黑鯛自體受精家系的建立及養(yǎng)殖試驗(yàn)

孟 乾，郭亞東，賈超峰，祝 斐，王文權(quán)，徐大鳳，陳淑吟

(1.江蘇省海洋水產(chǎn)研究所，江蘇 南通 226001；2.如東縣漁政監(jiān)督大隊，江蘇 如東 226400)

黑鯛隸屬于鱸形目、鯛科、棘鯛屬，主要分布在我國東南沿海一帶以及日本、東南亞等地區(qū)。黑鯛既是我國增殖放流品種之一，同時也是我國沿海地區(qū)海水養(yǎng)殖的名貴經(jīng)濟(jì)魚。黑鯛肉質(zhì)細(xì)膩、鮮美，營養(yǎng)豐富，深受市場歡迎以及消費(fèi)者喜愛。但黑鯛生長需要經(jīng)歷兩次越冬，嚴(yán)重制約黑鯛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，亟須通過品種改良提高生長速度。

海水魚育種中最經(jīng)典、常用的方法為選擇育種，根據(jù)選擇育種的理論，使優(yōu)良性狀基因純化并穩(wěn)定遺傳，幾乎是每個良種培育的必經(jīng)過程。目前良種基因純化的過程仍然是主要采用具有親緣關(guān)系的個體多代近交的方法。但是該方法往往需要很長時間，多代近交純化選育的方法費(fèi)時費(fèi)力，而自交相當(dāng)于2～3 代近交，通過構(gòu)建自交家系可極大地加快基因純化的速度和不良基因淘汰的進(jìn)程。

如何獲得同一尾黑鯛的精子和卵子成為構(gòu)建自交系的關(guān)鍵之一。黑鯛具天然性逆轉(zhuǎn)習(xí)性，屬雄性先熟型雌雄同體，前2年為雄性，之后部分轉(zhuǎn)雌，因此，采用先獲得精子進(jìn)行長期保存、性逆轉(zhuǎn)后再獲得卵子的方式可以獲得同一尾魚的精子和卵子，使得黑鯛自交系的建立成為可能。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用魚為江蘇省海洋水產(chǎn)研究所繁育的黑鯛。

2.試驗(yàn)過程

2022 年在黑鯛繁殖期挑選體質(zhì)健壯、性腺發(fā)育良好的2齡黑鯛取精液并保存在液氮中，統(tǒng)計生物學(xué)數(shù)據(jù)并打上動物芯片。

2023年4月在黑鯛繁殖期挑選出有動物芯片且轉(zhuǎn)雌的魚，每尾各放1個塑料筐中(暫時存放)。根據(jù)轉(zhuǎn)雌魚的芯片編號找到其對應(yīng)的冷凍精子，鏡檢精子活力，用活力好的精子進(jìn)行人工授精。將受精卵放入孵化桶中進(jìn)行孵化。

3.養(yǎng)殖試驗(yàn)

受精1小時后，利用分卵裝置將建立的黑鯛自交家系進(jìn)行分卵，去除死卵及污物。受精12 小時后，取樣、觀察受精卵發(fā)育情況，計數(shù)每組自交家系的數(shù)量以及成活受精卵量，然后根據(jù)每組成活受精卵的數(shù)量，將數(shù)量少的組布卵在50～100升白桶中進(jìn)行孵化和養(yǎng)殖，數(shù)量多的組直接布卵在室內(nèi)水泥池中，孵化水溫在20～22℃。布卵前水位在30～40 厘米，布卵后每天加注10～20 厘米水，注意控制水溫差在2℃以內(nèi)。孵化期間采用氣石進(jìn)行微充氣。

在初孵仔魚開口前開始少量投喂輪蟲，輪蟲密度為5～10 個/毫升，并向養(yǎng)殖水體中加入小球藻，保持良好水色。待仔魚開口后，根據(jù)輪蟲消耗量逐步增加輪蟲投喂量。大約第5天開始少量換水，換水量約為20%。換水時，前期魚苗體形較小，需要緩慢排水，避免魚苗損傷，并用40～60 目網(wǎng)片阻隔，以防止逃魚。前期進(jìn)水時也要注意緩慢進(jìn)水，避免水流沖擊過大，進(jìn)水經(jīng)200目以上網(wǎng)袋過濾后入池。隨著投喂量增加以及溫度的上升，換水量逐步增加，日換水1～2次。

經(jīng)過15 天左右的養(yǎng)殖，由于部分白桶中魚苗數(shù)量過多，要將其進(jìn)行分苗處理。此時魚苗較小，操作需要格外小心，盡量減少對魚苗的傷害。養(yǎng)殖30 天左右，將白桶內(nèi)的自交家系根據(jù)數(shù)量情況，數(shù)量較多者轉(zhuǎn)移至水泥池進(jìn)行養(yǎng)殖，數(shù)量較少者放置在室內(nèi)的網(wǎng)箱中進(jìn)行養(yǎng)殖。操作過程全程帶水，避免傷苗。此后加大各個水泥池?fù)Q水量，每天2次。

養(yǎng)殖45 天左右開始馴化魚苗攝食顆粒飼料，減少輪蟲投喂量。經(jīng)過5～7 天馴化，完全停止輪蟲投喂，顆粒料投喂每天3次，每次投喂結(jié)束及時將未吃完的顆粒料撈出，以減少對水體的污染。

在室內(nèi)養(yǎng)殖至7月后，將數(shù)量較多的4個家系放入室外網(wǎng)箱，每個網(wǎng)箱1 000尾，進(jìn)行養(yǎng)殖。將此4 個家系中剩余的魚放至室外1～4 號土池中進(jìn)行養(yǎng)殖。室外土池中安裝增氧機(jī)，投喂顆粒飼料，根據(jù)水質(zhì)情況及時加水、換水。

二、結(jié)果

經(jīng)過一段時間的養(yǎng)殖，共獲得15 個黑鯛自交家系，數(shù)量在100～10 000 尾。黑鯛自交家系長勢良好，部分黑鯛家系7 月(3 月齡)生物學(xué)數(shù)據(jù)見表1。

表1 黑鯛自交家系3月齡生物學(xué)數(shù)據(jù)

三、分析與討論

自交對養(yǎng)殖遺傳群體改良具有明顯的積極作用，主要包括兩個方面：一是通過改變基因組合的頻率，選擇理想的基因型，或加快不理想基因型魚的淘汰速度；二是使群體分化，從而得以培育出不同的純系，為經(jīng)濟(jì)品種雜交提供最大化的雜交種優(yōu)勢。

目前，黑鯛自交家系魚長勢良好。黑鯛自交家系的突破不僅為其他先雄后雌經(jīng)濟(jì)魚遺傳改良研究提供新的技術(shù)參考，也使采用自交培育黑鯛新品種成為可能。黑鯛自交家系的建立有助于黑鯛種質(zhì)資源保護(hù)，縮短育種進(jìn)程，為其種質(zhì)改良、培育新品種提供理論依據(jù)，同時也可為性狀遺傳分析和構(gòu)建遺傳圖譜提供材料。