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    紅芽大戟的保育研究△

    2022-11-27 17:10:56劉寒繆劍華李林軒全昌乾郭曉云韋坤華
    中國現(xiàn)代中藥 2022年3期
    關(guān)鍵詞:大戟藥用植物吲哚

    劉寒,繆劍華,李林軒,全昌乾,郭曉云,韋坤華

    廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西壯族自治區(qū)中藥資源智慧創(chuàng)制工程研究中心,廣西 南寧 530023

    藥用植物保育學(xué)是一門以保護(hù)生物學(xué)為基礎(chǔ),研究藥用植物物種保存和環(huán)境脅迫條件下藥效物質(zhì)變化的機(jī)制,探索生物多樣性保護(hù)與藥效形成的原理和方法,制定保育策略,實(shí)現(xiàn)資源可持續(xù)利用的學(xué)科[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì),中國每年的中藥材消費(fèi)量超過40 萬t,其中大部分源于野生資源[2],這導(dǎo)致當(dāng)前中藥材產(chǎn)業(yè)發(fā)展受到2 個因素制約,一是由于過度開發(fā)中藥材野生資源至逐漸枯竭造成的可持續(xù)發(fā)展問題[3];二是為解決中藥材供不應(yīng)求開展的大規(guī)模不規(guī)范種植造成的中藥質(zhì)量下降問題。中藥材質(zhì)量評價(jià)包括活性化合物、協(xié)同成分、無效成分、有毒成分、農(nóng)藥殘留、灰分和含水量等指標(biāo)的測定。這些指標(biāo)受種質(zhì)資源、摻假、生態(tài)環(huán)境、耕種方式、收獲時間、炮制加工方法、儲存條件和其他諸多因素影響,導(dǎo)致中藥材質(zhì)量難以把控[4]。本文針對紅芽大戟野生資源稀缺的現(xiàn)狀,針對以上2 個方面制定紅芽大戟保育策略方針。

    紅芽大戟Knoxia corymbosaWilld.為茜草科紅芽大戟屬多年生直立草本植物[5],藥用部位為地下塊根,是我國一級保護(hù)野生中藥材,全國封禁產(chǎn)區(qū)[6]。紅芽大戟始載于宋代《小兒藥證直訣》,主治胸腹積水、痰飲喘滿、水腫腹脹、二便不利、癰腫瘡毒等,具有瀉水、解毒、散結(jié)、抗菌的功效[7]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),其對金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌有較強(qiáng)的抑制作用[8?9]。紅芽大戟主要分布于印度、中南半島各國、馬來半島各國和澳大利亞,我國主產(chǎn)區(qū)位于臺灣、廣東、香港、海南、廣西等地的低海拔曠野草叢中[10?11]。自然狀態(tài)下,紅芽大戟種子胚發(fā)育不完全、萌發(fā)率極低,野生狀態(tài)自我更新困難;此外,濫采亂挖致其種群瀕危。因此,了解紅芽大戟資源現(xiàn)狀、掌握其生長發(fā)育規(guī)律并加強(qiáng)保育研究,對促進(jìn)其產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展有著重要作用。

    1 資源現(xiàn)狀

    由于連年采挖和大片荒坡被開墾,紅芽大戟野生生境遭到嚴(yán)重破壞[11]。其在自然界中主要繁殖方式為種子繁殖,由于種胚大多發(fā)育不良導(dǎo)致其繁殖困難,自然散落的種子發(fā)芽率不到1%,常規(guī)方法貯藏1 年以上的種子將喪失活力。紅芽大戟由20 世紀(jì)60—70 年代年產(chǎn)量3.5 萬kg 下降至年產(chǎn)量不足5000 kg。近年來,其主產(chǎn)區(qū)廣西、廣東的野生資源枯竭,市場價(jià)格持續(xù)走高[12]。紅芽大戟相關(guān)研究仍處于初級階段。雖然,我國20 世紀(jì)80 年代后期已初步開展其人工栽培研究,但因種苗等問題未取得突破性進(jìn)展,其資源瀕危問題依舊嚴(yán)重。

