不同生長階段歐李葉片酚類物質(zhì)含量及其抗氧化性

邵郅勝，楊 波，朱 成，李東方，郭金麗

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝與植物保護(hù)學(xué)院，呼和浩特 010018)

歐李(Cerasushumilis)為薔薇科櫻桃屬矮生灌木果樹，是中國特有的野生果樹資源，主要分布于中國山西、內(nèi)蒙古、遼寧、河北、河南等省區(qū)。歐李具有極強(qiáng)的抗旱、抗寒、耐瘠薄能力，綜合適應(yīng)性強(qiáng)。歐李果實(shí)酸甜適口，具有獨(dú)特的香氣和風(fēng)味；果實(shí)營養(yǎng)種類及含量豐富，尤其是鈣、鐵含量極高，因此享有“鈣果”和“綠色天然鈣粉”的美稱[1]。歐李作為第三代水果，其果實(shí)可鮮食，亦可深加工成各類產(chǎn)品；種仁是中藥郁李仁的主要成份[2]，果皮可用于化妝品、保健品，葉可開發(fā)為茶類飲品等[3]。可見歐李具有獨(dú)特的風(fēng)味、廣泛的用途、顯著的保健食療價(jià)值，開發(fā)利用前景廣闊。

酚類物質(zhì)是廣泛存在于植物組織中的一種重要次生代謝物質(zhì)，與植物的品質(zhì)風(fēng)味、色澤等特質(zhì)息息相關(guān)，對(duì)植物的生長發(fā)育、基因表達(dá)、水果褐變、生物固氮[4-5]等也有影響。酚類物質(zhì)更是重要的天然抗氧化物質(zhì)，可以清除機(jī)體內(nèi)自由基、供氫質(zhì)子或電子、螯合金屬離子，有抗炎、延緩衰老[6]的作用，亦可軟化血管、促進(jìn)消化、降血脂、利尿、增加免疫力和防止動(dòng)脈硬化和血栓的形成，還具有抑制細(xì)菌與癌細(xì)胞生長的作用[7-8]，更有研究發(fā)現(xiàn)其在抑制人體肝癌、結(jié)腸癌及胃癌細(xì)胞增殖方面有顯著效果[9]。

歐李富含酚類物質(zhì)，前人已對(duì)歐李酚類物質(zhì)的種類及含量進(jìn)行了初步的研究。歐李作為高酚植物，其總酚、總黃酮、黃酮醇含量高于黑莓、藍(lán)莓等高酚類水果，其原花青素和花青素含量也高于蔓越莓、荔枝等?，F(xiàn)有研究結(jié)果初步顯示歐李酚類物質(zhì)對(duì)DPPH自由基(DPPH·)、ABTS自由基(ABTS·)、OH自由基(·OH)均有良好的清除能力，還原力更是和維生素C(Vc)效果相當(dāng)[10]；更有研究發(fā)現(xiàn)漿果類植物的葉片中酚類化合物含量明顯高于果實(shí)，且具有更高的抗氧化活性[11-12]。而目前對(duì)歐李酚類物質(zhì)及抗氧化活性的研究主要集中于果實(shí)，對(duì)葉片酚類物質(zhì)的探究鮮有報(bào)道，因此進(jìn)行歐李葉片酚類物質(zhì)及其抗氧化活性的相關(guān)研究極有必要。目前，本研究課題組已對(duì)歐李果實(shí)酚類物質(zhì)含量、貯藏過程中酚類物質(zhì)含量變化、不同資源果實(shí)酚類物質(zhì)含量比較等進(jìn)行了探究，本試驗(yàn)將對(duì)不同生長階段的歐李葉片酚類物質(zhì)及其抗氧化活性進(jìn)行比較，以期了解歐李葉片酚類物質(zhì)含量及其抗氧化能力在生育期內(nèi)的變化規(guī)律，為歐李的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料及樣品采集

本試驗(yàn)以內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)歐李科研基地的4年生‘蒙原’歐李作為試驗(yàn)材料。選擇生長正常無病蟲害的歐李植株，分別于果實(shí)硬核期(采樣2次，硬核Ⅰ期、硬核Ⅱ期)、著色膨大期、采后期以及葉片變色期(以上5個(gè)時(shí)期分別以T1、T2、T3、T4、T5表示)進(jìn)行葉片采集。試驗(yàn)共選取60株進(jìn)行標(biāo)記，從每株的東南西北四個(gè)方向各選取1個(gè)枝條進(jìn)行標(biāo)記，20株為1次重復(fù)，重復(fù)3次。每次采樣時(shí)分別于枝條的上、中、下部各采集1片正常葉片組成樣本，采集的葉片樣品清洗干凈，于60 ℃條件下烘干，粉碎后過60目篩后進(jìn)行試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定。

