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    核酸內(nèi)切酶影響IBV復(fù)制的分子機(jī)制

    2022-11-25 17:02:50ZHAOJING,FENGDE-LAN,ZHAOYE
    關(guān)鍵詞:親本病毒感染抗病毒

    雞傳染性支氣管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起雞的一種急性、高度接觸性傳染病-雞傳染性支氣管炎(Avian infectious bronchitis,IB)。IBV nsp15 蛋白具有核酸內(nèi)切酶(EndoU)活性,EndoU 活性缺失可使IBV 復(fù)制出現(xiàn)缺陷,同時(shí)降低對(duì)雞的致病性,表明nsp15 蛋白是IBV 重要的毒力因子。但是nsp15 影響IBV 復(fù)制及其與宿主相互博弈的分子機(jī)制尚不清楚。

    近期發(fā)表于《Journal of Virology》的研究論文,對(duì)IBV nsp15 影響病毒復(fù)制的分子機(jī)制進(jìn)行了研究,并取得重要成果。細(xì)胞應(yīng)激顆粒(Stress granules,SGs)通過(guò)調(diào)節(jié)mRNA 翻譯和定位,以及整合細(xì)胞內(nèi)信號(hào)和抗病毒反應(yīng),在基因表達(dá)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,常被病毒作為調(diào)控細(xì)胞環(huán)境的靶標(biāo)。作者以QX 型IBV 流行株(SD 株)感染雞胚原代腎細(xì)胞(CEK)后,觀(guān)察細(xì)胞中SGs 產(chǎn)生情況,結(jié)果顯示僅在感染后12 h觀(guān)察到約5%感染細(xì)胞產(chǎn)生SGs,其他采樣點(diǎn)均未觀(guān)察到SGs 的產(chǎn)生,說(shuō)明IBV 感染并不誘導(dǎo)感染細(xì)胞產(chǎn)生SGs。進(jìn)一步作者以亞砷酸鹽(Ars)為陽(yáng)性刺激物誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生SGs,觀(guān)察IBV 感染對(duì)Ars 誘導(dǎo)產(chǎn)生的eIF2a 依賴(lài)的SGs 是否具有抑制作用。結(jié)果表明在A(yíng)rs處理后可誘導(dǎo)80%以上的CEK 細(xì)胞產(chǎn)生SGs,而在IBV 感染的細(xì)胞中,僅有約20%的細(xì)胞觀(guān)察到SGs,大部分IBV 感染的細(xì)胞并未觀(guān)察到SGs 的產(chǎn)生。說(shuō)明IBV感染顯著抑制細(xì)胞中SGs的產(chǎn)生。

    作者前期研究觀(guān)察到IBV nsp15 在轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可以抑制PKR 的激活,PKR 激活后進(jìn)一步磷酸化eIF2a,引起細(xì)胞蛋白質(zhì)翻譯抑制,進(jìn)而誘導(dǎo)SGs 產(chǎn)生,因此推測(cè)IBVnsp15可能在病毒抑制SGs產(chǎn)生過(guò)程中發(fā)揮作用。作者發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染nsp15-WT 后,細(xì)胞中未觀(guān)察到SGs 的產(chǎn)生,而在空載和突變質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組中可以觀(guān)察到30%~40%的細(xì)胞產(chǎn)生SGs。進(jìn)一步利用反向遺傳構(gòu)建拯救病毒株IBV rSD-WT 和EndoU 活性缺失病毒株(rSD-H238A 和rSD-Y334A),將上述拯救病毒株及親本病毒感染CEK 細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)親本病毒感染后未觀(guān)察到明顯的SGs產(chǎn)生;但當(dāng)rSD-H238A和rSDY334A 感染后觀(guān)察到明顯的SGs 形成,同時(shí)病毒復(fù)制出現(xiàn)缺陷。以上結(jié)果表明,nsp15是IBV抑制SGs形成的關(guān)鍵蛋白,且抑制功能與蛋白的EndoU活性相關(guān)。

    IBV nsp15 EndoU 活性缺失導(dǎo)致病毒在CEK 細(xì)胞中的復(fù)制能力下降,且病毒N蛋白的分布形態(tài)與親本病毒也存在差異,其是否與誘導(dǎo)SGs 產(chǎn)生有關(guān),為闡明這一問(wèn)題,作者在研究中對(duì)EndoU活性缺失病毒株感染細(xì)胞后SGs相關(guān)蛋白TIA1的分布形態(tài)以及與病毒N 蛋白和dsRNA 的定位情況進(jìn)行觀(guān)察,發(fā)現(xiàn)TIA1 蛋白從原來(lái)的彌散分布的形態(tài)聚集成為較大的顆粒狀態(tài),表現(xiàn)出一種非典型的SGs 的形態(tài),且與病毒的N蛋白和dsRNA 存在部分共定位情況。作者推測(cè)TIA1蛋白可能是在病毒EndoU 活性缺失之后影響病毒復(fù)制的關(guān)鍵因素,接著在CEK 細(xì)胞中過(guò)表達(dá)雞源TIA1蛋白,TIA1 蛋白穩(wěn)定表達(dá)后進(jìn)行病毒感染,發(fā)現(xiàn)感染后12 h,轉(zhuǎn)染PRK-EGFP(對(duì)照組)和PRK-EGFPTIA1(實(shí)驗(yàn)組)細(xì)胞中,N 蛋白的合成量未見(jiàn)明顯差異,但是到24 h,過(guò)表達(dá)TIA1 蛋白的CEK 細(xì)胞N 蛋白的合成出現(xiàn)明顯抑制,而表達(dá)EGFP 的細(xì)胞中N 蛋白的合成顯著增多。檢測(cè)CEK 細(xì)胞過(guò)表達(dá)TIA1 后IBV 的復(fù)制動(dòng)態(tài),同樣驗(yàn)證了這一結(jié)果,表明在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)TIA1 蛋白可以影響IBV 的復(fù)制,提示SGs相關(guān)蛋白TIA1可能是潛在的抗病毒因子之一。

    該研究證明了QX 型IBV 感染后不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生明顯的SGs,且IBV nsp15 蛋白的EndoU 活性是抑制SGs 產(chǎn)生的關(guān)鍵因素,同時(shí)SGs 相關(guān)蛋白TIA1 是潛在的抗病毒因子,為后續(xù)深入闡明IBV nsp15 蛋白調(diào)控冠狀病毒復(fù)制的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

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