    2 遷地保育

    2.1 引種馴化

    紅芽大戟在我國垂直分布的上限隨分布區(qū)由東往西逐漸升高。作為喜光植物,其適宜在低蔭蔽度下生長,但最適蔭蔽度又隨水分供應(yīng)情況和光照條件而改變。紅芽大戟為中生植物,忌積水、不耐旱,故在雨季要注意排水、在旱季要注意灌溉,其生長高峰期與年降雨量高峰期正好吻合;生長地土壤主要是由花崗巖發(fā)育的酸性磚紅壤和紅壤[13]。分布區(qū)氣候特點(diǎn)為干濕季明顯,全年日照時數(shù)為1700~2000 h,無霜期250 d 以上,年平均氣溫>14 ℃,最冷月平均氣溫>7.5 ℃,多年極端最低溫平均值>-5 ℃,降雨量1200~2000 mm,年平均相對濕度77%~83%;分布區(qū)的主要地帶性植被類型為熱帶、亞熱帶常綠闊葉林,部分地區(qū)演變?yōu)椴萜耓14]。

    紅芽大戟花排成頂生密集的半球形聚傘花序,花小,長4~5 mm,直徑約2 mm,紫紅色、淡紫色到白色;花冠管狀漏斗形,頂端4 裂,雄蕊4 枚,與花冠裂片互生,生于花冠管中部,雌蕊的柱頭2裂,子房下位,2 室,每室1 胚珠;果實(shí)小,為蒴果,萼片宿存,成熟時易裂成兩半,各含1 粒種子,種子具胚乳[5]。

    紅芽大戟于3 月中下旬播種,4 月上中旬出苗。休眠塊根一般在3月中下旬至4月初萌芽出土。5—7月為植株生長期,其中6月生長較為迅速,1年生植株花期為7—9 月,果期8—10 月,2 年生及以上植株花期5—8 月,果期7—9 月。地上植株10—11 月枯萎,根部進(jìn)入休眠狀態(tài)。整個生長期為8~9 個月[14]。傅兵等[15]發(fā)現(xiàn),不同的經(jīng)緯度、土壤、坡度、坡向和海拔高度等都會影響紅芽大戟的物候期。

    2.2 種苗繁育

    紅芽大戟主要有3 種繁育方式,分別為種子繁殖、營養(yǎng)繁殖和組培繁殖。

    2.2.1 種子繁殖 紅芽大戟的種子細(xì)小,長約1.67 mm,直徑約0.87 mm,千粒質(zhì)量約0.43 g[16]。湯麗云等[8]發(fā)現(xiàn),紅芽大戟存在花柱異長狀況,長花柱型花較短花柱型花結(jié)實(shí)率和出苗率更高,繁殖優(yōu)勢更強(qiáng);以外源赤霉素(GA3)浸種可促進(jìn)種子胚發(fā)育完全;以0.002 5% GA3浸種處理長花柱型花結(jié)的種子、0.005% GA3處理短花柱型花結(jié)的種子,可將紅芽大戟種子萌發(fā)率分別提升70.2%和64.1%。

    2.2.2 營養(yǎng)繁殖 陳芳清等[16]曾利用其根莖進(jìn)行繁殖,雖然獲得成功,但由于根莖的分蘗能力很低,根的長度小,致使繁殖成功率和藥材收獲率均較低[17]。湯麗云等[18]在營養(yǎng)繁殖研究過程中,每年在6 月初至中旬剪枝1 次,1 周后位于土中或土上原植株基部的節(jié)可萌發(fā)出腋芽,進(jìn)而形成分枝繼續(xù)長出葉子;7月中旬可以再剪枝1次;另外,據(jù)觀察,如果注意水分供給,紅芽大戟在秋季可由地下貯藏根重新萌出新苗,至9 月中旬可以剪枝扦插,因此扦插繁殖可以比種子繁殖速度提高4~5 倍。有研究顯示,在春季分根繁殖中,每塊貯藏根均可以長成1個植株,因此經(jīng)過分根后,繁殖速度比種子繁殖速度提高了2~3 倍[14]。研究顯示,扦插繁殖中使用吲哚丁酸處理的最適質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.002 5%,最適處理時間為0.5 h。使用吲哚丁酸處理插枝比吲哚乙酸處理生根效果更好;莖上部作材料比中段莖的生根效果更好;貯藏根分根繁殖中使用吲哚丁酸處理的最適質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.005%,最適處理時間為0.5 h,經(jīng)適當(dāng)濃度、適當(dāng)時間的吲哚丁酸處理,扦插繁殖是加快紅芽大戟藥材生產(chǎn)的可行途徑[12]。