1.2 歐李葉片酚類物質(zhì)提取

歐李葉片樣品粉碎過篩后稱取1 g放入研缽，以0.1%鹽酸的40%乙醇水溶液做提取液，加25 mL提取液磨碎，在25 ℃下用超聲處理提取1 h，過濾并定容到50 mL量瓶中，然后以5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，上清液即為酚類物質(zhì)提取液，儲(chǔ)存在-20 ℃，用于測(cè)定酚類物質(zhì)含量和抗氧化活性。

1.3 歐李葉片酚類物質(zhì)含量的測(cè)定

歐李葉片中多酚類物質(zhì)總酚、總黃酮、原花青素、花青素、黃酮醇含量的測(cè)定均使用紫外分光光度法測(cè)定，參照莫愁[13]的方法，稍加修改，設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.3.1 總酚含量取0.1 mL提取液，加入0.2 mL FC試劑，于10 mL 量瓶中混勻，室溫下靜置3 min后，加入1.0 mL 的Na2CO3溶液(10%)，蒸餾水定容至 10 mL并搖勻，置于35 ℃恒溫水浴中反應(yīng)1 h，以蒸餾水代替樣品做空白，在760 nm 波長下測(cè)定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線以沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制，分別精密吸取 1.004 3 mg/mL 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液30、60、90、120、150、180 μL于10 mL量瓶中，制成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，分別測(cè)定吸光值，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=49.786x+0.0054，R2=0.9987。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總酚含量，以每g鮮樣中含有的沒食子酸mg數(shù)計(jì)。

1.3.2 總黃酮含量取0.3 mL提取液、0.3 mL NaNO2溶液(5%)、0.3 mL Al(NO3)3溶液(10%)于10 mL 量瓶中，搖勻室溫下靜置6 min ，加入4 mL NaOH 溶液(1 mol/L)以50%的乙醇定容至10 mL，混勻靜置10 min。以蒸餾水代替樣品做空白，在510 nm 處測(cè)定吸光值。標(biāo)準(zhǔn)曲線以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制，分別精密吸取1.048 mg/mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液100、120、 150、180、200和250 μL于10 mL 量瓶中，制成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，測(cè)定其吸光值，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=1.584x-0.0026，R2=0.9981。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量，以每g鮮樣中含有的蘆丁mg數(shù)表示。

1.3.3 原花青素含量取0.5 mL提取液 ，加入3.0 mL香草醛甲醇液(0.04 g/mL)混合均勻，加入1.5 mL 濃鹽酸混勻，于30 ℃水浴20 min，在500 nm 波長處測(cè)吸光度值，以蒸餾水代替樣品做空白。標(biāo)準(zhǔn)曲線以兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制，精密吸取0.3300 mg/mL兒茶素標(biāo)準(zhǔn)液0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mL 于試管中，蒸餾水定容至0.5 mL，配制成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，測(cè)定其吸光值，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=1.5591x+0.0561，R2=0.9920。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算原花青素含量，結(jié)果以每g鮮樣中含有的兒茶素mg數(shù)表示。

1.3.4 花青素含量用pH示差法測(cè)定。取兩支試管分別加入2.0 mL 提取液，一支中加入3.0 mL pH 1.0的氯化鉀緩沖液，另一支中加入3.0 mL pH 4.5 的醋酸鈉緩沖液?；靹蚝箪o置 15 min。以蒸餾水做試劑空白，分別在520和700 nm 波長下測(cè)量吸光度A520和A700，通過公式計(jì)算最終吸光度(A)和總花青素含量(CGE)，總花青素含量結(jié)果以每g鮮樣中矢車菊-3-葡萄糖苷mg數(shù)表示。

A=(A520-A700)pH1.0- (A520-A700)pH4.5

CGE(mg/g)=A×Mw×DF×V×1000/ε/M

式中：Mw為矢車菊素-3-葡萄糖苷相對(duì)分子量(449)，DF為稀釋倍數(shù)，ε為摩爾吸光系數(shù)(29 600)，V為提取液總體積，M為歐李果實(shí)取樣質(zhì)量。

