗的NaOH量,并換算成被反應的硫酸滴定液的量。其中以烏頭堿表示總烏頭堿的含量,每1 mL滴定液相當于12.6 mg烏頭堿。

    3.2 標準品的制備 精密稱取對照品新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿,加入異丙醇-三氯甲烷(1∶1)混合溶液于100 mL容量瓶中,渦旋混合儀震蕩溶解,定容至100 mL,制備成約50 mg/mL的標準混合溶液。

    3.3 供試品的制備 精密稱定煨附片粗粉2 g,置具塞錐形瓶中,采用《中華人民共和國藥典》[5]附子中供試品制備方法制備得到煨附片供試品。

    3.4 酯型生物堿的含量測定 色譜柱:Agilent Zorbax-C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),G1314A型VWD檢測器,流速為1.0 mL/min,進樣量 20 μL,柱溫為 30 ℃,檢測波長 235 nm。流動相配比和梯度洗脫條件按照《中華人民共和國藥典》[5]附子含量測定項下的條件進行。

    3.5 飲片含量測定 按照3.4項下的色譜條件進行測定,平行測定3次,計算生物堿含量,結果見表3。

    通過正交設計的直觀分析表可以看出,根據R值,對結果影響較大的因素排名依次是A>C>D>B。根據K值選擇的最佳炮制條件是A1C1D2B3。選取最佳炮制條件進行驗證性試驗。試驗重復性較好。

    表3 生物堿的含量測定 (%)

    現代炮制方式所得到的成品煨附片所得生物堿含量相對穩(wěn)定,且均符合《中華人民共和國藥典》[5]對附子飲片的質量要求,與傳統(tǒng)炮制方法得到的煨附片所含生物堿含量無明顯差異。

    4 討論

    利用現代工藝和方法對傳統(tǒng)技術進行研究,一直是中藥研究者的研究熱點。特別是對具有炮制特色的中藥飲片。本研究在保持了建昌幫煨制附子特點的基礎上,保留了糠灰,并沿用了生姜覆蓋的特點,采用電加熱的方式進行煨制附子的火制部分的現代化研究。經過反復試驗發(fā)現,若不加入糠灰作為傳導熱量的載體,所得煨附片的顏色較深,不具有半透明的特點,易出現炮制過品,且在含量檢測的時候,發(fā)現單酯型生物堿的總量會有所下降。原炮制方法采用生姜覆蓋附子再煨制,在研究過程中選擇用生姜汁浸泡附子后再進行煨制。發(fā)現所得的雙酯型生物堿的含量有所升高,成品顏色較淺,易出現炮制不及品,炮制效果不理想。對蒸制進行研究的過程中發(fā)現,采用高壓蒸制的方式,蒸汽保持持久。和普通蒸制方式相比,沒有明顯的顏色和生物堿含量差別。從以上實驗結果可以看出,糠灰在炮制方式中不僅僅是傳熱介質的作用,其可以作為輔料,對附子的減毒增效發(fā)揮作用。生姜覆蓋在附子表面,通過熱量的傳遞,將生姜當中的成分慢慢滲入到附子中。而改為生姜汁浸泡,熱量傳遞過程在生姜浸泡之后,生姜對附子減毒的炮制影響明顯變小。故在現代化煨制附子的過程中,需要注意,保持糠灰的存在,并且煨制溫度不能過高,需要保持一段煨制時間,生姜需要覆蓋在附子之上,這些關鍵的步驟直接影響了炮制效果和建昌幫煨制特色??坊壹吧鳛檩o料的炮制機制還需要進一步的研究。高壓蒸制過程保證了蒸汽環(huán)境,可以縮短傳統(tǒng)蒸制的時間。在炮制過程中,為了提高收率,可以檢測煨制過程中火制之后中間品的質量,主要通過含量測定進行。根據含量測定的結果,縮短或延長蒸制的時間。

    建昌幫煨制附子的現代工藝研究所得到的煨附子成品雖不能和傳統(tǒng)手工炮制得到完全一致的試驗結果,但可以避免傳統(tǒng)炮制存在的臨時在戶外砌的圍灶中用慢速燃燒的谷糠火的取熱方式進行煨制帶來的弊端。傳統(tǒng)炮制均有經驗判斷,收率較低,若經驗不足,收率只能在10%左右。傳統(tǒng)方式炮制記載損耗在70%~75%之間,現代炮制工藝的損耗較少,收率較高,在進一步深入研究的基礎上可以作為規(guī)模型生產的參考。

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