    2.2.3 組培繁殖 陳芳清等[19]發(fā)現(xiàn),在莖、葉、芽3 種外植體中,芽的出愈率最高,愈傷組織褐化率低,生長最好,且易被誘導(dǎo)出不定芽,是較理想的快速繁殖材料;而莖和葉的愈傷組織褐化率高,難以誘導(dǎo)出不定芽;較適宜的誘導(dǎo)愈傷組織的激素組合是2.0 mg·L-1的6?芐氨基腺嘌呤(6?BA)和0.4 mg·L-1的萘乙酸(NAA),誘導(dǎo)不定芽的適宜激素組合為5.0 mg·L-16?BA+0.05 mg·L-1的NAA,根的誘導(dǎo)則在1/2 MS+0.2 mg·L-1NAA+1.5%蔗糖+0.8%瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行[16]。在叢生芽快繁培養(yǎng)基正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),MS+1.5 mg·L-16?BA+0.2 mg·L-1吲哚乙酸+0.2 mg·L-1NAA+0.3 g·L-1活性炭適宜促進(jìn)叢生芽繼代增殖;1/2 MS+0.75 mg·L-1吲哚丁酸+0.2 mg·L-1多效唑(PP333)適于誘導(dǎo)生根獲得再生植株;培育的生根苗移栽于泥炭?珍珠巖(1∶1)的混合基質(zhì)上成活率可高達(dá)92%。

    2.3 種質(zhì)資源保存

    紅芽大戟老熟種子發(fā)芽率達(dá)40%以上,種子干燥貯藏1~6 月對其發(fā)芽率和出苗率影響不大,貯藏1年以后有所降低。采用常規(guī)方法貯藏1年以上的種子基本喪失生命力[16]。

    3 回歸保育

    3.1 回歸保育的適宜區(qū)域

    適合紅芽大戟回歸引種區(qū)域?yàn)闊釒?、亞熱帶的常綠闊葉林,還應(yīng)滿足遠(yuǎn)離城市、公路,人跡罕至,生長環(huán)境不易被破壞;區(qū)域內(nèi)有或曾有野生紅芽大戟分布,生態(tài)環(huán)境與紅芽大戟的適生環(huán)境相似;生態(tài)環(huán)境良好,附近沒有污染源;植被覆蓋良好,以適合紅芽大戟生長的森林類型為佳,物種較完善,具有一定數(shù)量的紅芽大戟伴生植物等條件。

    3.2 回歸保育實(shí)踐

    3.2.1 選地與整地 紅芽大戟為喜光植物,適宜于低蔭蔽度下生長;忌積水又不耐旱,適宜方便排灌水的保育基地;土壤盡量為酸性的紅壤和磚紅砂質(zhì)壤,有機(jī)質(zhì)較高,干濕分明,盡量模擬其在自然條件下的生長環(huán)境,合理及時補(bǔ)充磷鉀肥。

    3.2.2 種子育苗 于9—10 月收取成熟飽滿的種子陰干,貯藏至翌年春季播種,播時先用45 ℃溫水浸種5~6 h,撈出晾干水分后,均勻撒播,覆土0.2~0.3 cm,蓋草,澆水保濕,約20 d 發(fā)芽出土,此時揭去蓋草。播種量為5 g·m-2。

    3.2.3 扦插育苗 以露出土面具5~6對葉以上健壯的未開花植株作材料,每2~3節(jié)剪成1段,作為扦插材料。初夏及秋季均可進(jìn)行。扦插適宜溫度為20~25 ℃,用吲哚丁酸、吲哚乙酸處理后埋入砂盆或砂壤盆中,入土1~2節(jié),每片葉剪去1/3,蔭蔽度30%,每天灑水1次。扦插后第52天從土中取出移栽[20]。