1.3.5 黃酮醇含量取2 mL提取液，加入3.5 mL鹽酸(2%)，測(cè)定其在 360 nm 波長處的吸光度，以蒸餾水代替樣品做空白。標(biāo)準(zhǔn)曲線以槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制，依次精密吸取0.980 0 mg/mL槲皮素標(biāo)準(zhǔn)液10、20、30、40和50 μL于試管中，蒸餾水定容至2 mL，配制成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，測(cè)定吸光值，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=53.878x+0.0544，R2=0.9932，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃酮醇含量。

1.4 歐李葉片酚類物質(zhì)抗氧化活性的測(cè)定

歐李葉片中多酚類物質(zhì)分離純化參考宋丹丹[14]的方法，抗氧化活性的測(cè)定參照李歐[15]的方法，稍加修改。

1.4.1 總抗氧化活性取1 mL提取液、6 mL FRAP工作液、0.6 mL蒸餾水，混合搖勻后于37 ℃水浴20 min。在593 nm處，用無水乙醇調(diào)零，測(cè)吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線以FeSO4溶液制作，用無水乙醇配制FeSO4溶液(濃度梯度200～6 000 μg/mL)，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光值，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以無水乙醇代替樣品做空白，根據(jù)吸光值，求得相應(yīng)Fe2+當(dāng)量定義FRAP值。

FRAP=CVN/1000M

式中：C為樣品減去空白吸光度代入Fe2+當(dāng)量(μmol/L)，V為待測(cè)液總體積( L)，N為樣品稀釋倍數(shù)，M為樣品質(zhì)量(g)。

1.4.2 鐵離子還原力取0.2 mL提取液、5 mL磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L，pH7.0)、5 mL鐵氰化鉀溶液(30.37 mmo/L)混合搖勻，于50 ℃恒溫水浴鍋中保溫20 min，加入5 mL三氯醋酸溶液(0.61 mol/L)以終止反應(yīng)。取5 mL上清液，加5 mL蒸餾水，搖勻后再加入1 mL FeCl3溶液(3.70 mmol/L)，反應(yīng)15 min，以蒸餾水代替提取液作空白并調(diào)零，在700 nm波長處測(cè)定吸光值，計(jì)算酚類物質(zhì)提取液還原力。

還原力=(A樣-A空)/A樣

1.4.3 DPPH·清除率取40 μL提取液、0.4 mL DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯胼)甲醇溶液(0.5 mmol/L)，混合搖勻后加甲醇定容至5 mL，在黑暗條件下反應(yīng)45 min。甲醇代替提取液作對(duì)照，以蒸餾水調(diào)零，在517 nm波長處測(cè)吸光值，計(jì)算酚類物質(zhì)提取液對(duì)DPPH·的清除率(%)。

DPPH·的清除率(%)=(A對(duì)照-A樣)/A對(duì)照×100%

1.4.4 ·OH清除率取0.4 mL的提取液、1 mL FeSO4(9 mmol/L)混合搖勻，再加入1 mL水楊酸溶液(9 mmol/L)、2 mL H2O2(8.8 mmol/L)和4.6 mL蒸餾水，混合搖勻后于37 ℃恒溫水浴鍋中保溫55 min，反應(yīng)結(jié)束后，取出冷卻。蒸餾水代替提取液做空白組，蒸餾水代替水楊酸作為對(duì)照組，用蒸餾水調(diào)零，在510 nm處測(cè)定吸光值，計(jì)算酚類物質(zhì)提取液對(duì)·OH的清除率(%)。

·OH的清除率(%)=[A空白- (A樣-A對(duì)照)]/A空白×100%

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

使用Excel 2010處理和分析數(shù)據(jù)，使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行顯著性差異分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長階段歐李葉片總酚含量及其抗氧化活性

在整個(gè)生長期中，歐李葉片的總酚含量呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，并在果實(shí)著色膨大期(T3)達(dá)到最大值(14.54 mg/g)，且各時(shí)期含量之間均差異顯著(圖1，A)。同時(shí)，歐李葉片總酚的總抗氧化活性、鐵離子還原力、·OH清除率與總酚含量的變化趨勢(shì)相同，均表現(xiàn)為先升高后降低，并在果實(shí)著色膨大期達(dá)到最大值(圖1)。其中，歐李葉片總酚的總抗氧化活性T1期最低，并與其他4個(gè)時(shí)期有顯著差異，而后4個(gè)時(shí)期基本維持穩(wěn)定；葉片總酚的鐵離子還原力在T3期最高，且與其余各時(shí)期均有顯著差異；葉片總酚的·OH清除率同樣在T3時(shí)期達(dá)到最高值，且顯著高于T1、T2、T5時(shí)期，而其余時(shí)期間無顯著差異(圖1，B、C、E)。葉片總酚的DPPH·清除率隨生長期的進(jìn)程而逐漸升高，在前3個(gè)時(shí)期均顯著較低，并基本保持穩(wěn)定，從果實(shí)采后時(shí)期(T4)開始顯著增加，在葉片變色期(T5)達(dá)到最高(44.4%)，且與其他時(shí)期均有顯著差異(圖1，D)。可見，在歐李生長期中，歐李葉片的總酚含量在果實(shí)著色期時(shí)最高，相應(yīng)的總酚總抗氧化活性、鐵離子還原力、·OH清除率也在該時(shí)期最高，而其DPPH·清除率則在葉片變色期達(dá)到最高。

T1、T2、T3、T4、T5分別代表果實(shí)硬核Ⅰ期、硬核Ⅱ期、著色膨大期、采后期以及葉片變色期，下同

2.2 不同生長階段歐李葉片總黃酮含量及其抗氧化活性

歐李葉片的總黃酮含量隨著生長期先升高后降低，同樣在果實(shí)著色膨大期(T3)達(dá)到最大值(11.84 mg/g)，顯著高于T4以外的其余時(shí)期，增幅在8.09%～50.19%之間(圖2，A)。同時(shí)，葉片總黃酮的總抗氧化活性、鐵離子還原力、DPPH·清除率、·OH清除率隨生長期的變化趨勢(shì)與總黃酮含量相同，均呈現(xiàn)為先升高后降低，且均在著色膨大期達(dá)到最大值(圖2)。其中，歐李果實(shí)著色膨大期葉片總黃酮的總抗氧化活性、鐵離子還原力、·OH清除率均與其他各個(gè)時(shí)期差異顯著(圖2，B、C、E)，而其DPPH·清除率僅與果實(shí)硬核期差異顯著(圖2，D)。由此可見，歐李葉片的總黃酮含量及其總抗氧化活性、鐵離子還原力、·OH清除率、DPPH·清除率隨生長期的變化趨勢(shì)相同，均在果實(shí)著色膨大期達(dá)到最高，各指標(biāo)間存在非常密切關(guān)系。

圖2 不同生長階段歐李葉片總黃酮含量及其抗氧化活性

2.3 不同生長階段歐李葉片原花青素含量及其抗氧化活性

歐李葉片的原花青素含量在生長期內(nèi)呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，仍在果實(shí)著色膨大期(T3)達(dá)到最大值(4.32 mg/g)，并顯著高于其他時(shí)期，增幅在8.08%～39.42%之間(圖3，A)。同時(shí)，葉片原花青素的鐵離子還原力、DPPH·清除率、·OH清除率與原花青素含量的變化趨勢(shì)相同，也均表現(xiàn)為先升高后降低，同樣在果實(shí)著色膨大期達(dá)到最大值(圖3)。其中T3時(shí)期的鐵離子還原力和·OH清除率與其余各時(shí)期之間均差異顯著(圖3，C、E)，而其DPPH·清除率與各時(shí)期之間無顯著差異(圖3，D)。另外，葉片原花青素的總抗氧化活性隨著生長期整體呈逐漸升高趨勢(shì)，但在前4個(gè)時(shí)期內(nèi)無顯著變化，直至T5期達(dá)到最高，且顯著高于T1時(shí)期(圖3，B)。可見，歐李葉片的原花青素含量及其鐵離子還原力、·OH清除率、DPPH·清除率變化趨勢(shì)相同，且在果實(shí)著色膨大期均不同程度地高于其他4時(shí)期，而其總抗氧化活性則表現(xiàn)為逐漸增加的趨勢(shì)。