    3.2.4 組培育苗 選20~30 cm 的健壯株苗,取莖尖部位作為外植體帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。外植體的消毒:將外植體置于不同燒杯中,流水沖洗4 min,莖尖切成3~4 cm 小段,放入玻璃瓶中,在超凈工作臺上,把預(yù)處理好的外植體分別放入帶蓋容器當(dāng)中,先用次氯酸鈉溶液浸泡消毒3~4 min,用蒸餾水洗3~4 次,倒入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.12%的升汞溶液浸泡3~4 min,浸泡后用蒸餾水洗4~5 次,最后將外植體取出放置于無菌濾紙上,吸干水分,放入接種碟中待用。外植體的接種:切去外植體兩端及周圍褪色壞死的組織,切成約2~3 cm 的小段或1.0 cm×1.0 cm 的小塊,按其生長極性插入誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中[12]。生根培養(yǎng):接種的外植體,置于光照培養(yǎng)室中,光照強(qiáng)度2000~2200 lx,光照時間12 h·d-1,培養(yǎng)溫度25~28 ℃,培養(yǎng)6 d后將獲得的無菌外植體進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng),無菌外植體接種于誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中,當(dāng)外植體誘導(dǎo)出新芽長至2~3 cm 時,去掉底部的愈傷組織接種于繼代增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。幾次增殖培養(yǎng)后,選取健壯的繼代苗切成單節(jié)接種于生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng),生根率可達(dá)70%[21?22]。

    3.2.5 人工管理 當(dāng)種子播種后小苗高約6 cm,塊根繁殖后種后苗高10~12 cm 時,選陰天起苗,以8 cm×14 cm 的行株距開行定植,澆足定根水。在苗期必須注意澆水,以保證成活,遇干旱天氣要及時灌溉或澆水,15 d左右進(jìn)行1次苗期除草。

    追肥培土:苗高15 cm 時施第1 次肥,以后每隔40 d 施1 次,整個生長期共施3~4 次,肥料用腐熟農(nóng)家肥30 t·hm-2或用腐熟花生麩或桐麩稀水肥22.5 t·hm-2。結(jié)合施肥適當(dāng)培土,以防植株倒伏。冬季植株枯萎后將地上枯株剪除,清理田園,用火燒土培土[15]。

    病蟲防治:主要病害有根腐病,此病致使植株根部逐漸腐爛,地上部分變黃枯死,可用0.5%石灰水灌根防治。害蟲有黏蟲,主要危害嫩葉嫩莖,可用40%樂果1000倍液噴殺[21]。

    3.2.6 冬季管理 砂藏越冬比露地越冬更有利于紅芽大戟度過冬季的休眠期,可以降低腐爛率,其中以根莖砂藏越冬后的紅芽大戟生長最好,這可能與愈傷組織的誘導(dǎo)形成有關(guān)[23]。

    4 結(jié)語

    藥用植物保育學(xué)通過野外普查發(fā)現(xiàn)新的藥用植物資源,利用這些資源培育新的藥用植物,以藥用植物中的化學(xué)成分開發(fā)新藥品(保健品或其他生活用品),使藥用植物資源利用具有實(shí)際意義,可對野生藥用植物進(jìn)行馴化、繁殖、種植與加工,生產(chǎn)出大量可利用的藥材,滿足人類的需要。人工生產(chǎn)的銀杏[24]、白及[25?26]已能滿足臨床的需求,不再受制于野生資源產(chǎn)量,保障了野生資源的自然更新。人類對野生藥用植物的引種栽培,客觀上擴(kuò)大了物種的生存空間,傳播了藥用植物的遺傳基因,擴(kuò)大了藥用植物的種群規(guī)模[27]。因此,對野生藥用植物的合理開發(fā)利用是野生藥用植物保育的目標(biāo)。建立野生藥用植物繁殖、種植、加工技術(shù)體系,實(shí)現(xiàn)藥材的合理利用,有利于保護(hù)野生藥用植物資源。此外,在藥用植物保育過程中,監(jiān)測野生藥用植物資源信息與市場信息、分析藥材市場未來發(fā)展趨勢、根據(jù)藥材具體需求制訂合理規(guī)劃是防止藥材過?;驘o藥可用的根本途徑[28]。

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