圖3 不同生長階段歐李葉片原花青素含量及其抗氧化活性

2.4 不同生長階段歐李葉片花青素含量及其抗氧化活性

歐李葉片的花青素含量在生長期中呈先升高后降低的變化規(guī)律，并在果實(shí)著色膨大期(T3)達(dá)到最大值(0.35 mg/g)，顯著高于其他時(shí)期，增幅在30.25%～76.20%之間(圖4，A)。同時(shí)，葉片花青素的鐵離子還原力、DPPH·清除率、·OH清除率均表現(xiàn)出與花青素含量相同的先升高后降低的變化趨勢(shì)，并均在著色膨大期達(dá)到最大值(圖4)。其中，T3時(shí)期葉片花青素的鐵離子還原力與其余各時(shí)期間差異顯著(圖4，C)，其DPPH·清除率顯著高于T1、T2和T5時(shí)期(圖4，D)，其·OH清除率顯著高于T1時(shí)期(圖4，E)。另外，葉片花青素的總抗氧化活性整體基本呈升高趨勢(shì)，在T1時(shí)最低(0.27 μmol/g)，在T5時(shí)最高(3.55 μmol/g)，且各個(gè)時(shí)期之間均差異顯著(圖4，B)?？梢?，歐李葉片的花青素含量及其鐵離子還原力、DPPH·清除率、·OH清除率呈現(xiàn)出先增高后降低的相同變化趨勢(shì)，并在果實(shí)著色期均不同程度地高于其他時(shí)期；而其花青素的總抗氧化活性則逐漸升高，于葉片變色期達(dá)到最高值并與其余時(shí)期差異顯著。

圖4 不同生長階段歐李葉片花青素含量及其抗氧化活性

2.5 不同生長階段歐李葉片黃酮醇含量及其抗氧化活性

在歐李生長期中，葉片黃酮醇含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，在果實(shí)著色膨大期達(dá)到最大值(0.35 mg/g)，顯著高于其他各個(gè)時(shí)期，增幅在40.05%～85.35%之間(圖5，A)。同時(shí)，歐李葉片黃酮醇的總抗氧化活性、鐵離子還原力、·OH清除率與黃酮醇含量的變化趨勢(shì)相同，且均在果實(shí)著色膨大期(T3)達(dá)到最大值(圖5)。其中，T3時(shí)期葉片黃酮醇的總抗氧化活性和鐵離子還原力均顯著高于其他各個(gè)時(shí)期(圖5，B、C)，其·OH清除率顯著高于T1、T2和T5時(shí)期(圖5，E)。另外，歐李葉片黃酮醇的DPPH·清除率呈現(xiàn)出升-降-升的波動(dòng)變化規(guī)律，但仍在T3時(shí)達(dá)到最高值(18.8%)，并與果實(shí)硬核期差異顯著(圖5，D)?？梢?，歐李葉片黃酮醇含量及其總抗氧化活性、鐵離子還原力、·OH清除率、DPPH·清除率總體上均呈先升高后降低的規(guī)律，并均在果實(shí)著色期達(dá)到最高，且多與其他時(shí)期差異顯著。

圖5 不同生長階段歐李葉片黃酮醇含量及其抗氧化活性

2.6 歐李葉片酚類物質(zhì)含量及其抗氧化性比較

上述結(jié)果表明，歐李葉片多數(shù)酚類物質(zhì)含量及其抗氧化性均于果實(shí)著色膨大期達(dá)到最高值，說明歐李果實(shí)著色膨大期是其葉片酚類物質(zhì)含量積累高峰及抗氧化活性最高的時(shí)期。進(jìn)一步在果實(shí)著色膨大期比較歐李葉片各酚類物質(zhì)含量及其總抗氧化性，發(fā)現(xiàn)酚類物質(zhì)含量及其總抗氧化性呈現(xiàn)出相似的規(guī)律(圖6)。其中，葉片總酚含量及其總抗氧化性均為最高，分別為14.54 mg/g和9.83 μmol/g，并與其他各酚類物質(zhì)差異顯著；其次為總黃酮和原花青素含量(分別為11.84和4.32 mg/g)及其總抗氧化性(分別為8.52和4.92 μmol/g)；最低為黃酮醇和花青素含量(分別為0.35和0.35 mg/g)及其總抗氧化性(分別為3.32和1.09 μmol/g)。由此可知，歐李葉片各酚類物質(zhì)含量與其總抗氧化活性存在密切關(guān)系，總抗氧化活性隨著酚類物質(zhì)的含量而變化，含量越高抗氧化活性越強(qiáng)。

Ⅰ.總酚；Ⅱ.總黃酮；Ⅲ.原花青素；Ⅳ.花青素；Ⅴ.黃酮醇

3 討 論

許啟鵬研究發(fā)現(xiàn)，絢麗海棠在生長發(fā)育過程中，葉片的酚類物質(zhì)含量呈先上升后下降的變化趨勢(shì)，并推測(cè)這種變化與溫度相關(guān)[16]；張歡等[17]在杜梨上也發(fā)現(xiàn)了相同的規(guī)律，葉片酚類物質(zhì)在生長期內(nèi)存在先升高后降低的變化規(guī)律；在磨盤柿葉片上也有類似規(guī)律[18]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，‘蒙原’歐李葉片各酚類物質(zhì)含量隨著生長期整體呈現(xiàn)為先升高后降低，葉片總酚、總黃酮、原花青素、花青素、黃酮醇含量均從果實(shí)硬核期起呈上升趨勢(shì)，到果實(shí)膨大期各酚類物質(zhì)含量達(dá)到最高值，之后逐漸降低，經(jīng)歷果實(shí)采后期，于葉片變色期達(dá)到最低值，說明果實(shí)著色膨大期是歐李葉片酚類物質(zhì)含量的積累高峰時(shí)期，此期也是應(yīng)用葉片酚類物質(zhì)的最佳時(shí)期。同時(shí)，進(jìn)一步對(duì)歐李著色膨大期葉片各酚類物質(zhì)含量的比較發(fā)現(xiàn)，葉片中總酚含量最高，總黃酮和原花青素含量次之，黃酮醇和花青素含量最低；其中總酚含量最高為14.54 mg/g，是花青素含量的41倍，與李歐[15]在歐李果實(shí)中的研究結(jié)果相同。

周廣志等研究發(fā)現(xiàn)刺梨葉片的總抗氧化活性、鐵離子還原力、DPPH·清除率等抗氧化活性均顯示為成熟葉片>幼葉>老葉[19]；李曉英等[20]在藍(lán)莓中也發(fā)現(xiàn)了相同的規(guī)律。本試驗(yàn)研究結(jié)果與前人研究結(jié)論基本相同。歐李葉片總酚的總抗氧化活性、鐵離子還原力及·OH清除率均顯示出相同的規(guī)律，抗氧化能力從硬核期至著色膨大期呈上升趨勢(shì)，在著色膨大期達(dá)到最高點(diǎn)，隨后開始下降，經(jīng)歷果實(shí)采后期在葉片變色期降至最低。歐李葉片總黃酮的總抗氧化活性、鐵離子還原力、DPPH·清除率、·OH清除率均在果實(shí)著色期前呈上升趨勢(shì)，于著色膨大期達(dá)到最高值，在著色期后呈下降趨勢(shì)。歐李葉片原花青素和花青素的抗氧化活性變化規(guī)律總體相同，其鐵離子還原力、DPPH·清除率、·OH清除率呈先升高后降低的規(guī)律，在著色膨大期達(dá)到最大值；而總抗氧化活性整體呈上升趨勢(shì)，在葉片變色期達(dá)到最高。歐李葉片黃酮醇的總抗氧化活性、鐵離子還原力、·OH清除率均先升高后降低，并在著色膨大期達(dá)到最高值?？梢?，歐李葉片各酚類物質(zhì)在著色膨大期的抗氧化能力最高，而著色膨大期又以總酚的總抗氧化能力最強(qiáng)，總黃酮和原花青素次之，黃酮醇和花青素最低。綜合以上歐李葉片各酚類物質(zhì)含量與其抗氧化性的結(jié)果，各酚類物質(zhì)的抗氧化活性與其含量表現(xiàn)出相同的變化規(guī)律，抗氧化活性隨著酚類物質(zhì)含量的增加而增強(qiáng)，這與朱美蓉[21]關(guān)于野生刺葡萄的相關(guān)研究結(jié)果相同。

綜上所述，歐李葉片的各酚類物質(zhì)含量隨著生長期均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，均于著色膨大期達(dá)到最高；各酚類物質(zhì)的抗氧化性與其含量表現(xiàn)出相似的變化規(guī)律，基本均于著色膨大期達(dá)到最高。各酚類物質(zhì)的抗氧化活性隨著相應(yīng)酚類物質(zhì)含量的增加或降低而升高或降低，與酚類物質(zhì)含量呈現(xiàn)出密切的正相關(guān)關(guān)系。著色膨大期是歐李葉片酚類物質(zhì)含量積累高峰及其抗氧化力最高的時(shí)期，此期應(yīng)是應(yīng)用歐李葉片酚類物質(zhì)抗氧化性的適宜時(shí)期。